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miR394a-FBX6模块调控棉花黄萎病抗性
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作者 廖婵娟 李丹 +6 位作者 赵文军 吴琪 尹秀娟 钟贵买 王智 胡广 翟俊峰 《棉花学报》 北大核心 2025年第3期165-174,I0001,I0002,共12页
【目的】探究ghr-miR394-GhFBX6模块在棉花黄萎病抗性中的功能,为棉花抗病育种提供候选基因。【方法】利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析ghr-miR394a和GhFBX6的表达模式... 【目的】探究ghr-miR394-GhFBX6模块在棉花黄萎病抗性中的功能,为棉花抗病育种提供候选基因。【方法】利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析ghr-miR394a和GhFBX6的表达模式。在棉花中瞬时超表达ghr-miR394a,利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术在棉花中分别瞬时沉默ghr-miR394a和GhFBX6,研究二者在抗黄萎病中的功能。利用5'端RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(5'-RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,5'RLM-RACE)技术并结合荧光素酶(luciferase,LUC)报告系统,分析ghr-miR394a对GhFBX6的调控作用。【结果】qRT-PCR表明,ghr-miR394a在棉花叶片中的表达量较高,其次为茎和根。与清水处理相比,大丽轮枝菌侵染可显著降低根中ghr-miR394a的表达量,显著提高GhFBX6的表达量。与对照植株相比,在棉花中瞬时沉默ghr-miR394a导致病情指数、病株率显著降低,茎段恢复培养后菌丝积累量较少,棉花对黄萎病的抗性增强;而瞬时过表达ghr-miR394a或瞬时沉默GhFBX6则会降低棉花对大丽轮枝菌的抗性,具体表型为二者的病情指数和病株率均显著升高,过表达ghr-miR394a的茎段恢复培养后菌丝积累量较多,GhFBX6沉默棉株茎秆的维管束褐变程度加重。5'RLM-RACE和LUC报告系统结果表明,ghr-miR394a在转录后水平抑制GhFBX6表达。【结论】ghr-miR394a可靶向抑制GhFBX6的表达,且ghr-miR394a和GhFBX6在棉花黄萎病抗性响应中分别发挥负调控和正调控功能。 展开更多
关键词 miR394 GhFBX6 棉花 黄萎病 抗病性 病毒诱导的基因沉默
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旱柳SmERF B3-45的克隆及耐盐功能研究
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作者 华炫 田博雯 +5 位作者 周欣彤 江梓涵 王诗琦 黄倩慧 张健 陈艳红 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2024年第12期124-135,共12页
【目的】验证SmERF B3-45是否在植物响应盐胁迫中起着正向调控的作用,为揭示AP2/ERF转录因子在调控旱柳耐盐性中的作用奠定基础。【方法】分析旱柳AP2/ERF超家族中SmERF B3-45的启动子区顺式作用元件,利用特异性引物克隆得到SmERF B3-45... 【目的】验证SmERF B3-45是否在植物响应盐胁迫中起着正向调控的作用,为揭示AP2/ERF转录因子在调控旱柳耐盐性中的作用奠定基础。【方法】分析旱柳AP2/ERF超家族中SmERF B3-45的启动子区顺式作用元件,利用特异性引物克隆得到SmERF B3-45的CDS全长序列,对其进行生物信息学和亚细胞定位分析,并通过过表达载体的构建转化拟南芥突变体ERFOE1、ERF-OE2和进行病毒诱导的基因沉默(VIGS)阐明其功能。【结果】顺式作用元件分析表明,SmERF B3-45可能参与逆境胁迫响应表达调控途径。RT-qPCR结果显示,NaCl处理可诱导SmERF B3-45的表达,且该基因在旱柳的不同组织中广泛表达。亚细胞定位显示,SmERF B3-45蛋白定位于细胞核。转基因拟南芥中,SmERF B3-45的表达量大幅提高,在盐胁迫条件下,与野生型相比,过表达SmERF B3-45拟南芥的根长显著增加,总蛋白含量、Na+含量、MDA含量和Na+/K^(+)显著降低,CAT含量和K^(+)含量显著升高。基因沉默植株显著下调了SmERF B3-45的表达水平,与对照相比,基因沉默植株的总蛋白含量显著降低,而MDA和脯氨酸含量却显著高于阴性对照植株,并且沉默植株出现了叶片萎蔫,表明SmERF B3-45的沉默降低了旱柳的耐盐性。【结论】SmERF B3-45是植物响应盐胁迫的正向调控转录因子。 展开更多
关键词 旱柳 基因克隆 盐胁迫 ERF转录因子 转基因 病毒诱导的基因沉默(VIGS)
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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建
