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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western-blot分析 被引量:5
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作者 安玉麟 孙瑞芬 +2 位作者 张鹤龄 郭树春 闫素丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期84-87,共4页
为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,... 为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,超声波粉碎细菌细胞,SDS-PAGE电泳检测,GOD基因获得了表达,表达的融合蛋白相对分子质量为66.5 kDa。用市售葡萄糖氧化酶免疫家兔获得抗血清,酶联法(ELISA)测定其效价为106,West-ern-blot分析证明表达的融合蛋白与兔抗GOD血清有较强的特异性,为黑曲霉3.758葡萄糖氧化酶(GOD)抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉3.758 葡萄糖氧化酶基因 融合表达 抗血清 ELISA western-blot
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赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量:9
2
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
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Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性 被引量:1
3
作者 邓灵福 祁超 +2 位作者 李文新 冯玉文 王莹莹 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2006年第1期79-81,共3页
利用Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性,结果显示目标蛋白有明显的显色带.本方法灵敏、准确、简单,适用于重组人纽表位肽12抗原特异性检测.
关键词 western-blot SDS-PAGE 抗原特异性
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豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析 被引量:2
4
作者 张倩 李作磊 +5 位作者 尚清炎 范希萍 苟惠天 韩进欢 韩乐乐 孙晓林 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期11-14,20,共5页
为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶... 为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础. 展开更多
关键词 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹 豆状带绦虫 抗原
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果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化
5
作者 张勇 侍婷 +1 位作者 吴欣欣 高志红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期977-982,共6页
[目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较... [目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较2种提取方法的优劣,并通过设置不同的蛋白上样量(20、30、40、50及60μg)、转膜时间(40、60及90 min)、一抗稀释比例(1∶500、1∶1 000、1∶2 000及1∶5 000)以及一抗孵育时间(室温1 h、室温2 h及4℃过夜)等组合,研究适合果梅花芽CCo AOMT蛋白Western-blot的最佳体系。[结果]成功建立了快速、灵敏、特异的Western-blot体系,确定了果梅花芽CCoAOMT蛋白的Western-blot试验条件。SDS上样缓冲液直接提取法提取蛋白快速、高效,最佳条件为以蛋白上样量30μg、转膜1 h、一抗稀释比例1∶1 000以及一抗孵育2 h。[结论]本试验建立了简单、快速和重复性好的SDS上样缓冲液直接提取法以及优化的上样量、转膜时间和抗体浓度等Western-blot体系,为梅等木本植物开展Western-blot研究提供依据。 展开更多
关键词 果梅 花芽 蛋白提取 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) western-blot
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茶树叶片类脱水素蛋白的Western-blot分析 被引量:4
6
作者 舒锡婷 欧阳娜 +2 位作者 江昌俊 邓威威 李叶云 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2448-2454,共7页
为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示:(1)茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,... 为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示:(1)茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,满足茶树Western-blot技术要求。(2)在不同季节及越冬期中发现14~95kD共9种不同分子量的茶树类脱水素蛋白,其中95、65、48、37、34和14kD等6种蛋白表达量较为稳定,季节与越冬期变化不明显;58kD脱水素仅在冬季表达,越冬期不断上升,2月份增加到最高,表达丰度高;28kD脱水素蛋白在冬季表达量高,越冬期与茶树抗寒力变化规律一致;21kD脱水素在夏季和越冬期后期有较高的表达。研究表明,这3种脱水素可能在茶树抗逆中起着重要作用。 展开更多
关键词 茶树 脱水素 蛋白质提取 蛋白质印迹法
