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SDS-CTAB结合法提取棉花总DNA 被引量:58
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作者 孙鑫 崔洪志 +1 位作者 胡宝忠 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第5期45-47,共3页
根据以往提取棉花总DNA的经验 ,并参考了几种相关的植物总DNA提取方法 ,得到一种更适合棉花 (GossypiumL .)总DNA提取的方法。该提取方法综合了SDS法与CTAB法的优点 ,使获得的棉花总DNA纯度高 ,得率大 ,完整性较好 ,可用于PCR检测 ,Sout... 根据以往提取棉花总DNA的经验 ,并参考了几种相关的植物总DNA提取方法 ,得到一种更适合棉花 (GossypiumL .)总DNA提取的方法。该提取方法综合了SDS法与CTAB法的优点 ,使获得的棉花总DNA纯度高 ,得率大 ,完整性较好 ,可用于PCR检测 ,Southern杂交 ,RAPD ,染色体步移等分子生物学操作。 展开更多
关键词 dna 棉花 CTAB法 PCR检测 RAPD SDS法 提取方法 分子生物学 SOUTHERN杂交 染色体
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一种简易的昆虫基因组DNA提取方法 被引量:81
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作者 田英芳 黄刚 +1 位作者 郑哲民 魏朝明 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期82-84,共3页
报道了一种改进的昆虫基因组DNA 的提取方法.结果表明,该方法可在常温条件下,对多种昆虫及人体组织进行酚/氯仿抽提,DNA 得率较高,OD260/280 的值在1.6~1.9 之间.
关键词 基因组 dna提取 昆虫
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小麦表面微生物总DNA提取方法的比较与改进 被引量:14
3
作者 吴坤 陈红歌 +1 位作者 刘娜 李慧敏 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期34-38,共5页
对小麦表面微生物总DNA提取方法进行了探讨 ,从液氮冻融 ,裂解剂 ,蛋白酶K的加入 ,缓冲液等方面对SDS与SDS/CTAB两种方法加以改进。结果表明 ,改进后SDS法提取的DNA降解现象与纯度有很大改善 ,量也有所增加 ;SDS/CTAB法改进后浓度与提... 对小麦表面微生物总DNA提取方法进行了探讨 ,从液氮冻融 ,裂解剂 ,蛋白酶K的加入 ,缓冲液等方面对SDS与SDS/CTAB两种方法加以改进。结果表明 ,改进后SDS法提取的DNA降解现象与纯度有很大改善 ,量也有所增加 ;SDS/CTAB法改进后浓度与提取率明显增加 ,纯度也较高。两种方法改进后提取的DNA分子量大小都集中在 2 3kb左右 ,且不经纯化可直接扩增出 展开更多
关键词 小麦 表面微生物 dna 提取方法 SDS法 SDS/CTAB法
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葡萄总DNA提取方法的比较研究 被引量:26
4
作者 党尉 尉亚辉 +1 位作者 张华平 刘科 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期572-574,602,共4页
以葡萄幼叶为材料,分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、高盐低pH法、简易法、高盐沉淀法和改良十二烷基硫酸钠(SDS)法5种方法提取总DNA,通过A260/A280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对5种方法所得DNA溶液进行定量、定性分析和综合比较。... 以葡萄幼叶为材料,分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、高盐低pH法、简易法、高盐沉淀法和改良十二烷基硫酸钠(SDS)法5种方法提取总DNA,通过A260/A280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对5种方法所得DNA溶液进行定量、定性分析和综合比较。结果显示高盐低pH法、高盐沉淀法综合效果较好,改良SDS法所得DNA纯度最佳。因此,在实际工作中还应根据实验目的选取最适合的方法。 展开更多
关键词 葡萄 dna(脱氧核糖核酸) 提取方法 聚合酶链反应
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紫菜丝状体DNA的提取 被引量:10
5
作者 王勇 裴鲁青 +3 位作者 骆其君 刘必谦 费志清 薛庆中 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期146-148,共3页