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作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(VIGS) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建
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GhALMT10在干旱胁迫下的功能鉴定
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作者 马鑫 雷建峰 +4 位作者 黄诗雨 张国帅 郭浩猛 李月 代培红 《棉花学报》 北大核心 2025年第3期175-184,共10页
【目的】探究铝激活苹果酸转运蛋白(aluminum-activated malate transporter,ALMT)家族基因GhALMT10在棉花抗旱过程中的生物学功能,为深入了解棉花抗旱机制奠定基础。【方法】通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从陆地... 【目的】探究铝激活苹果酸转运蛋白(aluminum-activated malate transporter,ALMT)家族基因GhALMT10在棉花抗旱过程中的生物学功能,为深入了解棉花抗旱机制奠定基础。【方法】通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从陆地棉TM-1扩增GhALMT10基因编码序列,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测该基因在棉花不同组织部位和干旱胁迫下的表达模式。通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术,初步验证了该基因在棉花响应干旱胁迫中发挥的生物学功能。【结果】GhALMT10基因编码区长度为1401 bp,编码1个包含466个氨基酸残基的蛋白,预测其为稳定、疏水蛋白。系统进化分析表明GhALMT10与GrALMT10、GaALMT10-like、HsALMT10和TcALMT10亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示,该基因在棉花根、茎、叶中都有表达,且在根中的表达量最高。与清水处理相比,干旱胁迫处理3 h该基因的表达量较低,6 h、9 h的表达量显著升高,24 h的表达量显著降低。与阴性对照棉株相比,GhALMT10基因沉默棉株在干旱胁迫下的存活率显著提高,离体叶片失水率显著降低,叶片的叶绿素含量显著升高而丙二醛含量显著降低。【结论】GhALMT10基因沉默棉株对干旱胁迫的耐受能力显著提高,GhALMT10基因负调控棉花抗旱性。 展开更多
关键词 棉花 GhALMT10 干旱胁迫 表达模式分析 病毒诱导的基因沉默 生理生化指标
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石蒜同源基因沉默体系构建及鳞茎发生基因功能验证 被引量:1
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作者 肖潇 夏宜平 +3 位作者 崔柳 张佳平 洪震 任梓铭 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第1期89-101,共13页
本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp... 本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp;经双酶切后与烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)载体TRV2-GFP连接,从而构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)重组载体;转化根癌农杆菌后,用菌液侵染损伤刺激后的鳞茎块。侵染2 d后,观察到鳞茎维管组织中存在绿色荧光;实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorogenic quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测发现,沉默组LiCWIN基因表达量显著降低。侵染40 d后,相较于空载体对照组,LiCWIN基因沉默组小鳞茎发生数量下降且发育迟缓。上述结果表明,VIGS体系在海滨石蒜鳞茎组织中成功沉默了功能基因,且对小鳞茎后期发育的表型产生了持续影响。特别是LiCWIN基因沉默后,小鳞茎发生受阻。本研究为石蒜鳞茎发生发育关键基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 石蒜属 基因功能 瞬时验证 病毒诱导的基因沉默 体系构建 CWIN基因 小鳞茎发生
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利用BSMV-VIGS技术快速分析小麦TNBL1基因的抗黄矮病功能 被引量:9
