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Western blot检测家兔动脉组织蛋白质表达条件的优化 被引量:7
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作者 马艳琴 孙子龙 +2 位作者 王彬 郭超 陈鹏晓 《农学学报》 2011年第4期52-56,共5页
蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,... 蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,以家兔动脉组织血管细胞粘附分子-1为目标蛋白,从电泳条件、抗体浓度、抗体孵育时间、温度及方法、免疫显色方法等方面进行了改良,成功建立了快速、灵敏、特异的蛋白质免疫印记技术体系;并比较了3种常用的酶免疫显色技术:3,3’-二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)显色、增强化学发光法(enhanced chemil luminescence,ECL)X光片曝光及ECL化学发光冷却电感耦合成像系统(cooled charged-coupled device,CCD)成像的敏感性。结果表明ECL化学发光法比DAB显色法敏感性高出2~10倍,其中CCD系统敏感性高于X光片4倍,且操作简便,是最理想的检测方法。 展开更多
关键词 蛋白质免疫印记技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳 增强化学发光法 冷却电感耦合成像系统
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Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究 被引量:1
2
作者 范奎奎 李强 +3 位作者 杨文雅 潘登 李海军 杜晨光 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期841-846,共6页
旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白... 旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P<0.01)和8.6的转膜电压及功率(P<0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P<0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P<0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。 展开更多
关键词 蛋白印迹 背肩胛骨棕色脂肪组织 转膜液 黑皮质素-4型受体
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冷刺激不同时间仔猪3种组织HSP70表达的Western blot检测分析 被引量:2
3
作者 计红 吴永魁 +1 位作者 李士泽 杨焕民 《黑龙江八一农垦大学学报》 2010年第2期44-47,共4页
采用50日龄的雄性"军牧一号"仔猪进行冷刺激试验,分别在冷刺激0、0.5、3、6、12、24h与应激恢复0.5、3、6、12、24、48h共12个时间点采取仔猪肝脏、脾脏和股二头肌样品。利用Western blot检测冷刺激(-7±2℃)不同时间仔... 采用50日龄的雄性"军牧一号"仔猪进行冷刺激试验,分别在冷刺激0、0.5、3、6、12、24h与应激恢复0.5、3、6、12、24、48h共12个时间点采取仔猪肝脏、脾脏和股二头肌样品。利用Western blot检测冷刺激(-7±2℃)不同时间仔猪肝脏、脾脏与股二头肌HSP70的表达量,探讨冷刺激对机体3种主要器官内HSP70表达量的影响。结果显示仔猪肝脏、脾脏和股二头肌中HSP70的表达量都以不同程度的升高,而后呈现先下降再升高的变化趋势。结果提示肝脏、脾脏和股二头肌3种组织尤以肝脏HSP70表达量变化明显,提示冷应激反应中代谢最旺盛的器官肝脏中物质代谢可能与HSP70的表达量有关。 展开更多
关键词 仔猪 HSP70 冷应激 western blot
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柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白质Western blot分析
4
作者 李娜 覃磊 +2 位作者 严佳文 陈佩 邓子牛 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期300-303,共4页
利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质... 利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性. 展开更多
关键词 柑橘叶片 蛋白质 溃疡病 免疫印记
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肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测 被引量:1
