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PETs对无卤阻燃玻纤增强PA66复合材料性能的影响 被引量：1
1
作者 刘兆真 贾义军 +2 位作者 陈国军 周乐章 王家欣 《工程塑料应用》 北大核心 2025年第5期142-147,共6页
以聚酰胺66(PA66)为基体树脂,添加18%无卤阻燃剂和30%玻璃纤维(GF),使用螺杆直径为30 mm的双螺杆挤出机进行熔融共混挤出,对材料进行无卤阻燃玻纤增强改性,制得无卤阻燃PA66(30%GF增强)复合材料。为优化材料加工性能、力学性能和阻燃效... 以聚酰胺66(PA66)为基体树脂,添加18%无卤阻燃剂和30%玻璃纤维(GF),使用螺杆直径为30 mm的双螺杆挤出机进行熔融共混挤出,对材料进行无卤阻燃玻纤增强改性,制得无卤阻燃PA66(30%GF增强)复合材料。为优化材料加工性能、力学性能和阻燃效果,考察了润滑剂季戊四醇硬脂酸酯(PETs)加入的影响,借助差示扫描量热、热重分析和扫描电子显微镜(SEM)分别对复合材料熔融温度、结晶温度、热失重温度及显微形貌进行测试分析。结果表明:在无卤阻燃PA66(30%GF增强)复合材料中,润滑剂PETs最佳的添加量为1%;润滑剂PETs的使用可有效改善复合材料的流动性,使复合材料与未添加无卤阻燃剂的PA66(30%GF增强)复合材料的熔体流动速率达到同等水平;此时复合材料的综合性能最佳,即拉伸强度为172 MPa、弯曲强度为247 MPa、缺口冲击强度为13 kJ/m2、阻燃性可满足UL94 V-0(0.4 mm)等级、相对漏电起痕指数为600 V、灼热丝起燃温度为725℃,完全满足电子电器元器件对此类复合材料在苛刻工作环境下提出的使用性能要求。此外,添加润滑剂PETs与未添加润滑剂相比,复合材料达到熔融或结晶状态所需能量更低,并对阻燃剂的分布分散效果有所改善,一定程度地影响着熔融温度、结晶温度和质量损失5%的热失重温度,复合材料在SEM下观测到阻燃剂呈均匀稳定连续相分散。 展开更多
关键词 润滑剂 季戊四醇硬脂酸酯 无卤阻燃 聚酰胺66 30%玻纤增强 UL 94等级
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鸭瘟病毒强毒株与弱毒株双重PCR鉴别检测方法的建立与应用
2
作者 周婉婷 崔雪志 +9 位作者 毛秋艳 汪建华 李玉峰 李金平 刘朔 彭程 杨吉喆 侯广宇 刘华雷 蒋文明 《中国动物检疫》 2025年第8期108-114,共7页
鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病... 鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株的双重PCR鉴别检测方法,以提高临床诊断的准确性和效率,通过分析鸭瘟病毒基因组序列,设计针对UL2和LORF5基因的特异性引物,建立了双重PCR方法。该方法具有良好的特异性,能够准确区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株,同时对其他禽类病原无交叉反应:最低可检测到10拷贝的鸭瘟病毒DNA,表现出较高的灵敏度。使用建立的方法对2019-2024年收集的临床疑似鸭瘟病料进行检测,发现经典强毒株集中流行于2019-2022年,而变异强毒株在2023-2024年更为常见,表明鸭瘟病毒优势流行株可能正在发生变化。综上,本研究建立的双重PCR鉴别检测方法为鸭瘟病毒的快速、准确检测提供了技术支持,对鸭瘟防控及流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 UL2基因 LORF5基因 双重PCR 强毒株 变异株
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miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究 被引量：1
3
作者 袁岗 巨虎 +3 位作者 肖宗宇 李文辉 曹立新 惠超杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期507-512,共6页
目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表... 目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。 展开更多
关键词 微小核糖核酸-10b 脑胶质瘤 NK细胞激活受体 主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A UL16结合蛋白2 UL16结合蛋白3
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马疱疹病毒1型UL56蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
4
作者 张玉鉴 撒瑞雪 +7 位作者 吴桂灵 杨凯舒 张嗣玉 李银涛 齐晋卫 杨贤斌 邓智超 刘建华 《现代畜牧科技》 2024年第4期1-6,共6页
为制备马疱疹病毒1型(EHV-1)UL56蛋白(pUL56)的多克隆抗体。该研究根据GenBank中EHV-1 YM2019株全基因组序列,采用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠并制备pUL56多克隆抗体,经Western blot与间接ELISA试验测定多... 为制备马疱疹病毒1型(EHV-1)UL56蛋白(pUL56)的多克隆抗体。该研究根据GenBank中EHV-1 YM2019株全基因组序列,采用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠并制备pUL56多克隆抗体,经Western blot与间接ELISA试验测定多克隆抗体反应性。结果显示,纯化后的pUL56可以与EHV-1阳性血清发生反应;pUL56多克隆抗体的效价为1∶128 000,并能与pUL56特异性结合。本研究成功制备具有良好反应性的pUL56多克隆抗体,为pUL56功能特性及EHV-1致病机制的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 UL56蛋白 原核表达 多克隆抗体
