体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

1

作者 孔桂美 张小荣 +3 位作者 刁亚利 吴克艳 刘秋云 卜平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1098-1102,共5页

目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得... 目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础。 展开更多

关键词 人vegf165 单克隆抗体 HUVEC 血管形成 细胞迁移

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VEGF_(165)单克隆抗体对视网膜新生血管的抑制作用 被引量：2

2

作者 李亚萍 刘早霞 +2 位作者 孙大军 苏冠方 张晓光 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期621-622,共2页

目的 :探讨有效阻断视网膜新生血管发生的方法。方法 :对体外培养新生儿脐静脉血管内皮细胞进行血管内皮细胞生长因子 1 65 ( VEGF165)单克隆抗体、1 3-顺式维甲酸、INF- α、INF- γ4种药物筛选实验。用倒置显微镜观察细胞生长状态 ;用... 目的 :探讨有效阻断视网膜新生血管发生的方法。方法 :对体外培养新生儿脐静脉血管内皮细胞进行血管内皮细胞生长因子 1 65 ( VEGF165)单克隆抗体、1 3-顺式维甲酸、INF- α、INF- γ4种药物筛选实验。用倒置显微镜观察细胞生长状态 ;用 MTT法测 A560 nm值 ,计算细胞增殖抑制率。结果 :VEGF165单克隆抗体组浓度在 2 0 0 0 mg· L-1时 ,对血管内皮细胞的增殖抑制率达 91 %。1 3-顺式维甲酸对细胞最高增殖抑制率是 61 % ;IFN- γ浓度在 2 0 0 0 mg·L-1时 ,对细胞增殖抑制率为 5 6%。IFN- α浓度在 2 0 0 0 mg·L-1时 ,细胞增殖抑制率均低于 40 %。结论 展开更多

关键词 vegf165单克隆抗体 视网膜新生血管 抑制作用 视网膜新生血管性疾病 血管内皮细胞

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利用重组人VEGF165制备单克隆抗体的研究

3

作者 孙大军 杨淑华 +2 位作者 李亚萍 杜建时 祁功才 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期475-477,共3页

目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,... 目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,收集腹水纯化后制成抗 rh VEGF16 5单克隆抗体。结果 :VEGF16 5诱导的内皮细胞增殖可被本研究制备的单克隆抗体中和 ,并表现出较好的剂量依赖关系。结论 :本研究利用 DNA重组技术制备人 VEGF16 5 ,并利用它进一步制备了抗重组人VEGF16 5单克隆抗体。 展开更多

关键词 载体 重组人vegf165 单克隆抗体 制备 DNA

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抗VEGF单克隆抗体偶联5-FU纳米微粒的初步研究 被引量：15

4

作者 黄开红 王凌云 +3 位作者 赵晓龙 刘建化 陈汝福 朱兆华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期258-261,共4页

目的:为了提高5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的抗癌活性,采用抗VEGF单克隆抗体与5-FU聚乳酸纳米微粒交联结合制备具有靶向功能的免疫纳米微粒。方法:采用抗VEGF单克隆抗体与已制备的5-FU聚乳酸纳米微粒(5-FU-NPs)以化学键偶联连接的... 目的:为了提高5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的抗癌活性,采用抗VEGF单克隆抗体与5-FU聚乳酸纳米微粒交联结合制备具有靶向功能的免疫纳米微粒。方法:采用抗VEGF单克隆抗体与已制备的5-FU聚乳酸纳米微粒(5-FU-NPs)以化学键偶联连接的方法制备具有靶向功能的5-FU免疫纳米微粒(5-FU-Ab-NPs),考察其形貌、粒径分布、体外释放和免疫活性等性能。结果:5-FU-Ab-NPs仍呈规则球形,粒径约为(202±23)nm,体外释放实验表明该5-FU-Ab-NPs与5-FU-NPs具有相似缓释特性,免疫学检测和电镜检视显示偶联后的抗VEGF单克隆抗体免疫活性保持原活性的80%以上。结论:5-FU-Ab-NPs保持原5-FU-NPs缓释药物的特点,具有双重活性功能,即免疫导向和缓释药物,有利于提高肿瘤局部药物浓度。 展开更多

关键词 氟尿嘧啶 抗vegf单克隆抗体 免疫纳米微粒 胃肿瘤 MGC803细胞

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抗犬VEGF单克隆抗体及夹心ELISA试剂盒的制备及应用 被引量：1

5

作者 肖敏 赵冰冰 +2 位作者 常宏建 任晓丽 刘云 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期40-44,129,共6页