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作者 张利涛 刘慧琳 曹以诚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期100-104,共5页
研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表... 研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。 展开更多
关键词 RNAI 组织特异性siRNA 肝脏特异性 EGFP western blotTING
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Western blot检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达 被引量:1
6
作者 柳莉丹 王晓华 +1 位作者 刘家蕊 陈永锋 《皮肤性病诊疗学杂志》 2019年第4期221-224,共4页
目的:检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达水平。方法:收集15例寻常型银屑病患者皮损和10例正常对照组皮肤组织标本,提取总蛋白,采用Western blot技术检测两组组织中C/EBPβ蛋白的表达水平,采用Pearson相关性分析评估C/EBPβ蛋... 目的:检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达水平。方法:收集15例寻常型银屑病患者皮损和10例正常对照组皮肤组织标本,提取总蛋白,采用Western blot技术检测两组组织中C/EBPβ蛋白的表达水平,采用Pearson相关性分析评估C/EBPβ蛋白表达水平与患者PASI评分的相关性。结果:寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ蛋白表达水平(0.84±0.41),明显低于正常对照组(1.15±0.26),差异有统计学意义(t=2.12,P<0.05)。Pearson相关性分析显示C/EBPβ蛋白表达量与患者PASI评分呈负相关性(r=-0.66,P<0.05)。结论:C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中表达下调,为后续深入研究C/EBPβ蛋白在银屑病发病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 寻常型银屑病 C/EBPβ蛋白 western blot
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赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量:9
7
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
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用 Western Blot 法鉴定感染鸡外周血淋巴细胞中马立克氏病毒抗原 被引量:3
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作者 秦爱建 崔治中 TannockAGreg 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期524-529,共6页
马立克氏病毒是鸡的一种高度致肿瘤性疱疹病毒,主要以淋巴瘤为特征,有关该病毒的致病机理还不清楚。本研究利用澳大利亚分离的MDV致病毒株MPF57感染1日龄SPF雏鸡,并在感染后4周对其外周血淋巴细胞中的MDV特异性抗原... 马立克氏病毒是鸡的一种高度致肿瘤性疱疹病毒,主要以淋巴瘤为特征,有关该病毒的致病机理还不清楚。本研究利用澳大利亚分离的MDV致病毒株MPF57感染1日龄SPF雏鸡,并在感染后4周对其外周血淋巴细胞中的MDV特异性抗原进行了检测。结果表明,临床上呈急性感染并伴有明显症状的鸡的外周血淋巴细胞中的MDV抗原分子量主要为28、73、60和49kDa;而无明显症状的鸡的外周血淋巴细胞中的MDV抗原分子量主要为73kDa。试验证明,Westernblot是一种较好的检测病毒抗原的方法,可以检测到荧光抗体方法检测不到的淋巴细胞中的MDV特异抗原。 展开更多
关键词 马立克氏病毒 抗原 淋巴细胞 免疫印迹 鸡病
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豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析 被引量:1
9
作者 张倩 李作磊 +5 位作者 尚清炎 范希萍 苟惠天 韩进欢 韩乐乐 孙晓林 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期11-14,20,共5页
为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶... 为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础. 展开更多
关键词 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹 豆状带绦虫 抗原