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支持双协议栈的IP over DVB-S网关系统 被引量：3
5
作者 李军 蒋海 +1 位作者 叶新铭 李忠诚 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期111-113,共3页
IPoverDVB是实现IP数据广播的关键技术,ULE是其最新的封装协议。以卫星网为背景,阐述了IPoverDVB-S转换网关系统设计和实现的关键技术。该网关兼容支持IPv4/IPv6双协议、MPE/ULE2种封装方式,给出了其在远程教育中的典型应用。对其它数... IPoverDVB是实现IP数据广播的关键技术,ULE是其最新的封装协议。以卫星网为背景,阐述了IPoverDVB-S转换网关系统设计和实现的关键技术。该网关兼容支持IPv4/IPv6双协议、MPE/ULE2种封装方式,给出了其在远程教育中的典型应用。对其它数据广播网关的设计与应用具有参考价值。 展开更多
关键词 IP overDVB IPV6 ule 数据广播
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弹性梁式薄板在横向绕流中的大变形 被引量：8
6
作者 郝亚娟 白象忠 《应用力学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期304-307,共4页
采用相容拉格朗日-欧拉(ULE)法,给出了弹性薄板理想流体横向绕流条件下变形与应力的理论算法,其中:对固体采用拉格朗日法;对流体采用欧拉法;对相互接触面采用拉格朗日法和欧拉法。建立了不间断横向绕流条件下弹性梁式薄板的大弯曲变形... 采用相容拉格朗日-欧拉(ULE)法,给出了弹性薄板理想流体横向绕流条件下变形与应力的理论算法,其中:对固体采用拉格朗日法;对流体采用欧拉法;对相互接触面采用拉格朗日法和欧拉法。建立了不间断横向绕流条件下弹性梁式薄板的大弯曲变形的非线性微分方程。求解该方程时,将纵向位移分量和曲率的改变量用挠度表示。通过具体算例分析了各参数对悬臂梁式薄板挠度、纵向位移及应力大小的影响。理论解与数值解进行比较,验证了理论解的可靠性。 展开更多
关键词 流固耦合 相容拉格朗日-欧拉(ule)法 梁式板 挠度 纵向位移 应力
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基于NDIS的IPv6 over DVB-S接收网关设计与实现 被引量：1
7
作者 陈海峰 张大方 +1 位作者 蒋海 王嘉 《科学技术与工程》 2007年第5期914-918,共5页
NDIS是Windows操作系统的网络接口规范。IPoverDVB是在DVB网络上传输IP数据的关键技术。文中阐述了基于WindowsNDIS结构的IPv6overDVB-S接收网关的设计和实现方法。该接收网关支持ULE与MPE封装方式,支持IPv6和IPv4协议,并已在远程教育... NDIS是Windows操作系统的网络接口规范。IPoverDVB是在DVB网络上传输IP数据的关键技术。文中阐述了基于WindowsNDIS结构的IPv6overDVB-S接收网关的设计和实现方法。该接收网关支持ULE与MPE封装方式,支持IPv6和IPv4协议,并已在远程教育实践中得到应用。 展开更多
关键词 window8 NDIS IP OVER DVB-S IPV6 ule封装
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鸭瘟病毒北京株UL6和UL7基因的克隆及序列测定 被引量：17
8
作者 郭霄峰 廖明 辛朝安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期615-618,共4页
依据文献报道的鸭瘟病毒 (DPV)的核苷酸序列 ,设计和合成了二对引物 ,分别为SP1和SP2 ,LP1和LP2。北京株鸭瘟病毒于鸭胚中增殖 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化 ,按酚 氯仿法抽提DNA。然后以DPVDNA为模板进行PCR ,分别扩散增出与理论... 依据文献报道的鸭瘟病毒 (DPV)的核苷酸序列 ,设计和合成了二对引物 ,分别为SP1和SP2 ,LP1和LP2。北京株鸭瘟病毒于鸭胚中增殖 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化 ,按酚 氯仿法抽提DNA。然后以DPVDNA为模板进行PCR ,分别扩散增出与理论相符的 42 1bp和 1 2 0 9bp的二个DNA片段 ,并将它们克隆于质粒pGEM TEasy中。经酶切和质粒PCR ,筛选含有目的基因的重组质粒。重组质粒以步移法从双方向测序 ,获 1 586bp的核苷酸序列。研究发现这 1 586bp的核苷酸序列与文献报道的UL6和UL7基因序列的同源性为 99% ,仅有一个碱基的差异。进一步作氨基酸分析 ,发现这个碱基所引起的变异为无意义突变 (CCT→CCC)。结果表明 。 展开更多
关键词 鸭瘟 病毒 北京株 UL6 UL7 分子克隆 基因测序
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鸭瘟病毒的分离鉴定及其UL2、TK基因序列分析 被引量：12
9
作者 刘荣昌 黄瑜 +7 位作者 卢荣辉 傅秋玲 江斌 万春和 傅光华 程龙飞 施少华 陈红梅 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1257-1261,共5页
2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒... 2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒。对新分离鉴定的2株鸭瘟病毒株的UL2基因进行序列测定及分析发现,均具有强毒株的分子特征;经TK基因序列测定及分析表明,2株新分离的鸭瘟病毒株与强毒代表株、弱毒疫苗株的TK基因核苷酸同源性均高达98.7%。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分离鉴定 UL2基因 TK基因 序列分析