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作者 赵丹 赵继荣 +4 位作者 黄茜 李宁 刘艳 黄占景 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2106-2110,共5页
小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技... 小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA序列,推导该基因编码1个NBS-LRR蛋白,将其命名为TNBL1。本研究利用大麦条纹花叶病毒(BSMV)诱导的基因沉默(virus-inducing gene silencing,VIGS)技术,快速分析TNBL1是否参与小麦抗黄矮病反应。通过PCR添加酶切位点、定向酶切与连接,将TNBL1特异的292bp片段反向整合到BSMV-γ链的多克隆位点上,获得重组载体BSMV-γ:TNBL1as,体外转录BSMV-VIGS载体的3个组分(BSMV-TNBL1as、BSMV-α和BSMV-β),等量混合、摩擦接种到抗黄矮病的小麦易位系YW642幼苗叶片上,使YW642中TNBL1基因沉默,然后接种BYDV病原进行黄矮病抗性鉴定。结果表明,TNBL1基因沉默后的YW642对BYDV敏感、显现感病症状,其体内BYDV含量较未发生基因沉默的YW642中的明显增加,证明TNBL1基因是正向调控小麦抗BYDV反应的1个重要基因。 展开更多
关键词 小麦 中间偃麦草 黄矮病 病毒诱导的基因沉默 NBS-LRR
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芦笋病毒诱导基因沉默体系的初步构建
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作者 吴贺 李云宾 +3 位作者 董陈文华 林春 刘正杰 毛自朝 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期31-41,共11页
【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄... 【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄红素脱氢酶编码基因(AoPDS)和镁螯合酶Ⅰ亚基编码基因(AoCH42)为报告基因,基于苹果潜伏球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)沉默载体,采用真空渗透法通过农杆菌对芦笋露白种子进行侵染,经表型和qRT-PCR检测,构建芦笋的VIGS体系,并进一步验证编码芦笋NADH-脱氢酶铁硫蛋白亚基S8基因(AoNDUFS8)的功能。【结果】侵染21 d后,AoPDS和AoCH42沉默植株分别出现白化和黄化表型;AoNDUFS8沉默植株长势瘦弱,发育迟缓。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,植株侵染后,目的基因表达均下降,预示成功构建芦笋VIGS体系。【结论】基于ALSV的VIGS体系能有效沉默芦笋中的目的基因,为后续芦笋功能基因组分析提供了实践基础。 展开更多
关键词 芦笋 病毒诱导基因沉默(VIGS)体系 PDS CH42 基因功能
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VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响 被引量:9
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作者 温小红 姜永华 +1 位作者 周轲 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期113-119,共7页
为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,V... 为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。 展开更多
关键词 '澳洲青苹’苹果 VIGS 转录因子MdHB-1 果实成熟
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胰蛋白酶调控黄瓜丝裂原活化蛋白激酶途径中CsWRKY33诱导苯丙烷化合物的合成
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作者 孙嘉炬 王贺敏 李欣 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第5期95-102,共8页