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不同方法检测非先天性梅毒患儿体内梅毒抗体衰减规律的应用评价
10
作者 徐敬轩 彭文红 +6 位作者 王佳丽 钱云芳 赵仙华 冷柠 杨勇 储磊 谢而付 《临床检验杂志》 2025年第2期88-91,共4页
目的探讨不同检测方法在监测非先天性梅毒患儿体内梅毒特异性抗体衰减规律中的应用价值。方法纳入80例非先天性梅毒患儿,采集出生后血清标本,分别用电化学发光法(ECLIA)、免疫印迹法(WB)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试... 目的探讨不同检测方法在监测非先天性梅毒患儿体内梅毒特异性抗体衰减规律中的应用价值。方法纳入80例非先天性梅毒患儿,采集出生后血清标本,分别用电化学发光法(ECLIA)、免疫印迹法(WB)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测梅毒特异性抗体。每3个月随访1次,直至ELISA和TRUST结果转阴。结果ECLIA法显示,非先天性梅毒患儿体内梅毒特异性抗体水平在出生后2~3个月内可降至出生时的25%,且衰减速度与初始浓度无关。WB法提示,非先天性梅毒患儿出生时的特异性IgG条带与母体一致,其消退顺序依次为TPN47、TPN15、TPN45和TPN17。受方法学限制,ELISA法在高浓度抗体存在时,出生后前3个月吸光度变化不明显,但对低浓度抗体的检出灵敏度高。以ELISA阳性为参考,比较ECLI、TPPA和WB方法的检出率:出生时分别为100%、100%和90%,3月龄时为100%、100%和75%,6月龄时为100%、46%和15%,9月龄时为83%、33%和0%。TRUST阳性率在出生时为17.5%,3月龄随访时均转阴。结论梅毒特异性IgG抗体可完全传递给胎儿,并在出生后按一定规律消退。综合分析4种方法的检测结果,ECLIA法动态检测可在随访3个月时提前判断非先天性梅毒风险或终止随访,WB法早于TPPA法提示阴转,而ELISA法需随访时间最长。 展开更多
关键词 妊娠梅毒 甲苯胺红不加热血清试验 酶联免疫吸附试验 电化学发光法 免疫印迹法
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过敏性疾病患者特异性免疫球蛋白E分布特征的分析
11
作者 赵鑫 叶蕊琪 +1 位作者 强雪芹 杨玉洁 《临床医药实践》 2025年第2期117-121,共5页
目的:探讨过敏性疾病患者过敏原特异性免疫球蛋白E(sIgE)水平对过敏性疾病的诊断、治疗及预防的意义。方法:采用回顾性设计,利用帝肯TECAN全自动蛋白印迹仪和浩欧博过敏原sIgE抗体检测试剂盒,对2020年1月-2021年12月就诊的3260例具有过... 目的:探讨过敏性疾病患者过敏原特异性免疫球蛋白E(sIgE)水平对过敏性疾病的诊断、治疗及预防的意义。方法:采用回顾性设计,利用帝肯TECAN全自动蛋白印迹仪和浩欧博过敏原sIgE抗体检测试剂盒,对2020年1月-2021年12月就诊的3260例具有过敏症状患者的总免疫球蛋白E(IgE)和sIgE进行定量检测。结果:随着年龄的增长,不同性别人群总IgE阳性率均呈先上升后下降的趋势。男性和女性在婴儿、儿童和青年三个年龄段的总IgE阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。男性在青年时期(19~<36岁)的总IgE阳性率(66.87%)最高;女性在儿童时期(5~<12岁)的总IgE阳性率(71.96%)最高。尘螨/粉螨、屋尘和猫毛皮屑/狗毛皮屑是常见的吸入性过敏原,牛奶、牛肉/羊肉和蛋清/蛋黄则是常见的食入性过敏原。在不同年龄段中,除婴儿(<1岁)外,吸入性过敏原的阳性率普遍高于食入性过敏原。在不同性别比较中,吸入性过敏原阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。女性食入性过敏原(芒果/菠萝/苹果/桃子/草莓)的阳性率显著高于男性(P>0.05)。食入性和吸入性过敏等级低中度患者占比较高,过敏等级越高的患者占比越少。过敏原致敏数量分析显示,大部分患者对1种或2种过敏物质呈阳性反应。结论:过敏性疾病患者中过敏原sIgE在不同性别不同年龄段中的分布存在差异,过敏原检测能够为过敏性疾病的预防、诊断和治疗提供依据,有助于实现更精准的个体化医疗。 展开更多
关键词 过敏性疾病 特异性免疫球蛋白E 性别差异 年龄分布 免疫印迹法
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抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析 被引量:21
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作者 陈颖 李强 +2 位作者 李玲 韩一凡 田颖川 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期274-276,共3页
抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析陈颖,李强,李玲,韩一凡,田颖川(中国林业科学研究院林业研究所北京100091)(中国科学院微生物研究所北京100080)关键词Bt.基因,转基因欧洲黑杨,Western印... 抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析陈颖,李强,李玲,韩一凡,田颖川(中国林业科学研究院林业研究所北京100091)(中国科学院微生物研究所北京100080)关键词Bt.基因,转基因欧洲黑杨,Western印迹法WESTERNBLOTANAL... 展开更多
关键词 转基因 黑杨 western 印迹法 抗虫性
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Western斑点印迹法检测致病性副溶血弧菌 被引量:1
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作者 杨靖亚 张建 +3 位作者 赵勇 陶妍 陆小凡 晁若瑜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第20期413-416,共4页
目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的直接耐热溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)进行分离纯化,建立Western斑点印迹法技术检测致病性副溶血弧菌的方法。方法:用直接耐热溶血毒素免疫小鼠得到特异性抗血清,利用... 目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的直接耐热溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)进行分离纯化,建立Western斑点印迹法技术检测致病性副溶血弧菌的方法。方法:用直接耐热溶血毒素免疫小鼠得到特异性抗血清,利用棋盘方法确定免疫血清最佳工作浓度,并对致病性与非致病性副溶血弧菌分别进行特异性测定。结果:最佳免疫血清最佳工作浓度为1:3200;检测致病性副溶血弧菌为阳性,非致病性副溶血弧菌属呈阴性。结论:Western斑点印迹法技术可以特异性检测致病性副溶血弧菌,灵敏度高、操作简单,可用肉眼判定结果。 展开更多
关键词 耐热直接溶血毒素 western斑点印迹 致病性副溶血弧菌 检测
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医学生物化学实验教学与思政教育融合探索
14
作者 武丽涛 李梦瑶 +8 位作者 闫小飞 宁启兰 蒋小英 杨旭东 蓝茜 蒋晓刚 吴锋 雷莉 李冬民 《医学教育研究与实践》 2025年第1期81-86,101,共7页
基于免疫印迹(Western blotting)实验,探讨在医学生物化学实验教学中引入思想政治教育的重要性及其实践方法,旨在提高实验教学的思政水平,及时跟进思政教育融入高校实验课堂的实效性。Western blotting实验作为生物化学领域的重要实验技... 基于免疫印迹(Western blotting)实验,探讨在医学生物化学实验教学中引入思想政治教育的重要性及其实践方法,旨在提高实验教学的思政水平,及时跟进思政教育融入高校实验课堂的实效性。Western blotting实验作为生物化学领域的重要实验技术,不仅是培养学生实验技能的重要手段,也是教师进行思政教育的一项重要载体。在Western blotting实验中探索思政元素与教育教学的相互联系是目前较为新颖的一个教学实践角度,将科学实验与思想政治教育相结合,以培养学生在科学精神、合作精神、创新精神等方面的能力,以及社会责任感。将思想政治教育有效地融入科学实验中,培养学生的综合素质,促进创新型医学高素质人才的全面发展。 展开更多
关键词 免疫印记 实验教学 思政教育 科学精神 人才培养
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鸡肌肉组织实时荧光定量PCR及Western杂交内参基因的筛选 被引量:3
15
作者 王红杨 刘冉冉 +5 位作者 赵桂苹 郑麦青 李庆贺 李鹏 刘丽 文杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1107-1113,共7页
本研究对5种常用"持家基因"作为鸡肌肉组织发育早期基因和蛋白检测内参基因的有效性进行了评价,为鸡肌肉发育相关分子检测中内参基因的选择提供科学依据。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术,分别检测了鸡12胚龄... 本研究对5种常用"持家基因"作为鸡肌肉组织发育早期基因和蛋白检测内参基因的有效性进行了评价,为鸡肌肉发育相关分子检测中内参基因的选择提供科学依据。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术,分别检测了鸡12胚龄、17胚龄、1日龄和14日龄胸肌中β肌动蛋白(ACTB)、β微管蛋白(TUBB)、TATA结合蛋白(TBP)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和热休克蛋白70(HSP70)的mRNA和蛋白表达水平。结果表明,在鸡发育早期胸肌组织中,仅HSP70mRNA和蛋白在各阶段间表达水平差异不显著,GAPDH、TUBB、TBP和ACTB的mRNA和蛋白表达水平在检测的各个时间点间均差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。HSP70更适合作为鸡肌肉发育早期基因和蛋白检测的内参基因。本结果为研究发育期鸡肌肉组织相关功能基因和蛋白提供了必要的方法学基础,对其他物种的相关研究也有重要借鉴意义。 展开更多
