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路路通酸靶向TRAF6调控Hippo/YAP信号通路抗结直肠癌的分子机制
1
作者 赵薇薇 郑诗成 +4 位作者 张天艺 熊嘉昱 屈祎 柯细松 闫蓉 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第8期1463-1469,共7页
目的阐明路路通酸(liquidambaric acid,LDA)靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)抗结直肠癌的分子机制。方法利用微量热泳动技术(MST)、药物亲和力反应靶标稳定性实验(DARTS)和细胞热转变实验(CETSA... 目的阐明路路通酸(liquidambaric acid,LDA)靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)抗结直肠癌的分子机制。方法利用微量热泳动技术(MST)、药物亲和力反应靶标稳定性实验(DARTS)和细胞热转变实验(CETSA)验证LDA与TRAF6的直接结合;通过CRISPR/Cas9技术建立TRAF6敲除的结直肠癌HCT116细胞;利用免疫荧光和TOPFlash/Renilla双荧光素酶报告系统,验证LDA靶向TRAF6调控的Hippo/YAP与Wnt信号通路的作用;利用免疫共沉淀(Co-IP)和邻位连接实验(PLA)探究LDA调控TRAF6蛋白互作,阐明分子机制。结果在细胞裂解液和活细胞中,验证了LDA与TRAF6的直接结合;LDA促进结直肠癌细胞中TRAF6依赖的YAP的核转位,抑制TRAF6过表达激活的Wnt信号转导;Co-IP和PLA实验发现,结直肠癌细胞中TRAF6与YAP及β-catenin形成1个三联复合物,其中TRAF6是三联复合物的关键支架蛋白;LDA破坏了TRAF6的TRAF结构域和YAP,以及YAP与β-catenin的互作。结论LDA通过靶向TRAF6调控Hippo/YAP信号通路,进而抑制结直肠癌。 展开更多
关键词 结直肠癌 路路通酸 traf6 Hippo/YAP信号通路 Wnt/β-catenin信号通路 traf2
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异甘草素抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路对骨质疏松大鼠成骨细胞分化的影响 被引量：5
2
作者 张超 李强强 +3 位作者 王雄 赵辉 叶仲夺 王勇平 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期488-492,508,共6页
目的探究异甘草素对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞分化的影响是否与调控核因子-κB受体活化体配体(RANKL)/核因子-κB受体活化体(RANK)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)信号通路有关。方法采用去势法建立绝经后OP大鼠模型,造模2周后将大... 目的探究异甘草素对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞分化的影响是否与调控核因子-κB受体活化体配体(RANKL)/核因子-κB受体活化体(RANK)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)信号通路有关。方法采用去势法建立绝经后OP大鼠模型,造模2周后将大鼠随机分为模型组、阳性组(戊酸雌二醇0.09 mg/kg)、异甘草素低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,每组10只,另取10只大鼠作为假手术组。给药结束后采用ELISA法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E_(2))水平;Micro-CT扫描观察骨微结构指标;HE染色观察股骨组织病理学;免疫组化法检测大鼠股骨Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达;Western Blot法检测大鼠股骨RANKL、RANK、TRAF6蛋白表达。结果与模型组比,阳性组与异甘草素各剂量组大鼠骨组织病变明显减轻,可见新生骨小梁;ALP[(107.94±9.83)U/L、(75.27±7.51)U/L、(89.35±9.14)U/L、(106.33±10.02)U/L比(53.79±5.62)U/L]、E_(2)[(27.71±2.67)pg/mL、(18.36±1.82)pg/mL、(23.65±2.28)pg/mL、(27.46±2.71)pg/mL比(14.64±1.59)pg/mL]水平,Tb.Th[(0.36±0.04)mm、(0.23±0.02)mm、(0.28±0.03)mm、(0.36±0.03)mm比(0.12±0.01)mm]、Tb.N[(4.45±0.44)1/mm、(2.67±0.27)1/mm、(3.36±0.34)1/mm、(4.41±0.44)1/mm比(1.51±0.12)1/mm]、BMD[(0.37±0.04)g/cm^(2)、(0.22±0.02)g/cm^(2)、(0.29±0.03)g/cm^(2)、(0.38±0.03)g/cm^(2)比(0.14±0.01)g/cm^(2)]、BV/TV[(11.94±1.23)%、(7.12±0.70)%、(8.49±0.85)%、(11.77±1.16)%比(5.75±0.61)%]以及Runx2表达[(0.84±0.08)、(0.41±0.04)、(0.59±0.06)、(0.82±0.08)比(0.27±0.03)]升高(P<0.05),Tb.Sp[(0.25±0.02)mm、(0.43±0.04)mm、(0.34±0.03)mm、(0.23±0.02)mm比(0.56±0.06)mm]以及RANKL[(0.42±0.04)、(0.86±0.08)、(0.64±0.06)、(0.45±0.04)比(1.09±0.11)]、RANK[(0.39±0.04)、(0.81±0.08)、(0.67±0.06)、(0.41±0.04)比(1.03±0.10)]、TRAF6[(0.47±0.05)、(0.77±0.08)、(0.61±0.06)、(0.49±0.05)比(0.96±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),且异甘草素呈剂量依赖性。结论异甘草素可能通过抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路,促进成骨细胞分化,改善股骨病变,有效发挥对OP的治疗作用。 展开更多
关键词 异甘草素 骨质疏松 成骨细胞分化 RANKL/RANK/traf6信号通路