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联途径广泛参与植物的生理调控过程。胰蛋白酶作为诱抗剂可显著提高黄瓜的贮藏品质,但胰蛋白酶如何通过MAPK途径调控苯丙烷化合物的合成,从而影响果实抗性尚待阐明。为了... 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联途径广泛参与植物的生理调控过程。胰蛋白酶作为诱抗剂可显著提高黄瓜的贮藏品质,但胰蛋白酶如何通过MAPK途径调控苯丙烷化合物的合成,从而影响果实抗性尚待阐明。为了研究胰蛋白酶诱导黄瓜抗性的分子机制,该研究进行了转录组学分析和广泛靶向代谢组学联合分析,并通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)进行验证。转录组结果显示,共有83个差异表达显著基因富集在MAPK途径上,其中48个基因显著下调,35个基因显著上调。基因集富集分析进一步从领头亚集中筛选出CsWRKY33转录因子。与拟南芥、烟草等植物的多序列比对结果显示,明确该转录因子属于WRKY家族,在N端有一个高度保守WRKY结构域。该研究将转录组与广泛靶向代谢组学联合分析发现,香兰素、二氢查尔酮-4′-O-葡萄糖苷、2-羟基-3-苯基丙酸等物质的合成显著上调。共表达网络分析结果显示,上述关键代谢物应受CsWRKY33的负调控。VIGS结果显示,CsWRKY33沉默后能够提高果实的抗性,延长保存时间。该研究发现,胰蛋白酶能够下调CsWRKY33的表达,促进香兰素、二氢查尔酮-4′-O-葡萄糖苷、2-羟基-3-苯基丙酸等具有较高抗氧化抗菌活性的化合物的合成,提高果实抗病性,延缓果实衰老腐败。 展开更多
关键词 胰蛋白酶 转录组学 广泛靶向代谢组学 基因沉默 诱抗保鲜
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火龙果HuGAI1基因在胰蛋白酶诱抗中的功能及其分子机制
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作者 陈欣欣 王贺敏 +3 位作者 陈恩艳 贾静宇 李富新 李欣 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第13期1-7,共7页
胰蛋白酶被发现具有超氧阴离子清除活性,可以显著诱导果实采后抗病性和抗逆性。先前研究发现DELLA蛋白的编码基因HuGAI1应是胰蛋白酶诱导火龙果果实抗性的关键基因,但其调控机制尚需阐明。为了研究胰蛋白酶诱导火龙果抗性的分子机制,该... 胰蛋白酶被发现具有超氧阴离子清除活性,可以显著诱导果实采后抗病性和抗逆性。先前研究发现DELLA蛋白的编码基因HuGAI1应是胰蛋白酶诱导火龙果果实抗性的关键基因,但其调控机制尚需阐明。为了研究胰蛋白酶诱导火龙果抗性的分子机制,该研究通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术构建HuGAI1基因的RNA沉默株,验证其在火龙果的保鲜作用,又通过转录组学分析HuGAI1调控的下游代谢途径。结果显示,胰蛋白酶处理的火龙果果实保存时间延长,HuGAI1沉默后胰蛋白酶的诱抗效果丧失,火龙果果实腐败加剧。HuGAI1沉默后的转录组学分析结果显示,HuMYB12应是与HuGAI1结合的关键转录因子,它参与了类黄酮物质的合成,且受HuGAI1-HuMYB12调控的基因主要富集在类黄酮生物合成途径中,HuCYP98A3、HuPAL1和Hu4CL3等下游多个关键酶的表达显著上调。胰蛋白酶通过上调HuGAI1-HuMYB12的表达,促进黄酮类化合物的生物合成,增强细胞抗氧化能力,延长果实保鲜时间。 展开更多
关键词 基因沉默 胰蛋白酶 HuGAI1 黄酮类化合物生物合成 转录组学
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白GhCBL3-A01调控棉花黄萎病抗性的功能分析 被引量:1
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作者 高升旗 邵武奎 +3 位作者 赵准 邵盘霞 胡文冉 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期447-458,共12页
【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧... 【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)和H2O2处理的棉株中GhCBL3-A01基因的表达量变化。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病中的功能。通过检测活性氧积累以及相关基因的表达量,初步分析GhCBL3-A01的作用机制。【结果】陆地棉中GhCBL3-A01及其3个同源蛋白均含有3个CBL家族典型的EF-hand结构域。大丽轮枝菌、MeJA和H2O2处理后,GhCBL3-A01的表达量显著升高。VIGS沉默GhCBL3-A01导致病株率和病情指数显著降低,茎秆维管束褐变程度减轻,有病菌繁殖的茎段数量明显减少,增强了棉株对黄萎病的抗性。GhCBL3-A01基因沉默棉株叶片中活性氧积累增多,防御相关基因PR1、NPR1、PR4和PDF1.2以及茉莉酸信号通路关键基因AOS1、OPR3、MYC2和LOX2的表达量增加。【结论】GhCBL3-A01通过调控防御相关基因、茉莉酸信号通路基因的表达和活性氧积累负调控棉花对黄萎病的抗性,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 类钙调磷酸酶B亚基蛋白 GhCBL3-A01 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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硼诱导的转录因子SlbZIP36基因调控番茄果实中番茄红素的生物合成