关键词 肌肉组织 早期发育阶段 实时荧光定量PCR western杂交 内参基因
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2021—2023年贵港市HIV-1感染者的流行特征和检测结果分析
16
作者 韦文翠 郑萍佐 +3 位作者 邵玉兰 甘健燕 张婧萱 黄运轩 《中国医药科学》 2024年第14期126-129,166,共5页
目的分析2021—2023年贵港市人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)抗体阳性者的免疫蛋白印迹试验(WB)带型特征,探讨免疫状况及相关指标在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)发展中的作用。方法对2021—2023年1719份经贵港市AIDS确证实验室确证为HIV-1抗... 目的分析2021—2023年贵港市人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)抗体阳性者的免疫蛋白印迹试验(WB)带型特征,探讨免疫状况及相关指标在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)发展中的作用。方法对2021—2023年1719份经贵港市AIDS确证实验室确证为HIV-1抗体阳性且在治疗前开展了CD4^(+)T淋巴细胞检测的样本,用SPSS 25.0分析人口学特征和实验室相关检测结果。结果1719例HIV-1抗体阳性以男性、40岁以上、已婚、农民、文化程度较低、医疗机构临床筛查为主;CD4^(+)T淋巴细胞计数与年龄呈负相关,与WB条带数呈正相关(P<0.05)。带型p55、p39、p17检出阳性率在不同免疫程度和病程间差异有统计学意义(P<0.05)。结论农民仍然是贵港市AIDS宣教、检测工作的重点人群,p55、p39和p17可作为疾病发展和免疫情况的一个潜在判别依据。 展开更多
关键词 HIV-1抗体确证阳性 免疫蛋白印迹法 条带 免疫情况
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HIV-1感染者蛋白印迹带型特征与免疫功能相关性分析
17
作者 董芬芳 许雅辉 吴来州 《皮肤性病诊疗学杂志》 2024年第6期391-396,共6页
目的通过对HIV-1感染者蛋白印迹带型(WB)和CD4^(+)T淋巴细胞(CD4细胞)计数结果的分析,探讨不同WB带型特征与感染者免疫状态的相关性,从而为临床诊疗提供依据。方法纳入271例HIV-1型感染者,应用流式细胞术和免疫印迹法分别检测感染者静... 目的通过对HIV-1感染者蛋白印迹带型(WB)和CD4^(+)T淋巴细胞(CD4细胞)计数结果的分析,探讨不同WB带型特征与感染者免疫状态的相关性,从而为临床诊疗提供依据。方法纳入271例HIV-1型感染者,应用流式细胞术和免疫印迹法分别检测感染者静脉血中CD4细胞计数以及WB带型,分析不同年龄、性别与免疫缺陷程度、WB带型的关系,以及不同免疫缺陷程度与WB带型的关系。结果不同年龄组间的免疫缺陷程度差异有统计学意义(χ^(2)=28.65,P<0.001),而单个抗体条带分布差异无统计学意义(均P>0.05)。不同性别间仅p55抗体条带的分布差异具有统计学意义(χ^(2)=4.51,P<0.05),而免疫缺陷程度差异无统计学意义(P>0.05)。在不同免疫状态下,WB带型中p31、p55、p17抗体条带的分布差异有统计学意义(χ^(2)值分别为7.87、19.44、7.95,均P<0.05),HIV-1抗体全条带、gag基因编码全带、p55+p31缺失、p55+p17缺失的检出率差异有统计学意义(χ^(2)值分别为4.75、16.23、8.51、8.00,均P<0.05)。结论感染者的免疫状态会影响WB带型特征,其中p17抗体与p55抗体条带同时丢失可能与HIV感染程度有关。WB带型分析对治疗艾滋病的疗效评价和免疫重建监测可能有一定的帮助。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 人类免疫缺陷病毒 蛋白印迹试验 CD4^(+)T淋巴细胞 免疫缺陷
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葎草花粉变应原Humj1的重组表达、纯化及鉴定
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作者 尹希瑶 谷新雨 +2 位作者 李忠波 王坚 冀伟 《长春理工大学学报(自然科学版)》 2024年第4期101-106,共6页