本研究旨在制备犬血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体和研制犬VEGF双抗夹心的ELISA检测试剂盒。研究利用原核表达的方法制备出具有良好反应原性的重组融合蛋白犬VEGF-His,并在此基础上进行了犬VEGF单克隆抗体的制备及鉴定,结果表明,所获... 本研究旨在制备犬血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体和研制犬VEGF双抗夹心的ELISA检测试剂盒。研究利用原核表达的方法制备出具有良好反应原性的重组融合蛋白犬VEGF-His,并在此基础上进行了犬VEGF单克隆抗体的制备及鉴定,结果表明,所获得的犬VEGF单克隆抗体对犬VEGF蛋白具有良好的反应原性和较高的特异性。利用此单克隆抗体,与VEGF的兔多克隆抗体血清分别作为夹心ELISA检测试剂盒的上下层抗体使用,建立了以犬VEGF为抗原的夹心ELISA试剂盒的检测方法,并对正常健康犬及乳腺肿瘤患犬血清进行了检测,得出了此试剂盒的阳性和阴性临界值。实验结果表明,此试剂盒具有良好的敏感性、特异性和重复性,且利用本试剂盒对临床样本进行验证时,阳性符合率为87. 5%,阴性符合率为97. 56%,具有较高的临床应用价值。 展开更多

关键词 vegf 单克隆抗体 ELISA试剂盒

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抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体重链可变区基因的克隆和序列分析

6

作者 杨西川 郑光勇 +4 位作者 王大章 程云 李伯安 李静 房思炼 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期58-60,I001,共3页

目的：克隆并分析人血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）单克隆抗体重链可变区基因。方法：从分泌抗人ＶＥＧＦ单抗的杂交瘤细胞株（Ｅｌ）中提取总ＲＮＡ，利用逆转录－ＰＣＲ方法，克隆抗人ＶＥＧＦ单克隆抗体（ＭＡＢ）重链可变区基因（Ｖ... 目的：克隆并分析人血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）单克隆抗体重链可变区基因。方法：从分泌抗人ＶＥＧＦ单抗的杂交瘤细胞株（Ｅｌ）中提取总ＲＮＡ，利用逆转录－ＰＣＲ方法，克隆抗人ＶＥＧＦ单克隆抗体（ＭＡＢ）重链可变区基因（ＶＨ），将其重组入ｐＥＧＭＲ－ＴＶｅｃｔｏｒ测序载体测序。结果：ＶＨ基因序列全长３６９个碱基对，编码１２３个氨基酸，通过国际联机检索及Ｋａｂａｔ库扫描证实，该ＶＨ基因符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征，同源性最高达８７％。结论：ＶＨ基因全长３６９ｂｐ，根据Ｋａｂａｔ分类，归属小鼠重链可变区基因第Ⅱ（Ａ）亚组，由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ４重排产生。 展开更多

关键词 vegf MAB 可变区基因 单克隆抗体

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重组人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的制备 被引量：1

7

作者 徐多多 李思静 +3 位作者 李芳芊 潘鹏涛 吴靖 王丽 《东北师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期126-129,共4页

为制备人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体,制备并纯化了VEGF蛋白,通过免疫、细胞融合、筛选等方法获得了能够稳定分泌单克隆抗体的细胞株;采用小鼠腹腔接种法制备腹水,并用G蛋白(Protein G)亲和层析柱对抗体进行了纯化;采用间接ELISA... 为制备人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体,制备并纯化了VEGF蛋白,通过免疫、细胞融合、筛选等方法获得了能够稳定分泌单克隆抗体的细胞株;采用小鼠腹腔接种法制备腹水,并用G蛋白(Protein G)亲和层析柱对抗体进行了纯化;采用间接ELISA及Western blot实验分别对纯化后的抗体进行了效价测定和特异性验证.结果表明:此方法可成功筛选出能稳定分泌VEGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化后腹水抗体效价为1∶1 024;Western blot检验证实制备的单克隆抗体能特异性识别VEGF蛋白. 展开更多

关键词 vegf 单克隆抗体 ELISA

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抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析 被引量：1

8

作者 冉宇靓 杨治华 +1 位作者 王贵齐 董志伟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期423-427,共5页

目的　 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法　 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列... 目的　 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法　 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果　 抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论　 所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。 展开更多

关键词 vegf165 抗体 RT-PR 克隆 可变区基因 序列分析

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重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

9

作者 董雪 徐雨昕 +4 位作者 郭晶 龚忠阔 夏霖亚 殷玉和 吴丛梅 《吉林大学学报（理学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期1538-1543,共6页

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA... 通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显著抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24~144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05~0.01),与标准品抑制效果相似. 展开更多

关键词 密码子优化 vegf单克隆抗体 纯化 生物活性

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表达人源VEGF-A小鼠模型的建立及抗VEGF抗体研究 被引量：1

10

作者 孔琪 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第2期138-138,共1页

关键词 单克隆抗体 vegf 小鼠模型 美国食品和药品管理局 血管内皮生长因子 tech公司 肿瘤发生 血管生成

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抗人VEGF单抗的研制及对肿瘤生长及转移的抑制作用 被引量：10

11

作者 杨治华 石瑜琳 +3 位作者 冉宇靓 王贵齐 刘军 董志伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期414-417,共4页