1 引言 紫菜(PorPhyra spp.)是一种大型红藻,它的孢子体世代是丝状体.丝状体适于在常温条件下(20℃左右)长期保存和培养,是筛选丝状体优良栽培品系,利用光生物反应器进行紫菜育苗的理想材料.紫菜细胞含有大量胞外多糖,主要以硫酸... 1 引言 紫菜(PorPhyra spp.)是一种大型红藻,它的孢子体世代是丝状体.丝状体适于在常温条件下(20℃左右)长期保存和培养,是筛选丝状体优良栽培品系,利用光生物反应器进行紫菜育苗的理想材料.紫菜细胞含有大量胞外多糖,主要以硫酸基多糖和羧基多糖形式存在,它们比陆生植物的中性多糖更易溶于水,与DNA产生共沉淀,从而影响限制性内切酶的消化和PCR扩增.另外,紫菜细胞DNA含量较少,DNA酶含量却很高,使紫菜DNA提取的得率不足[1].RAPD技术已用于紫菜的种质鉴定和遗传多样性研究[2-4],但是。 展开更多
关键词 紫菜 丝状体 dna RAPD-PCR 氯化锂 电泳 提取
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深海沉积物中微量DNA的提取及应用 被引量:11
6
作者 赵晶 张锐 +1 位作者 林念炜 曾润颖 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期313-321,共9页
采用化学裂解和酶解相结合的方法 ,进行了深海沉积物中微量DNA的提取 ,并采用DNA吸附树脂进行纯化。结果表明 ,该方法能有效地去除沉积物中的腐殖酸等抑制剂 ,每克湿重沉积物样品可得到DNA约 1 6 μg,回收率可达 95 % ,所得到的DNA分子... 采用化学裂解和酶解相结合的方法 ,进行了深海沉积物中微量DNA的提取 ,并采用DNA吸附树脂进行纯化。结果表明 ,该方法能有效地去除沉积物中的腐殖酸等抑制剂 ,每克湿重沉积物样品可得到DNA约 1 6 μg,回收率可达 95 % ,所得到的DNA分子片段均在 2 3kb左右 ,纯化后的DNA可直接应用于各种分子生物学操作。利用细菌 1 6SrDNA通用引物对所提取的深海沉积物DNA进行了PCR RFLP及系统发育分析 ,各主要细菌类群均能检出 ,证实该方法可以应用于深海等极端环境中微生物的多样性调查、系统发育分析以及特殊功能基因的筛选 。 展开更多
关键词 深海沉积物 化学裂解 酶解 dna 腐殖酸 分子生物学 生物量 海洋生物生态
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一种提取动物基因组总DNA的野外样品保存方法 被引量:21
7
作者 蔡振媛 张同作 +2 位作者 连新明 慈海鑫 苏建平 《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第3期473-477,共5页
为了确定一种方便的野外动物样品保存方法,以新鲜材料作对照,从-20℃冰箱、70%乙醇、含50mmol/L EDTA的70%乙醇、95%乙醇、液氮处理的高原鼠肌肉和肝脏组织中提取基因组总DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对提取的基因组总DNA... 为了确定一种方便的野外动物样品保存方法,以新鲜材料作对照,从-20℃冰箱、70%乙醇、含50mmol/L EDTA的70%乙醇、95%乙醇、液氮处理的高原鼠肌肉和肝脏组织中提取基因组总DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对提取的基因组总DNA质量进行检测。结果显示:相同处理的肝脏DNA产量大,肌肉组织提取的DNA质量好;各种保存方法提取的DNA降解程度依次为,-20℃冰箱、70%乙醇>含50mmol/L EDTA的70%乙醇、95%乙醇>液氮>新鲜。选择新鲜肌肉和95%酒精处理的肌肉样品提取的总DNA作模板,进行微卫星PCR扩增,均可获得清晰的电泳带。将该方法用于高原鼢鼠,进行线粒体12S rRNA、Cytb和D-loop区测序,结果显示该方法保存的样品与新鲜样品没有差别。因此,在野外用95%乙醇固定肌肉样品是一种可行的样品保存方法。 展开更多
关键词 野外取样 高原鼠兔 高原鼢鼠 样品保存方法 dna提取
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福建柏总DNA的快速简便提取和鉴定 被引量:9
8
作者 李晓青 叶冰莹 +2 位作者 陈由强 朱锦懋 安平 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期51-56,共6页
本文介绍了福建柏Fokieniahodginsii(Dunn)HenryetThomas总DNA的提取介质组成分 ,建立了一个快速、简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶、干叶、种子总DNA的方法。该方法所提DNA的产率分别为 :1 5 0~ 2 5 0 μg/g鲜叶 ,1 0 0~ 1 5 0 μg/... 本文介绍了福建柏Fokieniahodginsii(Dunn)HenryetThomas总DNA的提取介质组成分 ,建立了一个快速、简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶、干叶、种子总DNA的方法。该方法所提DNA的产率分别为 :1 5 0~ 2 5 0 μg/g鲜叶 ,1 0 0~ 1 5 0 μg/g干叶和 1 4 0~ 1 6 0 μg/g种子 ;绝大多数粗提总DNAOD2 6 0 /OD2 80 =1 .80±0 .0 2 ;提取的鲜叶、种子和单种子胚乳总DNA皆为 4 8kb,而干叶总DNA为 5 0Kb ,都适于限制性酶切和RAPD反应 ;一般实验时间为 4h。