应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量：16

1

作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页

利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 vp3基因重组原核表达产物 间接-ELISA Dot—ELISA

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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达 被引量：4

2

作者 彭志伟 王笑梅 +4 位作者 高宏雷 付朝阳 张厚双 包晓玮 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-127,共4页

利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH... 利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白VP3基因,约33Ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9%,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应。这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白vp3基因 克隆与原核表达

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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达 被引量：3

3

作者 李露 程英杰 +4 位作者 李传峰 陈宗艳 孟春春 何后军 刘光清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期33-37,共5页

采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE... 采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE3),经1mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测。结果显示,成功克隆了DHV-ⅠVP3基因,片段大小为711bp。序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1%～97.7%;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3%～72.6%;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3%～70.5%。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47ku;与抗Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 vp3基因 原核表达 序列分析

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鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达 被引量：3

4

作者 宋铁彬 白江 +2 位作者 马博 王连江 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第11期29-30,共2页

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp3基因 克隆与原核表达 RNA病毒 IBDV A节段 基因组 vp2

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表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：3

5

作者 陈海迪 高旭 +4 位作者 张颖 许应天 张立媛 于清洋 鲁承 《安徽农业科学》 CAS 2014年第33期11751-11754,共4页

[目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过... [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 vp3基因 重组腺病毒 真核表达

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鸡传染性贫血病毒vp3基因的原核表达及其免疫学活性分析 被引量：1

6

作者 陆桂丽 王笑梅 +3 位作者 高玉龙 高宏雷 祁小乐 王晓燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期650-652,共3页

将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性... 将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性反应。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 vp3基因 原核表达

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A型口蹄疫病毒VP3基因的克隆及原核表达 被引量：1

7

作者 刘航 杨晓燕 +3 位作者 刘明 赵海波 郭华花 田永强 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期33-35,共3页

从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA。并根据FM-DV全基因组序列设计了1对针对VP3基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP3并亚克隆入pMD 18-T载体。将鉴定出的阳性质粒和表达载体PET32a用BamHⅠ、H... 从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA。并根据FM-DV全基因组序列设计了1对针对VP3基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP3并亚克隆入pMD 18-T载体。将鉴定出的阳性质粒和表达载体PET32a用BamHⅠ、HindⅢ双酶切回收后连接,获得阳性重组质粒PET32-VP3。用IPTG诱导重组质粒表达目的蛋白VP3,并用SDS-PAGE进行检测,表达产物用镍亲和树脂进行纯化。结果证明口蹄疫病毒VP3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达且表达产物得到了纯化,为实验室进一步研究提供了重要的材料。 展开更多

关键词 A型口蹄疫病毒 vp3基因 克隆 原核表达

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鸡贫血病毒VP3基因的原核克隆表达

8

作者 齐欣 杨兵 赵玉军 《饲料工业》 2006年第9期51-53,共3页

关键词 鸡贫血病毒 vp3基因 克隆表达 原核 鸡传染性贫血 virus 澳大利亚 黑龙江省 CAV 分离

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番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1

9

作者 吴萌 成大荣 +3 位作者 朱善元 吴海涛 左伟勇 王安平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1383-1386,共4页

为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/... 为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。 展开更多

关键词 番鸭细小病毒 vp3基因 原核表达 多克隆抗体

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鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

10

作者 黄剑梅 傅秋玲 +7 位作者 傅光华 万春和 陈翠腾 陈珍 程龙飞 施少华 陈红梅 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第5期425-429,共5页

参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3... 参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0mmol·L-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1aVP3蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。 展开更多

关键词 鸭1型甲肝病毒亚型 vp3基因 克隆 原核表达

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鸭肝炎病毒Ⅰ型VP35'端截短基因的原核表达

11

作者 张继玲 朱善元 +4 位作者 王安平 刘俊 王岑 左为勇 洪伟明 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期688-690,共3页