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急性高原低氧诱导心肌损伤小鼠模型免疫印迹实验内参蛋白的选择
7
作者 张小玉 张依曼 +4 位作者 刘佳 来宝长 乌仁塔娜 田红燕 殷倩 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第5期684-694,共11页
目的 急性高原低氧通过调控蛋白表达诱导心肌细胞损伤,常用Western Blot检测蛋白变化,但内参蛋白的选择及其变化尚无系统研究。方法 本文主要应用低压低氧大舱模拟6000 m海拔低氧24和72 h,苏木素-伊红(HE)染色确定心肌损伤模型的成功建... 目的 急性高原低氧通过调控蛋白表达诱导心肌细胞损伤,常用Western Blot检测蛋白变化,但内参蛋白的选择及其变化尚无系统研究。方法 本文主要应用低压低氧大舱模拟6000 m海拔低氧24和72 h,苏木素-伊红(HE)染色确定心肌损伤模型的成功建立;Western Blot检测不同内参蛋白vinculin、α-tubulin、EIF5、β-actin、GAPDH、cyclophilin B和cofilin表达,同时应用丽春红S染色和考马斯亮蓝染色检测总蛋白的表达;进一步体外应用成年小鼠心肌细胞(AMCMs)建立低氧12和24 h损伤模型,TUNEL染色确定细胞损伤模型的建立,Western Blot检测上述不同内参蛋白表达,同时应用丽春红S染色和考马斯亮蓝染色检测总蛋白的表达。结果 在成功建立急性高原低压低氧24和72 h模型的基础上,总蛋白表达量一致;内参蛋白vinculin、EIF5、β-actin、cyclophilin B和cofilin表达量一致;α-tubulin在低压低氧24 h组和平原对照组表达一致,低压低氧72 h组较平原对照组明显下降;而GAPDH在低压低氧24 h组和低压低氧72 h组表达较平原对照组明显上升。在成功建立低氧12和24 h诱导AMCMs损伤的基础上,总蛋白表达量一致,内参蛋白EIF5和β-actin表达量一致,vinculin、α-tubulin、GAPDH、cyclophilin B和cofilin在低氧12 h组和低氧24 h组较常氧对照组表达升高。结论 急性高原低压低氧和体外低氧诱导心肌细胞损伤模型进行Western Blot时,EIF5和β-actin可作为合适的内参蛋白选择,选择总蛋白作为内参更客观。 展开更多
关键词 高原低氧 心肌细胞损伤 免疫印迹实验 内参蛋白
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条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠构建与鉴定
8
作者 侯梦龙 齐心语 +4 位作者 吴建凤 廖启超 马杰 周磊 李一星 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第8期1432-1439,共8页
目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平... 目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平检测HLF抑制或过表达效果。将HLF flox/flox转基因小鼠与Pdx1-Cre+/-小鼠(C57BL/6J)杂交繁育,获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,通过RT-qPCR技术和Western blot检测HLF基因在胰岛β细胞敲除小鼠(HLF flox/flox Cre+/-)和对照小鼠(HLF flox/flox)中的mRNA水平和蛋白水平表达差异,验证敲除效果。同时取2组小鼠的胰岛组织制作石蜡切片并进行苏木精-伊红(HE)染色分析。结果HLF基因抑制或过表达对MIN6细胞增殖无显著影响。在MIN6细胞中抑制HLF基因,其mRNA表达水平较对照组下降了74%,蛋白表达水平较对照组下降了60%;过表达HLF基因后,其mRNA表达水平为对照组的2.13倍,蛋白表达水平为对照组的1.8倍。敲除小鼠的HLF基因mRNA表达水平较对照组下降了89%,蛋白表达水平较对照组下降了65%。HE染色结果显示:敲除小鼠胰岛组织内细胞形态与对照小鼠无明显差异。抑制HLF使MIN6细胞中糖原含量提高约20%。结论成功构建HLF基因敲除小鼠,为研究HLF在糖尿病发病机制中的作用提供了动物模型。 展开更多
关键词 肝白血病因子 条件性胰岛β细胞 RT-QPCR Western blot 基因敲除 C57BL/6J小鼠
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猪I类白细胞抗原单克隆抗体的制备及其在非洲猪瘟病毒感染机制研究中的初步应用
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作者 王可欣 Weldu Tesfagaber +7 位作者 王婉 尹丽 孔惠 张振江 李芳 高彩霞 步志高 赵东明 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期90-95,共6页
猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体... 猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体(MAb),本研究将SLA I-1*04:01等位基因胞外区序列与麦芽糖结合蛋白(MBP)序列连接,在大肠杆菌原核表达系统中表达,获得可溶性重组蛋白MBP-SLA I。经亲和层析纯化后,采用MBP-SLA I免疫BALB/c小鼠3次,采用ELISA检测小鼠血清抗体水平,对血清抗体效价在1:10 000以上的小鼠进一步冲击免疫后,分离小鼠脾脏B淋巴细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合。采用ELISA方法筛选阳性的杂交瘤细胞进行3次克隆纯化,最终筛选得到稳定分泌SLA I抗体的杂交瘤细胞株MAb-1A11。经ELISA检测纯化后的MAb-1A11效价可达1:3 200,经小鼠MAb抗体亚类鉴定试剂盒鉴定其重链为IgG2b,轻链为κ。采用western blot检测该抗体的特异性,结果显示,MAb-1A11能够识别猪肺泡巨噬细胞(PAM)表达的内源性SLA I,在42 ku处出特异性条带,而对HEK293T细胞中表达的同源物人白细胞抗原无交叉识别作用。利用MAb-1A11为一抗,采用western blot进一步检测非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/18-6GD株感染的PAM中SLA I的表达水平,结果显示,随着ASFV感染时间的延长,SLA I表达水平出现轻微下降。本研究制备了SLA I的MAb,并初步将其应用于ASFV感染机制的研究中,为深入了解SLA I所受调控的机制提供了可靠工具。 展开更多