该方法既不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 ,也不需氯仿 :异戊醇抽提 ,粗提的总DNA样品不经RNase消化即可用于RAPD反应或经RNase消化用于限制性酶切 ,因此 ,具有高产率、高纯度、高质量和快速简便等优点。尤其是它所提取的干叶DNA ,适于限制性酶切和PCR反应 ,解决了取材上的不便。实验中还发现 :( 1 )提取DNA之前去除叶绿素与否 ,对提取福建柏总DNA无明显影响。 ( 2 )只有去除RNA的福建柏总DNA样品 ,才能被限制性内切酶完全切开。 ( 3)RAPD模板中含RNA及一定量的蛋白质 ,均不影响扩增效果。 ( 4 )同一个体的鲜叶、干叶、种子总DNA样品 ,皆可得到完全一致的扩增产物。 展开更多
关键词 福建柏 dna 提取 提取介质 RAPD 鉴定
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山楂总DNA提取方法的比较 被引量:10
9
作者 李媛媛 代红艳 +2 位作者 郭修武 刘海涛 常琳琳 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期115-118,共4页
为选择一种快速、简单、有效的山楂总DNA的提取方法,分别应用改良CTAB法、改良SDS法和QIAGEN试剂盒法提取山楂幼嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对所提取的总DNA进行检测。QIAGEN试剂盒法简单省时,提取的山楂总DN... 为选择一种快速、简单、有效的山楂总DNA的提取方法,分别应用改良CTAB法、改良SDS法和QIAGEN试剂盒法提取山楂幼嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对所提取的总DNA进行检测。QIAGEN试剂盒法简单省时,提取的山楂总DNA产量高、纯度高、杂质少、DNA碎片少。以该法提取的总DNA为模板进行RAPD扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。QIAGEN试剂盒法是较为理想的山楂总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究。 展开更多
关键词 山楂 dna 提取方法 RAPD
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总DNA介导鱼类基因转移的初步研究 被引量:21
10
作者 刘汉勤 郭文 +1 位作者 王铁辉 陈宏溪 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期286-288,共3页
自七十年代我国开始将外源总DNA转移技术应用于棉花和水稻品种改良的研究中,但至今尚未见有关鱼类总DNA转移成功的报道。本实验采用显微注射和精于载体的方法将鲫鱼肝总DNA转移到红鲤受精卵,利用鯽鱼和红鲤在孵化前后色素表达的差异来... 自七十年代我国开始将外源总DNA转移技术应用于棉花和水稻品种改良的研究中,但至今尚未见有关鱼类总DNA转移成功的报道。本实验采用显微注射和精于载体的方法将鲫鱼肝总DNA转移到红鲤受精卵,利用鯽鱼和红鲤在孵化前后色素表达的差异来筛选转移基因个体。此方法无需克隆目的基因及DNA重组操作,而且筛选简便,目的在于探讨总DNA转移方法应用于鱼类品种改良的可能性。 展开更多
关键词 鱼类 脱氧核糖核酸 基因转移
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快速提取烟草DNA的方法 被引量:13
11
作者 朱生伟 史芝文 +1 位作者 徐淑芬 朱祥春 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第3期275-278,共4页
利用快速、简易,适于烟草的DNA提取方法。可以获得较纯净、高产率、大分子量的DNA,以满足植物分子育种的要求。
关键词 烟草 dna 提取 纯度 分子育种 dna提取
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茄子雄性不育株和可育株的胞质DNA和核DNA差异分析 被引量:9
12
作者 刘选明 牛友芽 +2 位作者 袁小川 秦玉芝 唐冬英 《湖南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期27-30,共4页
以茄子(SolanummelongenaL)雄性不育株"正兴1号"(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Randomamplifiedpolymor phicDNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物.将该... 以茄子(SolanummelongenaL)雄性不育株"正兴1号"(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Randomamplifiedpolymor phicDNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物.将该5个引物同时扩增总DNA、核DNA和线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA).以总DNA为模板时得到多态性片段9个,以核DNA为模板时得到5个,以mtDNA为模板时得到9个.以总DNA为模板时得到的9个扩增片段中,有5个在总DNA和mtDNA中同时出现,而在核中没有出现,即认为来自mtDNA,这5个片段中,有4个来自可育株,1个来自不育株,说明不育株和可育株在mtDNA上存在差异;有4个片段同时出现在以总DNA和核DNA为模板的扩增中,但在以mtDNA为模板的扩增中却没有出现,认为是来自核DNA,这4个片段中,有3个来自不育株,一个来自可育株,说明可育株和不育株在核DNA上也存在差异.结果初步表明:新发现的茄子雄性不育可能是核质相互作用所引起. 展开更多