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miR-146a-5p抑制TRAF6/NF-кB信号通路影响滋养细胞的炎症反应 被引量：10
3
作者 陈芳荣 吴栋才 陈小菊 《海南医学院学报》 CAS 2021年第6期410-415,共6页
目的:探讨微小核糖核酸(miR)-146a-5p与子痫前期的关系及作用机制。方法:对体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3,经脂多糖(LPS)诱导后,与空白对照组相比,检测在LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p和TRAF6的表达。设计分组分为control组、LPS组、miR... 目的:探讨微小核糖核酸(miR)-146a-5p与子痫前期的关系及作用机制。方法:对体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3,经脂多糖(LPS)诱导后,与空白对照组相比,检测在LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p和TRAF6的表达。设计分组分为control组、LPS组、miR-146a-5p mimic组、miR-146a-5p inhibitor组。通过QPCR定量检测各组JEG-3细胞中miR-146a-5p以及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)的mRNA水平;利用Western Blot检测JEG-3细胞内TRAF6/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:(1)miR-146a-5p mimic组的miR-146a-5p表达明显高于其余3组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p的表达量增加,TRAF6表达量明显下调(P<0.05)。(3)与对照组比较,加入miR-146a mimic后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显下降(P<0.05),加入miR-146a inhibitor后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),与LPS组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)Western Blot结果显示加入miR-146a mimic后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达较对照组明显下降;加入miR-146a inhibitor后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达则明显升高。结论:miR-146-5p可能通过抑制TRAF6/NF-κB信号通路影响子痫前期母胎界面的炎症反应。 展开更多
关键词 miR-146-5p traf6/NF-κB信号通路 滋养细胞 炎症反应
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TRAF6泛素化调控功能与类风湿关节炎发病机制的研究进展
4
作者 张小娜 杜小正 +2 位作者 袁博 李福欣 刘莉梅 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期510-512,F0003,F0004,共5页
类风湿关节炎(RA)是以关节滑膜炎症为核心病理表现的常见自身免疫性疾病,损伤性强,致残率高,目前无法治愈。近年研究表明肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)作为一种泛素连接酶E3,其自身的泛素化调控功能在自身免疫性疾病、炎症性疾病中... 类风湿关节炎(RA)是以关节滑膜炎症为核心病理表现的常见自身免疫性疾病,损伤性强,致残率高,目前无法治愈。近年研究表明肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)作为一种泛素连接酶E3,其自身的泛素化调控功能在自身免疫性疾病、炎症性疾病中通过多种途径发挥关键作用。本文就TRAF6的结构、功能及泛素化调控作用与RA的发病研究进展进行综述。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 traf6 泛素化 信号通路
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shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响 被引量：4
5
作者 陈锋 张芙蓉 +3 位作者 何生松 庞然 许娟娟 董继华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期278-283,310,共7页
目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选... 目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24h后重复注射1次。第2次注射后24h,予LPS/D-GalN腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化,Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2mRNA的表达,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平变化,Western blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表达,其中TRAF6mRNA表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8h达到峰值,TGF-β1于16h达到峰值;RNAi/LPS组小鼠血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot结果显示RNAi/LPS组小鼠肝组织总蛋白NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),与模型对照组无差异,而胞核NF-κB p65明显低于模型对照组(P<0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多
关键词 traf6 RNA干扰 TLR4信号通路 NF-κB 急性肝衰竭