通过载体构建、原核表达和纯化葎草花粉主要变应原Humj1,获得具有免疫活性的葎草变应原Humj1重组蛋白。经密码子优化,合成葎草Humj1基因,设计含有酶切位点的引物,将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,构建克隆载体,获得的目的片段与pET-28a... 通过载体构建、原核表达和纯化葎草花粉主要变应原Humj1,获得具有免疫活性的葎草变应原Humj1重组蛋白。经密码子优化,合成葎草Humj1基因,设计含有酶切位点的引物,将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,构建克隆载体,获得的目的片段与pET-28a表达载体连接,成功构建了pET-28a-Humj1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21宿主菌中得到高效表达,并通过Ni-NTA亲和层析法纯化获得融合蛋白。对表达蛋白的生物信息学分析,测定其为亲水性蛋白,有较强的抗原性,主要以无规则卷曲结构为主。采用Western blotting免疫印迹法研究证明重组蛋白能与葎草花粉过敏患者血清结合,具有免疫活性,对将来研制葎草抗原的单克隆抗体以及脱敏疫苗的制备具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 葎草花粉变应原 原核表达 蛋白纯化 免疫印迹
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万寿菊八氢番茄红素合成酶基因的克隆与表达分析
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作者 邱雅琼 张恩启 +3 位作者 卢熠灿 田彬 鲁传富 牛向丽 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第11期1547-1552,共6页
八氢番茄红素合成酶(PSY)是植物类胡萝卜素生物合成途径中的主要限速酶,催化番茄红素的合成。万寿菊(Tagetes erecta L.)花中富含类胡萝卜素,提示其合成途径催化酶基因可能具有较高活性。文章利用转录组数据克隆获得编码万寿菊PSY的基因... 八氢番茄红素合成酶(PSY)是植物类胡萝卜素生物合成途径中的主要限速酶,催化番茄红素的合成。万寿菊(Tagetes erecta L.)花中富含类胡萝卜素,提示其合成途径催化酶基因可能具有较高活性。文章利用转录组数据克隆获得编码万寿菊PSY的基因TePSY,连接于克隆载体pEASY-Blunt。测序结果显示,TePSY全长读码框为1272 bp,编码相对分子质量约48 kDa的亲水性蛋白;进化分析表明,PSY基因在植物中保守存在,TePSY与同科植物向日葵同源基因相似性最高;实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)显示,TePSY在万寿菊花组织中表达,丰度先升高,至成熟时降低。将TePSY用于构建植物表达载体pBTEX-TePSY,进一步利用农杆菌介导法在烟草叶片中瞬时表达,并进行蛋白印迹(western blot,WB)检测,结果表明,在植物体内表达预期大小TePSY蛋白产物,可用于后续TePSY功能分析。 展开更多
关键词 万寿菊 八氢番茄红素合成酶(PSY) 基因克隆 表达分析 蛋白印迹(WB)
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甘草总黄酮对高脂条件下罗非鱼肝损伤的保护作用 被引量:5
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作者 杜金梁 曹丽萍 +6 位作者 贾睿 顾郑琰 何勤 徐跑 JENEY Galina 马玉忠 殷国俊 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第10期1826-1835,共10页
为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总... 为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总黄酮),每组30尾。饲喂90 d后,采集罗非鱼各实验组肝,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Western blotting法检测肝中核转录因子-κB P65(NF-κB P65)和核转录因子-κB C-Rel(NF-κB C-Rel)蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝中微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTTP)和载脂蛋白B100(ApoB100)基因表达情况。结果表明:与对照组相比,高脂饲料模型组罗非鱼肝匀浆中TG、TC、MDA含量极显著(P<0.01)升高,GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均极显著(P<0.01)降低;MTTP和ApoB100 mRNA表达水平降低(P<0.01或P<0.05);Western blotting结果显示,NF-κB P 65和C-Rel蛋白表达水平升高。饲料中加入甘草总黄酮后,与高脂饲料模型组相比,罗非鱼肝中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平不同程度提高,TC、TG、MDA含量和NF-κB P65、C-Rel蛋白表达水平不同程度降低,MTTP和ApoB100的mRNA表达水平升高,以0.50 g·kg^(-1)甘草总黄酮组效果较好。说明甘草总黄酮对于罗非鱼脂肪肝损伤具有一定的保护作用,可以缓解高脂饲料造成的脂肪肝损伤。 展开更多
关键词 甘草 总黄酮 罗非鱼 脂肪肝 基因表达 western blotting
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