目的：为了确定人血管内皮细胞生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ） 在肿瘤生长及转移中的作用。方法：利用ＤＮＡ 重组技术表达人ＶＥＧＦ，以其为抗原免疫Ｂａｌｂｃ 小鼠，... 目的：为了确定人血管内皮细胞生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ） 在肿瘤生长及转移中的作用。方法：利用ＤＮＡ 重组技术表达人ＶＥＧＦ，以其为抗原免疫Ｂａｌｂｃ 小鼠，应用杂交瘤技术获得１４ 株稳定分泌抗ＶＥＧＦ单抗的杂交瘤细胞株。结果：ＥＬＩＳＡ 测定所分泌的单抗只与ＶＥＧＦ特异结合，与ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦα及ＴＮＦ 等均无交叉反应。以豚鼠皮肤血管通透性实验（Ｍｉｌｅｓ） 、鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验（ＣＡＭ） 及人脐带静脉血管内皮细胞增殖实验（ＨｕＶＥＣ） 鉴定单抗的中和活性，其中９ 株具有中和活性。在小鼠自发乳癌肺转移模型中进行的抑瘤试验显示，单抗Ｄ１１ 对乳癌原发瘤的抑制率达８３ ．４ ％ ，对肺转移的抑制率为７１９ ％ 。结论：具有中和活性的ＶＥＧＦ单抗能抑制肿瘤的生长和转移。 展开更多

关键词 vegf 单克隆抗体 抑瘤试验 肿瘤免疫学

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VEGF在HaCaT细胞中的自分泌作用 被引量：5

12

作者 杨晓红 满孝勇 +3 位作者 蔡绥勍 李春明 周炯 郑敏 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期338-342,共5页

目的:检测VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞中可能的自分泌作用。方法:用MTT法,检测不同浓度外源性VEGF165(0,1,5,10,25,50,100 ng/ml)和不同浓度VEGF特异性抑制剂阿瓦斯丁(0,0.063,0.125,0.25,0.50,1.0,2.0 mg/ml)作用下HaCaT细胞增... 目的:检测VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞中可能的自分泌作用。方法:用MTT法,检测不同浓度外源性VEGF165(0,1,5,10,25,50,100 ng/ml)和不同浓度VEGF特异性抑制剂阿瓦斯丁(0,0.063,0.125,0.25,0.50,1.0,2.0 mg/ml)作用下HaCaT细胞增殖的变化;用细胞迁移实验,检测不同浓度VEGF165和0.5 mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞迁移的变化;蛋白免疫印迹检测10 ng/ml VEGF165和0.5mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化情况。结果:VEGF165剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖和迁移能力;而阿瓦斯丁剂量依赖性地抑制其增殖能力,0.50 mg/ml阿瓦斯丁可以显著性降低其迁移能力;10 ng/ml VEGF165显著性促进HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化,而对0.5 mg/ml阿瓦斯丁预处理过的HaCaT细胞的ERK1/2磷酸化没有促进作用。结论:VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT中存在着自分泌作用。 展开更多

关键词 角蛋白细胞/药物作用 血管内皮生长因子类/药理学 抗体 单克隆/治疗应用 细胞 培养的 HACAT细胞 vegf 阿瓦斯丁 自分泌

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肿瘤诱导产生的CD11b^+Gr1^+髓样抑制细胞介导anti-VEGF治疗的抵抗

13

作者 张永亮 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第6期566-566,共1页

关键词 细胞介导 肿瘤诱导 小鼠LEWIS肺癌 治疗 髓样 vegf 单克隆抗体 黑素细胞瘤

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bFGF单抗联合放疗对小鼠B16移植瘤的协同抑制作用 被引量：6

14

作者 曾世彬 徐萌 +4 位作者 潘兰红 向军俭 邓宁 李丹 王盼盼 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期175-180,共6页

目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mA... 目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mAb组及联合治疗组。各组经相应治疗后,测量移植瘤体积;治疗20 d后处死小鼠,取移植瘤称瘤质量,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡率,免疫组化检测移植瘤组织bFGF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达率及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF-mAb治疗、放疗、联合治疗的抑瘤率分别为30.49%、12.17%和48.76%,联合治疗组的抑瘤率明显高于其他组(P<0.05);与放疗组比较,联合治疗组的放射增敏率为2.37。联合治疗组移植瘤细胞凋亡较放疗组、bFGF-mAb组及对照组明显增多[(58.56±6.47)%vs(17.21±2.86)%,(28.45±5.47)%,(10.62±1.73)%;P<0.05或P<0.01],其bFGF、VEGF表达水平下降,MVD明显减少(P<0.05)。结论:bFGF-mAb联合放疗对B16移植瘤具有协同抑瘤效应,通过降低肿瘤组织bFGF和VEGF表达、抑制血管新生、促进瘤细胞凋亡提高放疗敏感性。 展开更多

关键词 黑素瘤 成纤维细胞因子单克隆抗体(bFGF—mAb) 放射治疗 血管内皮生长因子(vegf) 肿瘤微血管密度 (MVD)

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