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TRAF6,TAK1和TGF-β基因在弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗前后外周血单个核细胞中的表达 被引量：1
6
作者 陈珍珠 尹青松 +2 位作者 魏旭东 陈琳 李玉富 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1301-1305,共5页
本研究检测弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)患者外周血单个核细胞中TRAF6、TAK1及TGF-β基因在化疗前后的表达变化,探讨化疗对TRAF6/TAK1信号通路活性的影响。采用Ct值比较法,通过SYBR Green II实时定量PCR检测38例DLBCL患者化疗前及化疗2... 本研究检测弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)患者外周血单个核细胞中TRAF6、TAK1及TGF-β基因在化疗前后的表达变化,探讨化疗对TRAF6/TAK1信号通路活性的影响。采用Ct值比较法,通过SYBR Green II实时定量PCR检测38例DLBCL患者化疗前及化疗2周期后外周血单个核细胞(PBMNC)中TRAF6、TAK1及TGF-β在mRNA的表达水平,并以12例健康人PBMNC作为对照。结果表明:DLBCL患者治疗前后PBMNC中TRAF6、TAK1和TGF-βmRNA表达水平均高于正常人。治疗前患者TRAF6及TAK1基因表达水平与正常人相比未发现统计学差异(P>0.05),治疗后这两基因的表达明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);在此同时治疗后与治疗前相比,这两基因的表达水平也具明显统计学差异(P<0.05),且这两基因的表达水平呈明显正相关,而TGF-β基因治疗后较治疗前明显下降,差异具统计学差异(P<0.05)。结论:DLBCL患者化疗后TRAF6/TAK1信号通路的活性明显增高,而TGF-β基因治疗后则较治疗前明显下降。 展开更多
关键词 弥漫大B细胞淋巴瘤 traf6 TAK1 TGF-β 信号通路 免疫抑制因子
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Vialinin A对肝癌耐药细胞生长和TNF-α/TRAF6/NF-κB信号通路的影响
7
作者 林自中 王家瑞 +2 位作者 时慧娟 黄金艳 蒋利和 《中成药》 2025年第8期2748-2752,共5页
目的探究Vialinin A对肝癌耐药细胞HepG2/ADM生长的抑制作用。方法CCK-8法筛选Vialinin A干预浓度,同时检测阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱的抑制作用。将HepG2/ADM细胞分为对照组和Vialinin A 20、30、40μmol/L组,CCK-8法检测细... 目的探究Vialinin A对肝癌耐药细胞HepG2/ADM生长的抑制作用。方法CCK-8法筛选Vialinin A干预浓度,同时检测阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱的抑制作用。将HepG2/ADM细胞分为对照组和Vialinin A 20、30、40μmol/L组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,RT-qPCR法检测细胞BCRP、MDR1、MRP1 mRNA表达,Western blot法检测细胞BCRP、MDR1、MRP1、TNF-α、TRAF6、TAK1、NF-κB p65、cleaved-Caspase-3蛋白表达。同时验证TNF-α对Vialinin A的逆转作用。结果Vialinin A可以抑制HepG2/ADM细胞增殖活力,IC50值为(31.52±2.76)μmol/L。与对照组比较,Vialinin A 20、30、40μmol/L组HepG2/ADM细胞凋亡率升高(P<0.01),细胞周期阻滞在G_(2)/M期,BCRP、MDR1、MRP1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);Vialinin A 30、40μmol/L组细胞TNF-α、TRAF6、TAK1、NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.01),cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。使用10 ng/mL TNF-α处理细胞48 h后可以有效逆转30μmol/L Vialinin A的作用。结论Vialinin A对HepG2/ADM细胞生长的抑制作用可能与抑制耐药基因表达和TNF-α/TRAF6/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 Vialinin A 肝癌 耐药 HepG2/ADM细胞 TNF-α/traf6/NF-κB信号通路
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NLRP3炎症小体参与特发性膜性肾病发生的研究 被引量：2
8
作者 南蕾 玄红运 +1 位作者 米焱 王彩丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期366-371,共6页
目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在特发性膜性肾病(IMN)中的作用及其激活的可能机制。方法:收集未行肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗且肾组织活检诊断为IMN的患者135例,10例因肾结核及肾肿瘤行肾切除的患者... 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在特发性膜性肾病(IMN)中的作用及其激活的可能机制。方法:收集未行肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗且肾组织活检诊断为IMN的患者135例,10例因肾结核及肾肿瘤行肾切除的患者肾脏组织作为对照组。免疫组化法检测各肾组织样本NLRP3、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、Caspase-1、NF-κB p65、MAPK信号通路相关蛋白磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷酸化p38(p-p38)及磷酸化JNK(p-JNK)因子表达;收集IMN患者血液和24 h尿液,分析24 h尿蛋白定量、血肌酐、肌酐清除率、尿素氮等一般临床资料,对尿蛋白与NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TNF-α及NLRP3与TRAF6进行相关性分析。