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伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究 被引量：10
10
作者 张辉 方六荣 +4 位作者 赵骞 薛念波 江云波 肖少波 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期369-375,共7页
UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV-Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的U... UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV-Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的UL14插入失活突变株PRV-UL14D。将PRV-UL14D感染IBRS-2细胞,发现该突变株较PRV-Ea野毒株增殖缓慢,而且PRV-UL14D突变株感染细胞后形成的蚀斑也明显小于PRV-Ea野毒株,但在稳定表达UL14的IBRS-2细胞系中,PRV-UL14D与PRV-Ea野毒株的增殖速度、形成的蚀斑大小均无明显差异。进一步将PRV-UL14D感染BALB/c小鼠,发现与相同剂量的PRV-Ea野毒株感染相比,小鼠平均死亡时间明显延缓。上述研究结果表明,UL14并非伪狂犬病毒增殖必需的,但其缺失可延缓病毒增殖,推测UL14可能与病毒粒子在细胞间的扩散有关。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 UL14 突变株 生物学特性
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伪狂犬病病毒Ea株UL54基因的克隆与序列分析 被引量：9
11
作者 方六荣 陈焕春 +2 位作者 肖少波 徐引娣 何启盖 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期103-106,共4页
根据伪狂犬病病毒国外Ka株UL5 4基因核苷酸序列 ,设计一对包含UL5 4基因完整编码区的引物 ,以伪狂犬病病毒国内地方分离株Ea株细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.1kb特异性带。将纯化的扩增产物克隆到pBluescriptⅡsk +中 ,酶切分析... 根据伪狂犬病病毒国外Ka株UL5 4基因核苷酸序列 ,设计一对包含UL5 4基因完整编码区的引物 ,以伪狂犬病病毒国内地方分离株Ea株细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.1kb特异性带。将纯化的扩增产物克隆到pBluescriptⅡsk +中 ,酶切分析证实后经双脱氧末端终止法进行全序列测定 ,序列分析结果表明Ea株UL5 4基因全长 10 86bp ,可编码 36 1个氨基酸。由二级结构预测数据推断C 末端具有典型的锌指结构域。运用Blast软件与Ka株UL5 4基因进行同源比较 ,发现Ea株UL5 4基因在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处点突变 ,但无插入或缺失突变 ;将Ea株UL5 4氨基酸序列同其它 4种α 疱疹病毒 (HSV 1、HSV 2、VZV、EHV 1)进行同源比较 ,同源性分别为 47%、36 %、36 %和 44 %。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Ea株 UL54基因 克隆 序列分析
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基于玉米幼苗电位波动的脉冲电场生物学效应 被引量：10
12
作者 习岗 刘锴 +1 位作者 杨运经 高宇 《高电压技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期129-134,共6页
为了获取显著的电场生物学效应,通过小波降噪和功率谱分析研究了玉米幼苗本征电位波动的基本特征。研究发现,玉米幼苗本征电位波动的功率谱主要分布在1Hz以内,重心频率为0.2Hz。采用电场强度为100kV/m、频率为0.2Hz的极低频脉冲电场处... 为了获取显著的电场生物学效应,通过小波降噪和功率谱分析研究了玉米幼苗本征电位波动的基本特征。研究发现,玉米幼苗本征电位波动的功率谱主要分布在1Hz以内,重心频率为0.2Hz。采用电场强度为100kV/m、频率为0.2Hz的极低频脉冲电场处理萌发玉米种子,在萌发第5d时玉米种子的质量、芽长和根长分别比对照组增加17.55%、60.13%和28.50%。分析萌发种子超弱发光的变化时发现,在萌发第5d时,处理组玉米种子的自发发光和延迟发光积分强度分别比对照组增加了68.84%和33.93%,表明0.2Hz脉冲电场加速了玉米萌发过程中DNA合成反应和细胞代谢。脉冲电场与植物电位的耦合共振可能是极低频脉冲电场具有显著生物学效应的原因。 展开更多
关键词 脉冲电场(PEF) 生物学效应 植物电位 超弱发光(UL) 耦合共振 玉米
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靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制 被引量：7
13
作者 吕延成 潘晓瑜 +2 位作者 周丹丹 袁俊杰 黄畅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期759-766,共8页
按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.... 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制. 展开更多