关键词 dna 线粒体dna dna RAPD 雄性不育 茄子
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PVP在桑叶总DNA提取中的应用 被引量:69
13
作者 王卓伟 余茂德 鲁成 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第1期62-62,65,共2页
采用CTAB(CetyltrimethyleAmmoniumBromide ,十六烷基三乙基溴化铵 )缓冲液 ,附加 1%PVP(Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮 ) ,用平衡酚 -氯仿 -异戊醇 -核糖核酸酶法提取桑叶总DNA ,经全自动分光光度计SmartSpecTM检测 ,结果表明... 采用CTAB(CetyltrimethyleAmmoniumBromide ,十六烷基三乙基溴化铵 )缓冲液 ,附加 1%PVP(Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮 ) ,用平衡酚 -氯仿 -异戊醇 -核糖核酸酶法提取桑叶总DNA ,经全自动分光光度计SmartSpecTM检测 ,结果表明用附加PVP的CTAB缓冲液提取的桑叶总DNA纯度高 ,A2 6 0 /A2 80比值在 1.80~ 1.90之间 ,多糖、蛋白质、RNA去除较彻底 ,能满足对总DNA质量要求较高的试验 。 展开更多
关键词 PVP dna纯度 桑叶总dna dna提取
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3种保存血样方法对猪总DNA制备的影响 被引量:10
14
作者 刘中禄 王勇 +2 位作者 朱富旭 吴丰春 魏泓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期25-27,共3页
目的:探索不同保存血样方法对猪全血中总DNA制备的影响。方法:采取全血4℃保存(方法Ⅰ)、沉淀白细胞加消化液室温保存(方法Ⅱ)和全血加SDS-EDTANa2缓冲液室温保存(方法Ⅲ)等3种方法保存血样,用常规方法制备总... 目的:探索不同保存血样方法对猪全血中总DNA制备的影响。方法:采取全血4℃保存(方法Ⅰ)、沉淀白细胞加消化液室温保存(方法Ⅱ)和全血加SDS-EDTANa2缓冲液室温保存(方法Ⅲ)等3种方法保存血样,用常规方法制备总DNA并对其效果进行评价。结果:方法Ⅰ、Ⅱ均能得到较纯净、完整的DNA,方法Ⅲ得率高、简便,但DNA有一定降解。结论:因方法Ⅱ勿需低温冷藏,可作为野外远距离采血的首选方法。 展开更多
关键词 血样保存 猪全血 dna 制备
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Ar^+离子束介导白棉全DNA转化彩棉中酚类物质的研究 被引量:7
15
作者 蔡剑辉 李冠 +2 位作者 葛娟 赵惠新 高小明 《种子》 CSCD 北大核心 2005年第3期22-24,共3页
通过 25KeV不同剂量Ar+离子注入和DNA溶液浸泡法,将白棉全DNA导入彩棉。观察了Ar+离子注入后处理及ck的发芽率;再以彩棉开花期叶片为实验材料,研究茎叶中的茶多酚及多酚氧化酶含量的变化。结果表明:随Ar+离子剂量的升高,发芽率呈现马鞍... 通过 25KeV不同剂量Ar+离子注入和DNA溶液浸泡法,将白棉全DNA导入彩棉。观察了Ar+离子注入后处理及ck的发芽率;再以彩棉开花期叶片为实验材料,研究茎叶中的茶多酚及多酚氧化酶含量的变化。结果表明:随Ar+离子剂量的升高,发芽率呈现马鞍形变化,GTP、PPO含量也都有不同程度的增长;这说明Ar+离子注入可显著促进外源DNA导入受体,增加了后代的变异频率并且增强彩棉的抗病性。 展开更多
关键词 离子束介导 发芽率 彩棉 酚类物质 外源dna导入 开花期 抗病性 不同剂量 升高 受体
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一种简易的植物核酸提取方法─—从干叶和新鲜叶中快速提取RNA和DNA 被引量:23
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作者 施苏华 章群 +2 位作者 陈月琴 唐绍清 屈良鹄 《中山大学学报(自然科学版)》 CSCD 1996年第2期103-105,共3页
本文介绍了一种植物核酸提取的简易方法.该法只需在常温下按常规的分子生物学操作条件从已干燥的和新鲜的植物叶中快速提取总RNA和DNA.所获得的RNA和DNA能顺利用于下一步的PCR、测序及小分子RNA研究等分子生物学实验.
