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利用荧光素酶报告基因法研究转录因子USF1结合调控马鹿MicroRNA PC-5p-4811基因启动子机制 被引量:1
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作者 高仰 韩青 +4 位作者 吴玄烨 索婧媛 金庆梅 刘学东 郑冬 《野生动物学报》 北大核心 2025年第1期63-71,共9页
为了探究转录因子上游刺激因子1(USF1)调控马鹿(Cervus elaphus)microRNA PC-5p-4811(miR-4811)基因转录的机理,综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变和双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合mi... 为了探究转录因子上游刺激因子1(USF1)调控马鹿(Cervus elaphus)microRNA PC-5p-4811(miR-4811)基因转录的机理,综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变和双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合miR-4811启动子分子机制和功能。结果显示:(1)截切突变证实马鹿miR-4811基因的核心启动子位于上游-3174~-2966 bp;(2)转录因子USF1在-3378~+73 bp区域共有2个DNA结合位点(-3046~-3031 bp、-3045~-3018 bp),均位于miR-4811核心启动子内;(3)USF1作为激活因子可直接结合上述位点激活miR-4811核心启动子上调双荧光素酶报告基因转录表达。研究结果揭示了USF1参与调节microRNA基因转录表达的机理,并为后续USF1/miR-4811调节轴参与调控鹿茸再生发育机制提供了重要基础数据。 展开更多
关键词 usf1 马鹿 MicroRNA PC-5p-4811 启动子 转录调控
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转录因子USF1调控鸡小肠上皮细胞中糖类转运蛋白表达 被引量:2
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作者 张利环 李玲香 +5 位作者 张瑜 原一桐 王文魁 朱芷葳 王钦德 李慧锋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1713-1720,共8页
为了研究转录因子USF1在鸡小肠上皮细胞中调控糖转运蛋白基因表达的机制,本试验在生物信息学分析的基础上通过构建真核表达载体pcDNA3.1-USF1,在鸡小肠上皮细胞中过表达转录因子USF1,用绝对荧光定量PCR的方法检测分析了USF1对SGLT1、GL... 为了研究转录因子USF1在鸡小肠上皮细胞中调控糖转运蛋白基因表达的机制,本试验在生物信息学分析的基础上通过构建真核表达载体pcDNA3.1-USF1,在鸡小肠上皮细胞中过表达转录因子USF1,用绝对荧光定量PCR的方法检测分析了USF1对SGLT1、GLUT2和GLUT5基因表达的影响。结果表明,受到USF1基因过表达的影响,糖类转运蛋白GLUT2和SGLT1 mRNA在鸡小肠上皮细胞中的表达量极显著增高(P<0.01);而GLUT5mRNA表达量没有显著变化(P>0.05)。结合本研究结果,经过对这3个糖类转运蛋白基因5′上游调控区USF1结合位点的深入分析,认为在鸡小肠上皮细胞中转录因子USF1对糖转运蛋白基因GLUT2和SGLT1的表达具有正向调控的作用。 展开更多
关键词 usf1 糖类转运蛋白 过表达 小肠上皮细胞
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猪USF1基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 乔木 武华玉 +4 位作者 黄京书 彭先文 李良华 吴俊静 梅书棋 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第24期6175-6177,6181,共4页
研究克隆了猪USF1基因1 382 bp的cDNA序列(登录号:EF 219407)和5 516 bp的DNA序列(登录号:EF 625885)。序列分析发现猪USF1基因编码区序列与人、小鼠的同源性分别为99%和98%。基因组序列分析发现猪USF1基因包含11个外显子和10个内含子,... 研究克隆了猪USF1基因1 382 bp的cDNA序列(登录号:EF 219407)和5 516 bp的DNA序列(登录号:EF 625885)。序列分析发现猪USF1基因编码区序列与人、小鼠的同源性分别为99%和98%。基因组序列分析发现猪USF1基因包含11个外显子和10个内含子,内含子的剪接方式均符合"GT-AG"法则。 展开更多
关键词 usf1基因 克隆 序列分析
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猪USF1基因的多态性及与生产性状的关联分析 被引量:1
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作者 武华玉 乔木 +5 位作者 黄京书 刘贵生 彭先文 李良华 吴俊静 梅书棋 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第24期6064-6067,共4页
分离克隆了猪USF1基因第10内含子的序列,测序发现在130 bp处存在一T-C突变,引起Alu I酶切多态。利用PCR-RFLP方法对国内外4个猪种USF1基因第10内含子的多态性进行分析,在国外猪种中等位基因T的频率占优势;而在中国猪种中C等位基因的频... 分离克隆了猪USF1基因第10内含子的序列,测序发现在130 bp处存在一T-C突变,引起Alu I酶切多态。利用PCR-RFLP方法对国内外4个猪种USF1基因第10内含子的多态性进行分析,在国外猪种中等位基因T的频率占优势;而在中国猪种中C等位基因的频率占优势;在421头大梅F2代资源家系中进行性状关联分析发现该多态与瘦肥肉比例、屠宰率、平均背膘厚、眼肌宽、眼肌面积、背最长肌含水量显著相关(P<0.05),与瘦肉率、眼肌高极显著相关(P<0.01)。 展开更多