关键词 RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27基因
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鸭肠炎病毒强毒和疫苗弱毒鉴别诊断PCR方法的建立 被引量：5
14
作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第3期219-224,共6页
为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0... 为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0,设计一组可对DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因进行编码区全长扩增的特异性引物,经条件优化后建立DEV强毒和疫苗弱毒鉴别诊断的PCR方法。结果表明,DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上存在528bp的连续核苷酸序列缺失。优化后的PCR方法最佳退火温度为55℃,对DEV强毒和疫苗弱毒扩增片段大小分别为1 019bp和491bp;敏感性强,最低检测限为15.3pg;特异性好,对鸭源常见传染病(如番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)均无特异性扩增。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 强毒 疫苗弱毒 UL2基因 PCR 鉴别诊断
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敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制 被引量：7
15
作者 冯海 张浩 +3 位作者 屠静 罗凌琪 周琦 彭宜红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1025-1030,共6页
按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染... 按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染法将其转染入HEK(human embryonic kidney)293细胞中,用蛋白印迹法检测对HSV-2 UL30蛋白表达的影响,观察受染细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),终点滴定法测定细胞上清液中病毒感染滴度(50%tissue culture infective dose,TCID50).结果表明,针对UL30基因的siRNA能有效抑制UL30蛋白表达,同时显著抑制受染细胞的CPE,降低上清液中病毒感染滴度.提示本研究建立的针对UL30基因特异性siRNA能有效阻断HSV-2在HEK293细胞内的复制,UL30基因是一个潜在的抗HSV-2复制的药物靶标. 展开更多
关键词 RNA干扰 单纯疱疹病毒Ⅱ型 UL30 TCID50
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR快速检测鸭瘟病毒的研究 被引量：11
16
作者 汤承 索化夷 +2 位作者 岳华 杨发龙 汤明 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第9期25-27,共3页
根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准... 根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准强毒、疫苗毒及野毒株均为阳性,检测其他受试的非鸭瘟病毒DNA均为阴性,对鸭瘟强毒和疫苗毒人工感染鸭胚尿囊液的检出率均为100%,对6个临床送检样本的检出率为6/6,与病毒分离鉴定结果一致;最小检出量为1.57×104拷贝/ul。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 UL6和UL7基因 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR
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桥序列在构建人工核酶M1GS中的作用 被引量：4
17
作者 郑永霞 李弘剑 +4 位作者 李月琴 陈浩军 唐冬生 张欣 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-155,共5页
目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活... 目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活性。结果:有桥序列的M1GS具备体外特异切割底物的核酶活性,而无桥序列的M1GS核酶未表现体外切割活性。 展开更多
关键词 核酶 核酶P 人巨细胞病毒 UL54基因
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转录因子GATA-1与人巨细胞病毒UL111A基因5＇上游序列结合的实验研究 被引量：5
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作者 田可港 浮苗 +6 位作者 高艳 彭颖 李祥 郑晓群 徐志伟 宋建华 吕建新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2244-2249,共6页