关键词 猪白细胞抗原I 单克隆抗体 WESTERNBLOT 非洲猪瘟病毒
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自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究
10
作者 王鹏 张德宝 +5 位作者 张杨 张海斌 时嘉 张少杰 李树文 吴一民 《中国临床解剖学杂志》 北大核心 2025年第1期69-75,共7页
目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验... 目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 黄韧带 纤维瘢痕 TGF-β1/Smad3信号通路 Western blot RT-PCR技术
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CSF1R^(+/-)小鼠的构建和基因鉴定
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作者 周园园 刘崇 +4 位作者 王安琪 张慧茹 邱佳琪 朱梦娟 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期884-889,共6页
目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外... 目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外显子下游插入一个双侧有Loxp位点的新霉素抗性盒(PGK-neo)。将线性化的靶向载体电穿孔至胚胎干细胞(ES)。将正确靶向的ES注射到C57BL/6J小鼠的胚泡中得到嵌合小鼠,与透明带3-Cre(Zp3-Cre)小鼠进行繁殖。新生小鼠出生后9~14天编号并剪鼠尾,提取小鼠的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出CSF1R^(+/-)小鼠。应用流式细胞术检测小鼠巨噬细胞中CSF1R的表达;Western blot检测小鼠组织中CSF1R的蛋白表达。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,野生小鼠(WT)扩增出453 bp的条带,CSF1R^(+/-)小鼠扩增出453 bp和650 bp的条带。流式细胞术结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠的腹腔来源巨噬细胞(PM)和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中的CSF1R低表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠脾脏、肾脏、脑组织中的CSF1R蛋白低表达(P<0.05)。结论成功构建、繁育和鉴定CSF1R^(+/-)小鼠,为进一步揭示CSF1R在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 CSF1R PCR Western blot 流式细胞术 Cre/Loxp 动物模型
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心脏磁共振组织追踪成像对高原心力衰竭的评估价值
12
作者 梁博深 王磊 +3 位作者 朱琦 方鑫 王春华 郜发宝 《中国医学影像学杂志》 北大核心 2025年第5期479-484,500,共7页
目的 探讨心脏磁共振组织追踪成像评估高原环境下早期心力衰竭(HF)的应用价值。材料与方法 纳入30只雄性SD大鼠,随机分为对照组10只、实验组20只。将实验组大鼠运送至青海高原实验室(平均海拔4 250 m)暴露8周后,分为高原低氧组和高原HF... 目的 探讨心脏磁共振组织追踪成像评估高原环境下早期心力衰竭(HF)的应用价值。材料与方法 纳入30只雄性SD大鼠,随机分为对照组10只、实验组20只。将实验组大鼠运送至青海高原实验室(平均海拔4 250 m)暴露8周后,分为高原低氧组和高原HF组,HF组用5 mg/ml异丙肾上腺素10 mg/(kg.d)连续14 d皮下注射建立HF大鼠模型。然后将大鼠运回平原(平均海拔500 m)进行7T心脏磁共振电影序列扫描。使用CVI 42软件获得心功能参数和心肌应变参数。使用HE染色、Masson三色染色法检测心肌病理变化。采用酶联免疫吸附测定法检测血清中丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶含量。采用Western blot和PCR法检测心肌组织中核因子-E2相关因子2和血红素加氧酶-1表达。结果 与对照组相比,HF组大鼠左心室射血分数降低[(67.06±4.66)%比(61.91±2.11)%;F=4.149,P=0.037],左心室整体环向应变明显降低[(-24.60±0.81)%比(-20.16±1.86)%;F=12.241,P=0.001],病理染色显示心肌细胞出现坏死和间质纤维化。酶联免疫吸附测定结果显示,与对照组比较,HF组中谷胱甘肽过氧化物酶水平降低[(1 079.94±70.58)U比(311.99±39.47)U;F=209.294,P=0.001];丙二醛含量升高[(7.24±2.48)μmol/L比(53.28±4.51)μmol/L;F=156.392,P=0.010)。Western blot结果显示,与对照组比较,HF组心肌组织中核因子-E2和血红素加氧酶-1表达明显降低(1.00±0.00比0.52±0.13;F=26.607,P=0.001]。PCR结果显示HF组心肌组织中核因子-E2和血红素加氧酶-1m RNA表达较对照组明显降低(1.19±0.16比0.31±0.07;F=84.784,P=0.010)。结论 磁共振组织追踪成像可用于早期评估高原环境造成的HF。 展开更多
关键词 心力衰竭 高原 磁共振成像 氧化性应激 大鼠 Sprague-Dawley 酶联免疫吸附测定 印迹法 蛋白质 聚合酶链反应
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猪衣原体ompA基因的原核表达与纯化及其蛋白功能预测
13
作者 李宁倩 禹思宇 +6 位作者 李桐菲 李文超 魏颖 谭建锡 胡忆文 唐连飞 刘伟 《湖南畜牧兽医》 2025年第5期29-33,共5页