结果:与对照组比较,IMN患者24 h尿蛋白和血肌酐明显升高(均P<0.05),肾组织NLRP3和Caspase-1蛋白表达明显升高(均P<0.05),其中Ⅱ期IMN患者肾组织NLRP3和Caspase-1蛋白表达最高,IL-1β和TNF-α表达增强(均P<0.05),其中Ⅱ期IMN患者肾组织IL-1β和TNF-α蛋白表达最强,NF-κB p65、p-ERK1/2、p-p38和p-JNK蛋白表达升高(均P<0.05)。IMN患者24 h尿蛋白与肾组织NLRP3蛋白表达呈正相关(r=0.689,P<0.01),与Caspase-1蛋白呈正相关(r=0.614,P<0.0001),与IL-1β呈正相关(r=0.708,P<0.0001),与TNF-α呈正相关(r=0.594,P<0.01)。结论:TRAF6通过NF-κB激活诱导ERK1/2、p38、JNK信号通路刺激NLRP3炎症小体活化,促进IMN发生和大量尿蛋白产生。 展开更多
关键词 NLRP3炎症小体 特发性膜性肾病 traf6-nf-κb-mapk信号通路
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固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠的作用与机制 被引量：8
9
作者 胡勇 张惜燕 吴雪 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期960-965,975,共7页
目的 观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)大鼠的作用与机制。方法 3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组。采用试剂盒分别检测大鼠血清骨代谢指标钙(calciu... 目的 观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)大鼠的作用与机制。方法 3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组。采用试剂盒分别检测大鼠血清骨代谢指标钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus, P)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)含量;采用Micro-CT检测大鼠股骨骨密度(bone mine density, BMD)并分析骨小梁结构系数如骨小梁相对体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)观察各组大鼠股骨组织病理形态变化;采用蛋白印迹法(Western blot)检测股骨组织中磷酸化核转录因子κB-p65(phospho-nuclear transcription factor-κB p65,p-NF-κB p65)、活化T细胞核因子蛋白1(recombinant nuclear factor of activated T-cell, NFATc1)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达,采用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测股骨组织中NFATc1、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、β-catenin的mRNA表达。结果 固本活血壮骨颗粒提高GIOP大鼠血清Ca值、血清P值、BMD值、BV/TV值、Tb.Th值、BS/TV值和Tb.N值(P<0.05),降低血清ALP值与Tb.Sp值(P<0.05);改善骨组织中β-catenin、NFATc1、TRAF6、p-NF-κB p65蛋白与mRNA表达(P<0.05)。另外,固本活血壮骨颗粒对GIOP大鼠血清ALP、股骨NFATc1的调节作用比阿法迪三更具优势(P<0.05)。结论 固本活血壮骨颗粒可拮抗GIOP,减少骨质丢失,其作用机制与Wnt/β-catenin通路和TRAF6/NF-κB p65/NFATcl信号通路有关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 糖皮质激素 固本活血壮骨颗粒 WNT/Β-CATENIN信号通路 traf6/NF-κB p65/NFATcl信号通路
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麦角甾苷治疗对去卵巢大鼠骨质疏松症保护机制研究 被引量：5
10
作者 王海生 马涛 +1 位作者 张敏 陶周善 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期341-346,共6页
目的探讨麦角甾苷(MJZG)治疗对去卵巢大鼠骨密度降低和骨量流失的潜在影响,并探索可能的机制。方法通过双侧去卵巢构建骨质疏松大鼠模型;随后将大鼠随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及麦角甾苷(MJZG),每组10只;其中MJZG组大鼠... 目的探讨麦角甾苷(MJZG)治疗对去卵巢大鼠骨密度降低和骨量流失的潜在影响,并探索可能的机制。方法通过双侧去卵巢构建骨质疏松大鼠模型;随后将大鼠随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及麦角甾苷(MJZG),每组10只;其中MJZG组大鼠接受麦角甾苷(100 mg/kg)治疗12周;待治疗截止时获取股骨标本和血液样品进一步检测股骨骨量、骨强度、骨代谢指标改变以及组织蛋白的表达。结果术后12周,与Sham组相比,OVX组的大鼠骨小梁微观参数和骨密度和骨矿物质含量以及骨强度显著降低;而MJZG组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp以及最大载荷和弹性模量较OVX组明显改善(P<0.05)。MJZG组大鼠血清BGP、ALP、TRACP-5b和DPD水平较OVX组明显降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。WB检测观察到,和OVX组比较,MJZG组的TRAF6、RANKL、NF-κB和NFAT2的蛋白水平表达下调(P<0.05),而PI3K、AKT和c-Fos上调(P<0.05)。结论MJZG可以通过抑制RANKL/TRAF6/NF-κB和激活PI3K/AKT防治去卵巢诱导的骨质疏松症。 展开更多
关键词 麦角甾苷 绝经后骨质疏松症 骨密度 RANKL/traf6/NF-κB和PI3K/AKT信号通路
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