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拟南芥TRX-h5基因的克隆和表达分析
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作者 穆秀杰 张林林 韩毅 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期411-416,共6页
硫氧还蛋白(TRX-h)是一类催化二硫键还原的小分子蛋白,在调控氧化应激响应中发挥重要作用。为了研究硫氧还蛋白的结构及其功能,文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录-聚合酶链式反应(reverse ... 硫氧还蛋白(TRX-h)是一类催化二硫键还原的小分子蛋白,在调控氧化应激响应中发挥重要作用。为了研究硫氧还蛋白的结构及其功能,文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术获得TRX-h5基因的编码序列(coding sequence,CDS),体外构建pET28a(+)-TRX-h5及pET28a(+)-TRX-h5M(第39位和第42位半胱氨酸位点突变)的原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,诱导后经镍柱纯化得到带有6个His标签的融合蛋白。通过SDS-PAGE电泳技术检测到14 kDa处的目的条带,与理论值预测一致。运用生物信息学分析得出,TRX-h5基因编码118个氨基酸,相对分子质量为13122.32,理论等电点为5.19,该蛋白的不稳定参数为26.74,属于稳定性蛋白。点突变分析发现,TRX-h5的第39位和第42位半胱氨酸位点决定了该蛋白的催化活性,为进一步探究TRX-h5的蛋白功能和高等植物氧化还原系统的研究提供了新思路。 展开更多
关键词 trx-h5基因 基因克隆 生物信息学分析 原核表达
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