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Tyro3缺失加重LPS诱导的小鼠内毒素血症
1
作者 汪洁 方瑞琪 +4 位作者 李猛 杨青 柏惠 李晓宇 陈琪 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第8期1123-1131,共9页
目的:探究Tyro3蛋白酪氨酸激酶(Tyro3 protein tyrosine kinase,Tyro3)在内毒素血症中的作用及其分子调控机制。方法:基于GEO数据库(GSE54514)分析脓毒症患者外周血Tyro3的表达谱;建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导(10 mg/kg,腹... 目的:探究Tyro3蛋白酪氨酸激酶(Tyro3 protein tyrosine kinase,Tyro3)在内毒素血症中的作用及其分子调控机制。方法:基于GEO数据库(GSE54514)分析脓毒症患者外周血Tyro3的表达谱;建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导(10 mg/kg,腹腔注射)的内毒素血症小鼠模型,比较Tyro3全身基因敲除(Tyro3^(-/-))与野生型(Tyro3^(+/+))小鼠的疾病严重程度(临床评分、96 h生存率)、血浆炎症因子水平及肝脏急性炎症病理改变。同时,分离培养Tyro3^(+/+)和Tyro3^(-/-)小鼠的骨髓源性巨噬细胞,通过LPS(100 ng/mL)刺激建立体外急性炎症模型,检测LPS诱导的核因子κB(nuclear factor kappa⁃B,NF⁃κB)炎症通路的激活情况。结果:临床数据分析显示脓毒症患者外周血Tyro3表达显著下调。动物实验表明,与Tyro3^(+/+)小鼠相比,Tyro3^(-/-)小鼠表现出更严重的脓毒症表现:临床评分显著降低,生存率显著下降,血浆炎症因子水平显著升高,肝脏急性炎性损伤更严重,炎症细胞浸润更明显。体外实验研究发现,Tyro3缺失导致巨噬细胞NF⁃κB通路过度激活,表现为kappa B抑制因子激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)、NF⁃κB p65亚基的磷酸化水平增加及核因子κB抑制蛋白α(NF⁃kappa⁃B inhibitor alpha,IκB⁃α)的降解加速。使用蛋白S(protein S,Pros1)激活Tyro3可以有效抑制LPS诱导的NF⁃κB通路激活。结论:Tyro3通过负调控巨噬细胞NF⁃κB信号通路减轻内毒素血症诱导的相关炎症反应及肝脏损伤,提示靶向Tyro3⁃NF⁃κB轴可能是内毒素血症治疗的潜在策略。 展开更多
关键词 tyro3 内毒素血症 巨噬细胞 炎症 NF⁃κB
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宿主分子Tyro3对猪瘟病毒复制的影响及其与E2蛋白相互作用的研究 被引量：2
2
作者 屈亮 郑光来 +2 位作者 于少雄 仇华吉 李素 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1184-1191,共8页
本研究室前期研究发现受体酪氨酸激酶家族(TAM)成员Mertk为猪瘟病毒(CSFV)的侵入因子。为研究TAM受体家族另外两个成员Tyro3及Axl对CSFV复制的影响,本研究设计并合成了针对Tyro3、Mertk、Axl的siRNA(siTyro3、siMertk、siAxl)和一条无关... 本研究室前期研究发现受体酪氨酸激酶家族(TAM)成员Mertk为猪瘟病毒(CSFV)的侵入因子。为研究TAM受体家族另外两个成员Tyro3及Axl对CSFV复制的影响,本研究设计并合成了针对Tyro3、Mertk、Axl的siRNA(siTyro3、siMertk、siAxl)和一条无关siRNA(siNC),将这3种siRNA分别转染PK-15细胞,24 h后以MOI 0.01感染CSFV-SM,48 h后经荧光定量PCR检测各分子的表达以及CSFV基因拷贝数。荧光定量PCR结果显示,3种siRNA分子均能够下调PK-15细胞中Tyro3、Axl和Mertk的转录水平,且下调Mertk、Tyro3后CSFV基因组拷贝数均极显著降低,下调Axl后CSFV基因组拷贝数却无显著变化。因此选择siTyro3转染PK-15细胞后以MOI 0.01CSFV-SM感染PK-15细胞,通过荧光定量PCR及间接免疫荧光试验(IFA)检测siTyro3的转录水平以及CSFV的复制情况,结果显示,Tyro3基因的转录水平、CSFV基因组拷贝数及病毒滴度均显著降低,表明下调Tyro3的表达能够抑制CSFV的复制。按常规方法包装制备Tyro3慢病毒Lenti-Tyro3-HA,将其转导PK-15细胞,传10代后每代均经荧光显微镜观察,并将第10代转导细胞分别经荧光定量PCR和western blot鉴定。结果可见转导的细胞每代均发出绿色荧光,荧光定量PCR和western blot结果显示,第10代转导细胞中Tyro3基因的转录水平极显著上升,且可检测到Tyro3的特异性条带。表明获得了稳定表达Tyro3蛋白的PK-15细胞系PK-Tyro3-HA。将CSFV-SM分别以MOI 1和0.1感染PK-Tyro3-HA细胞系后经荧光定量PCR检测,结果显示CSFV基因组拷贝数分别升高了1.5倍(MOI 1)和2.3倍(MOI 0.1),表明过表达Tyro3后能够促进细胞中CSFV的复制。将不同剂量的兔源Tyro3多克隆抗体(pAb)与PK-15细胞共孵育,封闭PK-15细胞表面Tyro3表位后感染rCSFV-Rluc,经海肾荧光素酶检测,结果显示,20μg/mL和40μg/mL的Tyro3 pAb孵育细胞后再感染rCSFV-Rluc组的海肾荧光素酶活性显著降低,表明Tyro3 pAb能够抑制CSFV的复制。将pCAGGS-Tyro3-HA分别与pCAGGS-E2-Flag、pCAGGS-Erns-Flag共转染HEK293T细胞48 h后,进行免疫共沉淀试验,结果显示Tyro3与CSFV E2囊膜糖蛋白存在相互作用。综上,本研究首次证实Tyro3通过与CSFV E2囊膜糖蛋白的相互作用促进CSFV在PK-15细胞中的复制,为进一步揭示CSFV与宿主细胞的相互作用提供参考依据。 展开更多
关键词 tyro3 TAM受体 猪瘟病毒
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Toll样受体信号通路与TAM受体在炎症性肠病中的作用 被引量：9
3
作者 贺雅静 谢勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1271-1273,1278,共4页
炎症性肠病(IBD)的发病率逐年升高,其带来的社会经济负担和对患者生活质量的负面影响不容小觑。IBD包括溃疡性结肠炎(UC)、克罗恩病(CD)以及未定型肠炎(IC),是一组发病机制尚不明确的肠道慢性炎症性疾病。近年来,研究发现Toll样受体(TLR... 炎症性肠病(IBD)的发病率逐年升高,其带来的社会经济负担和对患者生活质量的负面影响不容小觑。IBD包括溃疡性结肠炎(UC)、克罗恩病(CD)以及未定型肠炎(IC),是一组发病机制尚不明确的肠道慢性炎症性疾病。近年来,研究发现Toll样受体(TLR)信号通路在IBD的发病过程中起重要作用。TAM受体是新进发现的1个受体酪氨酸激酶(RTKs)亚家族,具有包括免疫调控在内的多种生物学功能。此外,TAM受体还可通过负性调控TLR信号通路,从而在IBD中发挥抑炎作用。现就TLR信号通路与TAM受体在IBD中作用的研究进展作一概述。 展开更多
关键词 TOLL样受体 TAM受体 炎症性肠病
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