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副溶血弧菌外膜蛋白ompK免疫磁珠检测方法的建立
被引量：
3
1
作者
李雨辰
闻一鸣
+1 位作者
童吉宇
向军俭
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期209-214,共6页
构建重组基因克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧菌的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法。利用生物软件Primer 5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,...
构建重组基因克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧菌的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法。利用生物软件Primer 5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21进行优化表达。镍柱纯化表达产物,免疫小鼠,制备其多克隆抗体。Western blot鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性。间接ELISA检测多抗效价及交叉性,并与protein G磁珠偶联结合显色平板检测副溶血弧菌。结果显示,成功表达ompK蛋白;免疫小鼠获得特异性抗血清,效价为1∶64 000;Western blotting证明抗血清能与副溶血弧菌28 kD处条带特异性结合。制备的免疫磁珠敏感度最高能达到104CFU/mL。成功克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备副溶血弧菌特异性鼠多克隆抗体,建立的免疫磁珠检测方法与显色平板法结合较传统的二次增菌法能够节省72 h,整个过程只需要传统方法时间的1/3;相比于常用的免疫学检测方法检测灵敏度提高两个数量级。
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关键词
副溶血弧菌
ompk
多克隆抗体
免疫磁珠
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职称材料
副溶血弧菌的磁珠捕获及检测
被引量：
6
2
作者
王报贵
武晓丽
+5 位作者
董素琴
陈飞
陈星星
甘敏
明星
徐锋
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第13期147-152,共6页
建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后...
建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。
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关键词
副溶血弧菌
多克隆抗体
免疫磁珠
PCR
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职称材料
题名
副溶血弧菌外膜蛋白ompK免疫磁珠检测方法的建立
被引量：
3
1
作者
李雨辰
闻一鸣
童吉宇
向军俭
机构
暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期209-214,共6页
基金
广东省教育部产学研项目(2010B09301037)
文摘
构建重组基因克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧菌的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法。利用生物软件Primer 5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21进行优化表达。镍柱纯化表达产物,免疫小鼠,制备其多克隆抗体。Western blot鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性。间接ELISA检测多抗效价及交叉性,并与protein G磁珠偶联结合显色平板检测副溶血弧菌。结果显示,成功表达ompK蛋白;免疫小鼠获得特异性抗血清,效价为1∶64 000;Western blotting证明抗血清能与副溶血弧菌28 kD处条带特异性结合。制备的免疫磁珠敏感度最高能达到104CFU/mL。成功克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备副溶血弧菌特异性鼠多克隆抗体,建立的免疫磁珠检测方法与显色平板法结合较传统的二次增菌法能够节省72 h,整个过程只需要传统方法时间的1/3;相比于常用的免疫学检测方法检测灵敏度提高两个数量级。
关键词
副溶血弧菌
ompk
多克隆抗体
免疫磁珠
Keywords
vibrio parahaemolyticus ompk polyclonal antibody immunomagnetic beads
分类号
S941 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
副溶血弧菌的磁珠捕获及检测
被引量：
6
2
作者
王报贵
武晓丽
董素琴
陈飞
陈星星
甘敏
明星
徐锋
机构
南昌大学生命科学与食品工程学院中德联合研究院
江西中医学院基础医学部
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第13期147-152,共6页
基金
"十二五"国家科技支撑计划(2011BAK10B06
2011BAK10B01
+5 种基金
2011BAK10B02)
国家自然科学基金项目(31000048
31170091)
食品科学与技术国家重点实验室目标导向课题(SKLF-MB-201002)
自由探索课题(SKLF-TS-200916)
2012年赣鄱英才555工程人才计划
文摘
建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。
关键词
副溶血弧菌
多克隆抗体
免疫磁珠
PCR
Keywords
vibrio
parahaemolyticus
polyclonal
antibodies
immunomagnetic
beads
PCR
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
副溶血弧菌外膜蛋白ompK免疫磁珠检测方法的建立
李雨辰
闻一鸣
童吉宇
向军俭
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
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职称材料
2
副溶血弧菌的磁珠捕获及检测
王报贵
武晓丽
董素琴
陈飞
陈星星
甘敏
明星
徐锋
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2013
6
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职称材料
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