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作者 李延锐 缪迪季 徐卫红 《西南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期23-36,共14页
硼元素是番茄生长发育所必需的微量营养元素。番茄作为全球最受欢迎的经济作物之一,其番茄红素含量是评估其营养品质的重要指标之一。通过大田试验探讨了不同硼供给水平对番茄红素含量的影响,并分析了番茄红素生物合成关键基因SlbZIP36... 硼元素是番茄生长发育所必需的微量营养元素。番茄作为全球最受欢迎的经济作物之一,其番茄红素含量是评估其营养品质的重要指标之一。通过大田试验探讨了不同硼供给水平对番茄红素含量的影响,并分析了番茄红素生物合成关键基因SlbZIP36对硼的响应。采用病毒诱导基因沉默技术(Virus-Induced Gene Silencing,VIGS)验证了SlbZIP36基因在番茄红素生物合成中的作用。结果表明:随着施硼量的增加,番茄红素含量也随之增加。转录组分析显示,bZIP家族与蔗糖、茉莉酸代谢以及植物激素信号转导等过程相关。通过VIGS技术,番茄果实中PSY和PDS基因的相对表达量下调至对照组的0.61~0.77倍。此外,Person相关性分析结果显示,SlbZIP36与果实中的硼含量之间存在显著正相关(r=0.660,p<0.05)。因此,SlbZIP36的过表达可能促进番茄红素的生物合成。 展开更多
关键词 SlbZIP转录因子 番茄红素生物合成 转录组 病毒诱导基因沉默技术
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bHLH47对番茄果实茉莉酸合成的调控机制
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作者 师瑞茜 常枭荣 +2 位作者 余金兰 孙丹丹 路来风 《食品科学技术学报》 北大核心 2025年第4期128-137,共10页
作为植物抵御灰霉菌等腐生性致病菌的主要调控物质之一,茉莉酸在番茄果实成熟过程中的变化规律及其调控机制尚不清楚。因此,采用酶联免疫吸附实验测定不同成熟期番茄果实表皮组织中的茉莉酸含量,结合实时荧光定量PCR分析茉莉酸关键合成... 作为植物抵御灰霉菌等腐生性致病菌的主要调控物质之一,茉莉酸在番茄果实成熟过程中的变化规律及其调控机制尚不清楚。因此,采用酶联免疫吸附实验测定不同成熟期番茄果实表皮组织中的茉莉酸含量,结合实时荧光定量PCR分析茉莉酸关键合成基因13-脂氧化酶(LOXD)、12-氧-植物二烯酸还原酶3(OPR3)和丙二烯氧化物合酶(AOS)等的表达量。以成熟与抗病双响应转录因子碱性螺旋-环-螺旋蛋白编码基因47(bHLH47)作为研究对象,通过病毒诱导的基因沉默技术研究bHLH47对番茄果实茉莉酸合成的调控作用。结果表明,绿熟期番茄果实中的茉莉酸浓度最高,为1.63 nmol/L;而红熟期果实中的茉莉酸浓度最低,为1.28 nmol/L。与小果期果实相比,红熟期果实中OPR3基因表达显著下调,降低了89.38%,表明茉莉酸合成受番茄果实成熟度的影响。在bHLH47基因沉默的番茄果实中,茉莉酸浓度增加了24.44%,OPR3基因的表达量相比对照组提高了2.3倍,12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)浓度增加了10.61%。研究表明,转录因子bHLH47通过负调控OPR3基因的表达来调控茉莉酸的合成,从而影响成熟过程中番茄果实对灰霉菌的抵抗能力。研究旨在阐明番茄果实成熟过程中灰霉菌易感性增加的茉莉合成的调控机制,为番茄采后腐烂损失控制提供理论参考。 展开更多
关键词 茉莉酸 碱性螺旋--螺旋蛋白编码基因47 病毒诱导的基因沉默 番茄 转录调控
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PbCYP86A1/B1 调控梨果皮褐色形成的机制研究
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作者 李斐 江平 衡伟 《安徽农业科学》 2025年第11期79-85,89,共8页
[目的]探究PbCYP86A1、PbCYP86B1基因与梨果皮褐色性状的关系。[方法]通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从“砀山酥梨”和“砀山金酥”梨果皮中克隆得到PbCYP86A1/B1基因后,采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对... [目的]探究PbCYP86A1、PbCYP86B1基因与梨果皮褐色性状的关系。[方法]通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从“砀山酥梨”和“砀山金酥”梨果皮中克隆得到PbCYP86A1/B1基因后,采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默,分析对照组(TRV2-TRV1)和试验组(TRV-PbCYP86A1、TRV-PbCYP86B1)梨果皮表型、果皮色差、基因的相对表达量和木栓质组分的变化。[结果]将TRV-PbCYP86A1和TRV-PbCYP86B1注射到梨表皮后观察发现注射部位的木栓质层无法正常积累,表现为黄绿色,注射部位与周边果皮色差值显著大于对照组果皮色差值。qRT-PCR结果表明,与对照梨果实相比,沉默PbCYP86A1和PbCYP86B1基因的注射梨果皮部位2个基因表达量明显降低,达到显著差异水平。[结论]木栓质含量分析结果表明,PbCYP86A1和PbCYP86B1基因沉默均能显著抑制梨果皮中C16ω-羟基脂肪酸和C16α,ω-二酸的合成,从而使木栓质总量减少。 展开更多