关键词 usf1基因 PCR—PFLP 性状关联分析
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奶山羊USF1基因的克隆与组织表达分析
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作者 李君 邓红雨 +2 位作者 张景锋 侯霞飞 罗军 《中国草食动物科学》 CAS 2018年第1期7-11,共5页
为了获得奶山羊(Capra hircus)USF1基因序列并分析其在不同泌乳时期乳腺组织中的表达规律,从奶山羊乳腺组织中克隆得到USF1基因序列(Gen Bank登录号:MF953285),CDS区序列933 bp,编码310个氨基酸。通过序列比对发现,山羊与牛(Bos taurus... 为了获得奶山羊(Capra hircus)USF1基因序列并分析其在不同泌乳时期乳腺组织中的表达规律,从奶山羊乳腺组织中克隆得到USF1基因序列(Gen Bank登录号:MF953285),CDS区序列933 bp,编码310个氨基酸。通过序列比对发现,山羊与牛(Bos taurus)、猪(Sus scrofa)和人(Homo sapiens)的USF1基因核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,为94%以上。蛋白质结构预测发现,USF1蛋白质结构为典型的螺旋-环-螺旋结构;其蛋白不含跨膜结构域,亚细胞定位在细胞核内。实时荧光定量PCR分析表明,USF1基因在奶山羊泌乳前期、盛期和中期的乳腺组织中m RNA表达量均显著高于干奶期(P<0.05)。因此,USF1可能参与奶山羊乳腺的泌乳过程。该研究可为进一步揭示USF1基因在奶山羊乳腺组织中的功能及对脂质代谢的调控作用提供基础资料。 展开更多
关键词 奶山羊 usf1 克隆 组织表达 序列分析
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miR-33b靶向上游转录因子1基因调控喉癌细胞的作用机制 被引量:2
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作者 倪红 周兴星 喻慧岭 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第2期140-147,共8页
目的微小RNA-33b(miR-33b)是否可通过靶向调控上游转录因子1(USF1)而参与喉癌发生发展过程尚未明确。文中旨在探讨miR-33b靶向USF1对喉癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及机制。方法选取2016年5月至2018年6月华中科技大学同济医学院... 目的微小RNA-33b(miR-33b)是否可通过靶向调控上游转录因子1(USF1)而参与喉癌发生发展过程尚未明确。文中旨在探讨miR-33b靶向USF1对喉癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及机制。方法选取2016年5月至2018年6月华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院43例喉癌患者的喉癌组织标本及癌旁组织标本。采用qRT-PCR与Western blot检测喉癌组织及喉癌TR-LCC-1细胞中miR-33b、USF1的表达。分别将miR-33b mimics及miR-con、si-USF1及si-con转染至TR-LCC-1细胞,分为正常组(常规培养的TR-LCC-1细胞)、miR-con组(miR-con转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b组(miR-33b mimics转染至TR-LCC-1细胞)、si-con组(si-con转染至TR-LCC-1细胞)、si-USF1组(si-USF1转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b+pcDNA组(miR-33b mimics与pcDNA共转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b+pcDNA-USF1组(miR-33b mimics与pcDNA-USF1共转染至TR-LCC-1细胞)。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-33b的靶基因并通过Western blot检测靶基因USF1蛋白表达;Western blot检测Ki-67、MMP-2、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与癌旁组织(1.00±0.32)比较,喉癌组织中miR-33b的表达水平(0.52±0.23)显著降低(P<0.05),USF1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与miR-con组比较,miR-33b组TR-LCC-1细胞的细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),TR-LCC-1细胞的细胞凋亡率、TR-LCC-1细胞中miR-33b、Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与si-con组比较,si-USF1组喉癌TR-LCC-1细胞中USF1蛋白相对表达量、TR-LCC-1细胞的细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2、Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与miR-33b+pcDNA组比较,miR-33b+pcDNA-USF1组喉癌TR-LCC-1细胞中USF1蛋白相对表达量、细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2、Bcl-2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论miR-33b靶向调控USF1抑制喉癌细胞增殖、迁移及侵袭,诱导细胞凋亡,为阐明喉癌的发病机制奠定实验基础。 展开更多
关键词 微小RNA-33b 上游转录因子1 喉癌 增殖 迁移 侵袭 凋亡
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