为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成... 为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成功构建了重组质粒,并通过SDS-PAGE和Western blot确认该蛋白以包涵体形式表达,分子量约为27 kDa;该蛋白的预测分子质量为23.31921 kDa,理论等电点为4.37,不含跨膜区,属于亲水性蛋白,含有7个抗原决定簇,平均抗原倾向值为1.0316。结果表明:ompA蛋白具备良好的免疫反应性,是免疫反应中的关键成分,适合作为间接ELISA的包被抗原。该研究为深入理解猪衣原体的致病机制及开发相应的防控技术提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪衣原体ompA基因 重组质粒 表达及纯化 Western blot验证 生物信息学预测 间接ELISA
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针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响 被引量:17
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作者 陈金生 宫庆娟 +4 位作者 黄秋兰 罗秀英 越宇 黄乔东 卢振和 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第15期2562-2565,共4页
目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛... 目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛药物治疗,A组在相同药物治疗基础上加针灸治疗。比较两组患者治疗前、治疗后7 d VAS评分和皮疹愈合时间;Western-blot法检测c-FLIP表达,比较正常对照组与急性带状疱疹患者及两组患者治疗前、后血液c-FLIP表达情况。结果:两组患者治疗后VAS评分较治疗前均明显减少(P<0.01),治疗后组间VAS评分比较差异无统计学意义,A组皮疹愈合时间短于P组(P<0.01);急性带状疱疹患者c-FLIP表达比正常人表达明显降低(P<0.01),A组治疗后较治疗前表达升高(P<0.01),P组治疗前、后表达无明显变化。结论:针灸可以调节急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达,促进皮疹愈合。这可能是针灸治疗带状疱疹的细胞免疫机制之一。 展开更多
关键词 针灸疗法 疱疹 带状 C-FLIP 细胞免疫 western-blot
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达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究 被引量:10
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作者 单喜双 岳华梅 +3 位作者 陈细华 叶欢 杨晓鸽 李创举 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期307-314,共8页
为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨... 为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame,ORF)和311 bp的3′UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现,达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明,达氏鲟GH m RNA主要在垂体和下丘脑中表达,且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍;Western-blot研究结果与q RT-PCR一致,仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白,且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示,GH主要定位于垂体中部,下丘脑中也有少量荧光信号;苏木精-伊红组织切片染色研究表明,GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。 展开更多
关键词 达氏鲟 生长激素 q RT-PCR western-blot 荧光免疫组化
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实验性脑挫伤后caspase-1表达的研究 被引量:10
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作者 陶陆阳 陈溪萍 +2 位作者 丁梅 李延阁 官大威 《法医学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,F003,共5页
目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-1表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Western-blotting和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照。结果脑挫伤后1h caspase-... 目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-1表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Western-blotting和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照。结果脑挫伤后1h caspase-1即有表达,24-48h达高峰,挫伤后两周caspase-1阳性细胞仍维持较高水平。阳性细胞多集中于挫伤区及周围带皮质和脑实质内海马区,不同程度脑挫伤各组之间阳性细胞面积存在差异;损伤组caspase-1酶原裂解增加;损伤组caspase-1mRNA表达量明显高于对照组;不同程度脑挫伤组之间于各个时间段caspase-1mRNA表达未见差异。 结论 Caspase-1表达增加,可辅助诊断1h-14d的脑挫伤,并可根据caspase-1阳性细胞面积的变化来确定脑挫伤程度,同时对判断挫伤时间方面也有一定的价值。caspase-1参与脑挫伤后的神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 脑挫伤 CASPASE-1 免疫组织化学 western-blot RT-PCR 神经细胞 法医鉴定 细胞凋亡
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人TNFAIP1基因在常见细胞系中的表达 被引量:7