关键词 PbCYP86A1 PbCYP86B1 木栓质 病毒诱导的基因沉默
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NbJAZ3在苜蓿花叶病毒侵染本氏烟过程中的作用
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作者 赖诗雨 梁巧兰 +5 位作者 魏列新 牛二波 陈应娥 周鑫 杨思正 王博 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期186-196,共11页
【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法... 【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法】以本氏烟和AMV为材料,采用摩擦接种法将AMV接种于本氏烟,取接种后1、7、15、21 d的本氏烟叶片进行转录组测序分析,对茉莉酸(jasmonic acid, JA)信号转导途径中差异基因进行筛选,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NbJAZ3在AMV侵染中的表达变化;克隆NbJAZ3,进行生物学信息分析,构建系统进化树并进行多序列比对;构建pCAMBIA1300-NbJAZ3瞬时过表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察NbJAZ3蛋白亚细胞定位,利用Western blot检测蛋白表达量;当NbJAZ3在本氏烟叶片中瞬时过表达后,接种AMV,采用RT-q PCR法检测接种后第5天的AMV CP相对表达量;利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术构建pTRV2-NbJAZ3沉默载体,沉默NbJAZ3后摩擦接种AMV,利用RTqPCR检测AMV CP相对表达量。【结果】转录组测序和RT-q PCR进一步验证表明,AMV接种后的不同天数NbJAZ3均下调表达,且第15天NbJAZ3相对表达量最低,与对照相比下降了84.43%;NbJAZ3 CDS序列长度为1 143 bp,编码380个氨基酸,包含ZIM和Jas-motif 2个保守结构域;NbJAZ3与林烟草(Nicotiana sylvestris)的NsJAZ3同源性最高,相似度为96.58%;显微镜观察到NbJAZ3蛋白定位于本氏烟叶片的细胞核、细胞质与细胞膜中;与对照组相比,NbJAZ3瞬时过表达和瞬时沉默的本氏烟接种AMV第5天时,AMV CP相对表达量分别降低了83.82%和增加了78.58%。【结论】AMV侵染会引起本氏烟中NbJAZ3下调,瞬时过表达NbJAZ3可抑制AMV对本氏烟的侵染,而沉默该基因可促进AMV的侵染,进一步表明NbJAZ3可作为本氏烟抗AMV侵染的正调控因子,在抵御病毒侵染中具有重要作用。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 侵染 本氏烟 NbJAZ3 亚细胞定位 瞬时过表达 基因沉默 生物信息学分析
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陆地棉NF-YA基因家族的全基因组鉴定与功能分析 被引量:5
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作者 潘奥 王静静 +7 位作者 孙福来 张景霞 高阳 杜召海 焦梦佳 张军 王芙蓉 刘志 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期316-328,共13页
【目的】通过对陆地棉NF-YA基因家族进行全基因组鉴定,分析其表达特性,鉴定其中与棉花开花相关的基因。【方法】利用生物信息学方法系统分析了其理化性质、基因结构、共线性、Ka/Ks、顺式作用元件和表达模式,实时荧光定量聚合酶链反应(P... 【目的】通过对陆地棉NF-YA基因家族进行全基因组鉴定,分析其表达特性,鉴定其中与棉花开花相关的基因。【方法】利用生物信息学方法系统分析了其理化性质、基因结构、共线性、Ka/Ks、顺式作用元件和表达模式,实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)分析表达特征,采用病毒诱导基因沉默技术验证基因功能。【结果】陆地棉中鉴定到29个NF-YA基因家族成员,分为5个亚组,定位在18条染色体上;全基因组复制和片段复制是GhNF-YA基因家族扩张的主要动力;启动子区含有大量光反应的顺式作用元件。GhNF-YA基因家族基因在茎、叶中高表达;12个GhNF-YA基因在早熟品种鲁棉研19号和晚熟品种鲁棉研37号中均在第三至六叶时期表达量较高,并且大部分基因在品种间表达差异显著。沉默GhNF-YA18基因的鲁棉研37号植株比对照提前11 d现蕾,并且该基因在白化期和现蕾期的表达量均低于未沉默对照棉株。【结论】本研究对陆地棉NF-YA基因家族进行了鉴定和表达分析,为进一步研究棉花开花调控的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 陆地棉 NF-YA基因家族 生物信息学 表达分析 病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing VIGS)
