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miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤
被引量：
2
1
作者
李勃
鲁莹
+4 位作者
万琪
梁璇
杨沂文
韩勇
曾俊伟
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期1537-1546,共10页
目的:探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法:构建慢病毒(lentivirus,LV)介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,...
目的:探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法:构建慢病毒(lentivirus,LV)介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,分为空载体细胞株(LV-vector)组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株(LV-miR-29c)+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株(LV-miR-29c sponge)+TNF-α组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用;免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)的表达;RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达;Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白(TNFR-associated death domain protein,TRADD)、Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociated death domain protein,FADD)、pro-caspase-8、cleaved caspase-8、pro-caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平;Hoechst和TUNEL染色检测细胞凋亡率。结果:(1)CCK-8和LDH释放实验结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组细胞活力显著上升(P<0.05),且LDH释放显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05)。(2)RT-qPCR和免疫荧光结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1表达显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05)。(3)Western blot结果显示,与LVvector组相比,LV-vector+TNF-α组细胞中TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平表达显著下调(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05)。(4)Hoechst和TUNEL染色结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组凋亡细胞数目显著增加(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组凋亡细胞数目显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c+sponge+TNF-α组凋亡细胞数显著增加(P<0.05)。结论:miR-29c减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤,其机制可能与抑制TNFR1信号通路激活导致的细胞凋亡有关。
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关键词
微小RNA-29c
肿瘤坏死因子α
tnfr1信号通路
细胞凋亡
海马神经元
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职称材料
题名
miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤
被引量：
2
1
作者
李勃
鲁莹
万琪
梁璇
杨沂文
韩勇
曾俊伟
机构
遵义医科大学生理学教研室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期1537-1546,共10页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31860291)
贵州省教育厅创新群体重大研究项目(黔教合KY字[2018]025)。
文摘
目的:探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法:构建慢病毒(lentivirus,LV)介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,分为空载体细胞株(LV-vector)组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株(LV-miR-29c)+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株(LV-miR-29c sponge)+TNF-α组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用;免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)的表达;RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达;Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白(TNFR-associated death domain protein,TRADD)、Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociated death domain protein,FADD)、pro-caspase-8、cleaved caspase-8、pro-caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平;Hoechst和TUNEL染色检测细胞凋亡率。结果:(1)CCK-8和LDH释放实验结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组细胞活力显著上升(P<0.05),且LDH释放显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05)。(2)RT-qPCR和免疫荧光结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1表达显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05)。(3)Western blot结果显示,与LVvector组相比,LV-vector+TNF-α组细胞中TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平表达显著下调(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05)。(4)Hoechst和TUNEL染色结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组凋亡细胞数目显著增加(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组凋亡细胞数目显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c+sponge+TNF-α组凋亡细胞数显著增加(P<0.05)。结论:miR-29c减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤,其机制可能与抑制TNFR1信号通路激活导致的细胞凋亡有关。
关键词
微小RNA-29c
肿瘤坏死因子α
tnfr1信号通路
细胞凋亡
海马神经元
Keywords
MicroRNA-29c
Tumor necrosis factor-α
tnfr
1
signaling pathway
Apoptosis
Hippocampal neurons
分类号
R338.2 [医药卫生—人体生理学]
R363.2 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤
李勃
鲁莹
万琪
梁璇
杨沂文
韩勇
曾俊伟
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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