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作者 杨利平 周爱冬 +4 位作者 李红 张文峰 吴艳阳 张健 韩梅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期918-922,共5页
TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多。该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系... TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多。该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在COS7以及NIH3T3细胞系中高表达,而在HeLa、HepG2、SW480、PanC1、MCF7等癌细胞系中低表达。由此推测TNFAIP1可能在癌症的发生中起到一定的作用。如果把TNFAIP1基因克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,转染到HeLa细胞系中,发现过表达TNFAIP1可促进HeLa细胞的凋亡。 展开更多
关键词 TNFAIP1 肿瘤坏死因子Α 实时定量PCR western-blot
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蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响 被引量:7
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作者 周建娅 唐法娣 +3 位作者 毛国根 邵杰 王砚 卞如濂 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第4期315-318,326,共5页
目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚... 目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 ,测定 THP- 1细胞 NF- κB p6 5亚基 (NF- κB/p6 5 )定位 ;Western- blot法分析细胞核内NF- κB/p6 5水平。结果 :免疫荧光分析显示 ,正常细胞 NF- κB/p6 5荧光标记主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,L PS刺激后 NF- κB/p6 5荧光标记浓集于核区 ,胞浆区少见 ;但经蓝桉油 (10 0 mg/L)预处理后 ,LPS刺激的 THP- 1细胞NF- κB/p6 5荧光标记则主要位于胞浆区 ;Western- blot分析显示 ,在正常 THP- 1细胞核蛋白中有低水平的 NF- κB/p6 5表达 ,经 L PS刺激 ,核内 NF- κB/p6 5表达明显增高 ;蓝桉油预处理后 ,可以抑制 LPS诱导的核内 NF- κB/p6 5高水平表达 ,且呈剂量依赖关系。结论 :蓝桉油预处理阻止了 LPS诱导的 NF- κB/p6 5核转位 ,从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制 LPS刺激引起的 NF- κB核转位活化。 展开更多
关键词 脂多糖类 核因子-ΚB 单核细胞 蓝桉油 显微镜检查 共焦 THP一1细胞株 western-blot
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小麦和荞麦过敏原的分离与免疫学特性初步鉴定 被引量:7
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作者 冼静雯 吴海强 +1 位作者 简晓莉 刘志刚 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期799-803,共5页
为了提取、分离小麦(Triticum aestivum)和荞麦(Fagopyrum esculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结... 为了提取、分离小麦(Triticum aestivum)和荞麦(Fagopyrum esculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结合过敏原的特性,通过免疫印迹(Western-Blotting)鉴定其中的过敏原成分,然后用离子交换层析(DE-52)对总蛋白进行初步分离,并用Western-Blotting鉴定分离后组份的免疫学特性。SDS-PAGE分析显示,小麦蛋白条带共有18条,其中主要条带有12条(55、42、39、36、29、27、23、21、18、15、12、9 kD);荞麦蛋白条带共有17条,其中主要条带有8条(55、44、36、32、22、16、13、10kD)。Western-Blotting鉴定表明,小麦阳性条带有9条(36、32、29、26、23、18、15、12、9 kD),其中23 kD的过敏原特异性最强;荞麦阳性条带有5条(55、36、32、292、2 kD),其中22 kD的过敏原特异性最强。DE-52阴离子交换层析分离后经Western-Blotting分析显示,分离后过敏原的相对含量均有显著提高,且依然具有较强的免疫学活性,如经纯化后荞麦22 kD的过敏原相对含量由10.73%提高到21.07%。初步鉴定出小麦的主要过敏原为23 kD蛋白,而荞麦的主要过敏原为22 kD蛋白。 展开更多
关键词 小麦 荞麦 过敏原 western-blotting 免疫学特性
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CYP3A29稳定表达HepG_2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定 被引量:6
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作者 薛正楷 魏泓 +1 位作者 商海涛 叶彬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期640-644,649,共6页
目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因... 目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究。 展开更多
关键词 巴马小型猪 CYP3A29同工酶 HEPG2 逆转录酶PCR western-blot 硝苯地平
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