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陆地棉钙依赖蛋白激酶GhCDPK28-A10参与抗黄萎病的功能分析 被引量:3
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作者 邵武奎 赵准 +6 位作者 胡文冉 郝晓燕 高升旗 李建平 陈果 刘晓东 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期17-28,共12页
【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative poly... 【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测在经大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)、水杨酸(salicylic acid,SA)或H_(2)O_(2)处理的棉株中GhCDPK28-A10基因的表达量变化。通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术验证GhCDPK28-A10在棉花抗黄萎病中的作用。【结果】进化树和基因结构分析表明,陆地棉中GhCDPK28-A10的6个同源蛋白具有相似数量的基序和CDPK家族典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域;启动子区域的序列分析发现GhCDPK28-A10包含响应茉莉酸(jasmonic acid,JA)的顺式作用元件。组织特异性表达分析表明GhCDPK28-A10在根、茎和真叶中均表达,且在真叶中表达水平最高。在大丽轮枝菌、MeJA和H_(2)O_(2)胁迫下,GhCDPK28-A10的表达量显著升高。VIGS沉默Gh CDPK28-A10的棉株中抗病相关基因PR1、NPR1、PR4表达增强;JA合成负调控基因JAZ1表达量降低,说明随着CDPK28-A10表达水平的降低,JAZ1对JA合成的抑制作用减弱,活性氧富集,进而增强棉株的黄萎病抗性。【结论】GhCDPK28-A10通过调控防御相关基因的表达,负向调控棉花对黄萎病的抗性反应,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 钙依赖性蛋白激酶 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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病程相关蛋白基因GmPR1-6的克隆及其在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能初探 被引量:4
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作者 苏伟华 赵志华 +3 位作者 齐梦楠 孙天杰 王冬梅 张洁 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期8-15,共8页
为了探究大豆抵抗大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)侵染的分子调控机制,挖掘抗病相关基因,培育抗病新品种,本研究从清除H2O2前后大豆响应SMV的转录组数据库中筛选得到1个差异表达的大豆病程相关蛋白基因GmPR1-6(Glyma.15G062400.... 为了探究大豆抵抗大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)侵染的分子调控机制,挖掘抗病相关基因,培育抗病新品种,本研究从清除H2O2前后大豆响应SMV的转录组数据库中筛选得到1个差异表达的大豆病程相关蛋白基因GmPR1-6(Glyma.15G062400.1),利用生物信息学分析并结合实时荧光定量(Real time quantitative,RT-qPCR)技术以及病毒介导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)等技术验证其在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能。结果表明,GmPR1-6在非亲组合中转录水平的表达量显著高于亲和组合;GmPR1-6基因沉默植株叶片接种SMV的部位胼胝质积累面积增大、胼胝质荧光强度减弱,病毒在胞间扩散的能力增强,说明GmPR1-6基因在大豆抵抗SMV侵染过程中发挥正调控作用。研究结果为进一步探究病程相关蛋白在大豆抵抗SMV侵染过程中的功能提供试验依据。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 病程相关蛋白 病毒介导的基因沉默技术(VIGS) 功能分析