鸭病毒性肝炎（ Duck viral hepatitit,DVH）是一种由鸭肝炎病毒（ Duck hepatitis virus,DHV）感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV... 鸭病毒性肝炎（ Duck viral hepatitit,DVH）是一种由鸭肝炎病毒（ Duck hepatitis virus,DHV）感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV 主要包括3个血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。3个血清型有明显的差异,无交叉免疫性。目前中国发生和流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎病毒（ DHV-Ⅰ）[1]。该病毒属于小 RNA病毒科,为无囊膜的单股正链RNA病毒[2-3],其基因组大小约为7690 nt,具有1个开放阅读框,编码2249个氨基酸的聚合蛋白质。该聚合蛋白质经蛋白酶水解可产生11种蛋白质,即 VP0、VP1、VP3、2A1、2A2、2B、2C、3A、3B、3C、3D[4]；其中 VP3蛋白质位于衣壳表面,是 DHV 重要的结构蛋白质之一。DHV-1和人肠道病毒（ Human parechovirus,HPeV）同属于小RNA病毒科,其中HPeV VP3蛋白质的N-末端约20个氨基酸的区域具有很强的免疫原性[5],有文献报道 DHV-ⅠVP3蛋白质在该区域有较高的表面可及性、亲水性值和抗原指数,同样具有较强的免疫原性[6]。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 vp3基因 截短 原核表达 DUCK HEPATITIS VIRUS typeⅠ

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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量：9

12

作者 布日额 王君伟 +3 位作者 吴金花 李勐 马广鹏 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第10期3-6,共4页

根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并... 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 展开更多

关键词 鹅 细小病毒 vp1 vp3 非重叠序列 克隆 原核表达 基因组 核苷酸 结构蛋白 大肠杆菌

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鹅细小病毒SS/10株VP3蛋白的原核表达及鉴定 被引量：3

13

作者 胡自立 刘海玲 +3 位作者 张光明 张凯 高瑞娟 罗开健 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期35-38,共4页

根据GenBank收录的鹅细小病毒(GPV)基因序列,设计并合成了一对VP3基因扩增引物。采用PCR技术对SS/10株的VP3基因进行扩增,将目的基因和原核表达载体PET-32a分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,获得重组质粒PET-32a-VP3,并将其转化表... 根据GenBank收录的鹅细小病毒(GPV)基因序列,设计并合成了一对VP3基因扩增引物。采用PCR技术对SS/10株的VP3基因进行扩增,将目的基因和原核表达载体PET-32a分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,获得重组质粒PET-32a-VP3,并将其转化表达菌BL21(DE3)pLysS。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了72ku左右的融合蛋白,大部分以包涵体的形式存在于菌体中。Wesern blot结果表明,该蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 vp3基因 原核表达

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传染性胰腺坏死病毒VP3基因的分段表达及其抗原表位区域分析 被引量：3

14

作者 刘巍巍 赵丽丽 +5 位作者 赵永欣 王健楠 李一经 葛俊伟 乔薪瑗 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2011年第4期61-65,共5页

采用PCR方法克隆了传染性胰腺坏死病毒（IPNV）VP3四段相互重叠的基因片段L1、L2、L3和L4,将PCR产物分别连接到原核表达载体pGEX-6P1和pET32a上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pGEX-6P1-VP3（L1）、pET32a-VP3（L2）、pGEX-6P1-VP3... 采用PCR方法克隆了传染性胰腺坏死病毒（IPNV）VP3四段相互重叠的基因片段L1、L2、L3和L4,将PCR产物分别连接到原核表达载体pGEX-6P1和pET32a上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pGEX-6P1-VP3（L1）、pET32a-VP3（L2）、pGEX-6P1-VP3（L3）和pGEX-6P1-VP3（L4）;将其分别转化感受态菌Rosetta和BL21,经1.0mmol/L的IPTG诱导,分别得到大小为32 kD、26 kD、30 kD和31 kD的目的蛋白。经Western-blo-ting分析,4段目的蛋白中,只有VP3（L1）和VP3（L4）基因片段所表达的融合蛋白能与IPNV阳性血清反应,说明VP3蛋白的免疫优势区域集中在该蛋白的1~70和143~206氨基酸之间。该融合蛋白可以作为诊断抗原用于建立ELISA诊断方法。本实验为进一步精确定位VP3蛋白抗原表位奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病毒 vp3基因 原核表达 抗原表位

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禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株衣壳蛋白基因原核表达及其ELISA检测研究 被引量：3

15

作者 张二芹 赵心力 +3 位作者 赵振华 孙明 陈西钊 钱爱东 《动物医学进展》 CSCD 2005年第1期55-58,共4页

利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku... 利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku。以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法 ,用阳性血清和阴性血清进行检测。结果显示 ,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性 ,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性 ,同时用美国试剂盒检测VP1活性 ,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样 1 0份血清作比较 ,三组ELISA检测结果 ,其中有 8份被检血清为阳性 ;2份被检血清为阴性。这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致。说明VP1表达蛋白活性达到预期要求 。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎病毒 vp0、vp3、vp1基因 原核表达 ELISA