关键词 植物 核酸 提取 RNA dna
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提取地衣真菌总DNA的简便方法 被引量:14
17
作者 时向阳 魏江春 +2 位作者 姜玉梅 田素忠 郭守玉 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期45-50,共6页
利用液氮破碎地衣体的上下表皮层及藻层,再用氯化苄在弱碱条件下破坏真菌细胞壁,从而获得地衣真菌总DNA.此方法简便、省时、价廉,获得的总DNA蛋白质污染少,产量高,可进一步进行PCR扩增.
关键词 地衣真菌 地衣体 dna PCR扩增
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羊粪沼液微生物总DNA提取方法优化比较研究 被引量:6
18
作者 陈竞 苏艳 +3 位作者 冯蕾 杨新平 秦新政 古丽·艾合买提 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2280-2285,共6页
【目的】目前沼液污泥中99%的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取。【方法】研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥... 【目的】目前沼液污泥中99%的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取。【方法】研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥、溶菌酶裂解以及DNA纯化等优化方法,并测定优化效果。【结果】后续增加的步骤对提高总DNA的提取效率及质量十分有效,所得DNA在得率、大小以及纯净度方面都有所提高,可以满足后续分子实验的要求。【结论】以SDS法为基础,用TENP和PBS洗涤菌泥,添加适量溶菌酶,并适当延长反应时间至3 h,再经纯化柱吸附和洗脱的方法可以获得更高质量的羊粪沼液总DNA。 展开更多
关键词 沼液 dna提取 优化 PCR-DGGE检测
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几种松科植物基因组总DNA的提取 被引量:7
19
作者 胡雅琴 肖娅萍 +2 位作者 王孝安 白晓波 傅志军 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第3期523-526,共4页
采用 CTAB法和蛋白酶 K法 ,提取校园内几种松科植物新梢、种子及幼叶的总 DNA,经琼脂糖凝胶电泳检测 ,无降解发生 .利用 PCR- SSCP初步分析了这几种针叶树的叶绿体 m at K基因 ,结果表明 :提取的总 DNA可以进行 PCR-
关键词 dna提取 PCR—SSCP 针叶树
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太白红杉总DNA的提取及鉴定 被引量:10
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作者 阎桂琴 李珊 +2 位作者 王祎玲 王戌梅 赵桂仿 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期53-56,共4页
用抗氧剂和螯合剂组合的方法 ,成功地从太白红杉的叶组织中提取和纯化了总 DNA,并对其产率、质量和纯度作了鉴定。用此方法能有效地去除酚类化合物、多糖、萜类化合物和未知化合物的干扰 ,为太白红杉的分子生物学研究提供了一套迅速、... 用抗氧剂和螯合剂组合的方法 ,成功地从太白红杉的叶组织中提取和纯化了总 DNA,并对其产率、质量和纯度作了鉴定。用此方法能有效地去除酚类化合物、多糖、萜类化合物和未知化合物的干扰 ,为太白红杉的分子生物学研究提供了一套迅速、经济和可靠的技术方案。 展开更多
关键词 太白红杉 dna 抗氧剂 螯合剂 组合提取 RAPD 随机扩增多态性dna
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