目的:利用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潜伏及再激活感染THP-1细胞模型,研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5'上游DNA序列的相互作用。方法:采用免疫印迹(Western blotting)技术定量分析HCMV潜伏及再激活感... 目的:利用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潜伏及再激活感染THP-1细胞模型,研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5'上游DNA序列的相互作用。方法:采用免疫印迹(Western blotting)技术定量分析HCMV潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子GATA-1的表达;通过MATCH工具软件分析UL111A基因5'上游DNA序列,发现存在着11个GATA-1的结合位点,针对这11个GATA-1结合位点DNA序列设计9对引物,采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)及实时荧光定量PCR技术分析转录因子GATA-1与UL111A基因5'上游DNA序列的结合情况。结果:HCMV潜伏感染时UL111A基因未表达cmvIL-10,激活感染时表达cmvIL-10,潜伏感染时转录因子GATA-1的相对表达量高于激活感染;以GATA-1抗体特异性结合的DNA片段为模板,9对引物中共有5对扩增出目的条带;HCMV潜伏感染组和激活感染组5个位点转录因子GATA-1结合率分别为:-4.00±0.26、-4.50±0.33、-4.41±0.21、-3.61±0.20、-3.47±0.11和-1.13±0.07、-0.63±0.05、-1.10±0.07、-0.24±0.03和-0.14±0.01,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HCMV感染时转录因子GATA-1可能通过与UL111A基因5’上游序列1119(-3760)位点、107(-4772)位点、609(-4270)位点、849(-4030)位点和2047(-2832)位点结合,调节UL111A基因的转录,参与HCMV潜伏与再激活感染的过程。 展开更多
关键词 转录因子GATA-1 HCMV潜伏感染 UL111A
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单纯疱疹Ⅱ型病毒UL29基因shRNA表达载体的干扰效应 被引量：7
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作者 黄畅 潘晓瑜 +1 位作者 袁俊杰 吕延成 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第5期691-694,共4页
目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂... 目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂质体转染到HEK293细胞。再将HSV-2接种到HEK293细胞中。采用终点滴定法检测病毒滴度,RT-PCR检测shRNA对转录水平的影响,Western-blot检测shRNA对蛋白质表达水平的影响。结果:终点滴定法结果显示UL29shRNA各组均可不同程度降低病毒感染滴度,与空白组(未转染重组表达载体)比较差异显著(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,4组抑制率分别为28.80%、59.95%、66.08%、36.27%,差异均具有显著性(P<0.05),shRNANC(不针对任何基因的序列)与空白组相比差异无显著性,其中以UL29shRNA1461组效果为最佳。Western-blot检测表明UL29shRNA各组ICP8蛋白表达水平比阴性对照组明显降低。结论:UL29shRNA能有效干扰HSV-2UL29基因的表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。 展开更多
关键词 疱疹病毒2型 人 RNA干扰 SHRNA UL29基因
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人ULBP3在不同肿瘤细胞和肿瘤组织的检测及分析 被引量：5
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作者 毛朝明 牟笑 +3 位作者 蒋茜 许铖铖 刘红利 郑婷婷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1307-1310,共4页
目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达。方法流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组... 目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达。方法流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中ULBP3的表达;时间分辨荧光免疫分析法检测肿瘤细胞株培养上清和肿瘤患者血清可溶性ULBP3(sULBP3)的水平。反转录PCR方法检测ULBP3 mRNA在肿瘤中的表达。结果 ULBP3在SW620细胞、SGC7901细胞中表达,在A549细胞中不表达;ULBP3在结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中广泛分布;sULBP3存在于SW620细胞、SGC7901细胞培养上清液和结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌患者血清中。结论 ULBP3可在不同实体中肿瘤细胞表达,血清sULBP3是潜在的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 UL16结合蛋白3 自然杀伤细胞 肿瘤免疫
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