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日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶原核表达载体的构建及序列分析 被引量：1

16

作者 方桂杰 乔宪凤 《江西农业学报》 CAS 2010年第11期8-10,14,共4页

为构建带有组氨酸标签(his-tag)的日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(sjGST)表达载体。以载有sjGST基因的载体PGEX-KG为模板,PCR扩增sjGST基因,并在进行酶切和基因测序后将其克隆到pET28a载体上。运用生物学软件与具有代表性的血吸虫GST基因... 为构建带有组氨酸标签(his-tag)的日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(sjGST)表达载体。以载有sjGST基因的载体PGEX-KG为模板,PCR扩增sjGST基因,并在进行酶切和基因测序后将其克隆到pET28a载体上。运用生物学软件与具有代表性的血吸虫GST基因进行比对并对可能的表达产物进行分析。结果表明,PCR产物与3种sjGST基因有99%的同源性。重组载体构建成功。 展开更多

关键词 日本血吸虫 谷胱甘肽硫转移酶 原核 表达载体的构建 序列分析 SCHISTOSOMA JAPONICUM Sequence Analysis 基因测序 重组载体构建 组氨酸标签 生物学软件 表达产物 PCR产物 HIS-TAG GST基因 同源性 代表性 pET28a 模板 酶切

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脾源鸭γ-干扰素基因的RT-PCR扩增、序列分析及表达 被引量：2

17

作者 张晓宇 李凤华 +6 位作者 邵钢 宋晓林 陈艳 康丽娟 江庆国 庄国宏 江国托 《中国家禽》 北大核心 2005年第11期14-16,共3页

从丝裂原刺激的鸭脾淋巴细胞中提取基因组 RNA,采用 RT-PCR 扩增鸭干扰素γ基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,鸭干扰素γ基因序列全长477bp,开放阅读框架内401个核苷酸,共编码132个氨基酸。将鸭γ-IFN 基因定向克隆到原核表达载... 从丝裂原刺激的鸭脾淋巴细胞中提取基因组 RNA,采用 RT-PCR 扩增鸭干扰素γ基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,鸭干扰素γ基因序列全长477bp,开放阅读框架内401个核苷酸,共编码132个氨基酸。将鸭γ-IFN 基因定向克隆到原核表达载体pBV220中,重组质粒经酶切鉴定后,转化到宿主菌 DH5a 中,温度诱导表达,SDS-PAGE 分析,表达产物与标记抗鸡干扰素抗体出现 Dot-ELISA 阳性反应。 展开更多

关键词 PCR扩增 序列分析 Γ-干扰素基因 RT 鸭 开放阅读框架 PBV220 原核表达载体 脾淋巴细胞 ELISA 干扰素γ 分析结果 基因序列 定向克隆 酶切鉴定 重组质粒 诱导表达 PAGE 阳性反应 鸡干扰素 表达产物 RNA 基因组 丝裂原 核苷酸

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斑节对虾carcininPm3的表达及其无标签多肽的获得

18

作者 李国强 周亮 +1 位作者 李安国 王潮岗 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期9-16,共8页

crustin是对虾中重要的抗菌肽,本研究获得的carcinin Pm3属于斑节对虾crustin家族,是一种新型抗菌肽,成熟肽含有92个氨基酸,与其他对虾抗菌肽的同源性小于45%.根据其氨基酸序列和大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的密码子偏好性设计ca... crustin是对虾中重要的抗菌肽,本研究获得的carcinin Pm3属于斑节对虾crustin家族,是一种新型抗菌肽,成熟肽含有92个氨基酸,与其他对虾抗菌肽的同源性小于45%.根据其氨基酸序列和大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的密码子偏好性设计carcinin Pm3的基因序列,将carcinin Pm3连接到原核表达载体pSmartI-SUMO上,构建重组表达载体p SmartI-SUMO-carcinin Pm3,再转化至原核表达菌株E.coli BL21(DE3)中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导SUMOcarcinin Pm3的融合表达,进一步优化其表达条件,获得表达量大、可溶性高的重组蛋白.通过亲和层析纯化得到重组蛋白,蛋白的质量浓度达到195μg/m L.利用SUMO酶去除SUMO融合标签,获得没有外源标签的carcinin Pm3抗菌肽,可用于蛋白功能分析、抗体制备等研究.研究结果为carcinin Pm3功能的分析及应用提供参考. 展开更多

关键词 基因工程 斑节对虾 抗菌肽 crustin家族 carcininPm3基因 原核表达 重组蛋白 亲和层析

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