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陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1黄萎病抗性功能验证 被引量:2
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作者 胡子曜 李秀青 +7 位作者 代培红 雷建峰 柳建飞 赵燚 邓嘉辉 刘超 刘晓东 李月 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期72-81,共10页
为了探究陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1在棉花黄萎病反应中的生物学功能,为棉花黄萎病抗性基因挖掘及抗病育种奠定基础,通过转录组筛选,克隆获得一个细胞色素P450基因GhP450-94C1,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过... 为了探究陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1在棉花黄萎病反应中的生物学功能,为棉花黄萎病抗性基因挖掘及抗病育种奠定基础,通过转录组筛选,克隆获得一个细胞色素P450基因GhP450-94C1,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过荧光定量PCR技术分析GhP450-94C1在黄萎病侵染下的表达模式,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术初步探究其在棉花抗黄萎病反应中的生物学功能。结果表明,克隆获得一个陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1,其开放阅读框(ORF)为1503 bp,编码一个含500个氨基酸的酸性、亲水、不稳定的跨膜蛋白,分子式为C_(2597)H_(4025)N_(691)O_(725)S_(22),分子质量为57.23 ku,定位于内质网膜,含有一个P450结构域;有86.45%的概率存在信号肽;二级结构预测显示,该蛋白含有24个α-螺旋和8个β-折叠;该基因响应黄萎病菌侵染,抑制其表达后植株对黄萎病菌的敏感性增强。初步证明GhP450-94C1是棉花黄萎病抗性反应的一个正向调控因子。 展开更多
关键词 棉花黄萎病 GhP450-94C1 基因克隆 病毒诱导的基因沉默
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病毒诱导的全新tae-miR9663的沉默影响叶片发育和籽粒大小 被引量:1
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作者 朱妍峰 王倩 赵惠贤 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期465-471,共7页
MicroRNA(miRNA)是一类长度为18~24nt的非编码小分子RNA,参与植物各种发育进程。tae-miR9663是新发现的在小麦幼苗、旗叶和籽粒中高表达的miRNA,但其生物学功能未知。为了探索taemiR9663的功能,通过人工合成tae-miR9663的小串联模拟靶标... MicroRNA(miRNA)是一类长度为18~24nt的非编码小分子RNA,参与植物各种发育进程。tae-miR9663是新发现的在小麦幼苗、旗叶和籽粒中高表达的miRNA,但其生物学功能未知。为了探索taemiR9663的功能,通过人工合成tae-miR9663的小串联模拟靶标(short tandem target mimic,STTM),将其构建到大麦条斑花叶病毒(barley stripe mosaic virus,BSMV)载体上,利用病毒介导的基因沉默(virus-inducing gene silencing,VIGS)技术转染小麦宁春16五叶一心期的第5片叶,转染20d后观察叶片表型并取旗叶进行实时定量PCR,成熟时观察种子大小。叶片表型观察结果表明,与BSMV:00相比,接种BSMV:STTM-taemiR9663的9株幼苗中出现4种叶片表型,即第6片叶有白点或白条纹,旗叶(第7片叶)有白点或白条纹,第6片叶边缘有锯齿状,旗叶叶尖处有皱缩。实时定量PCR分析结果表明,STTM-tae-miR9663过表达植株的tae-miR9663表达丰度下降,说明BSMV-VIGS技术可通过过表达STTM有效地沉默内源miRNA。成熟种子大小观察结果表明,与BSMV:00比较,接种BSMV:STTM-tae-miR9663的植株种子的长和宽均减小。 展开更多
关键词 小麦 tae—miR9663 STTM 病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术
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