TNF相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是TNF超家族的新成员。TRAIL与死亡受体结合，通过多种信号传导通路，能够诱导多种肿瘤细胞发生快速、高效的凋亡反应，而对正常细胞无明显毒性，成为近年来人们...TNF相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是TNF超家族的新成员。TRAIL与死亡受体结合，通过多种信号传导通路，能够诱导多种肿瘤细胞发生快速、高效的凋亡反应，而对正常细胞无明显毒性，成为近年来人们研究抗肿瘤治疗的热点。然而越来越多的研究证实并不是所有的肿瘤细胞都对TRAIL敏感，特别是那些高度恶性的肿瘤细胞，为克服肿瘤细胞对TRAIL的耐药性，提高TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的效率，国内外学者均作了较多的研究。本文就此将近年来国内外的相关文献作一综述。展开更多
目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合...目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。展开更多
目的:克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular regionof the human TRAIL cDNA,TPAILex）,构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法:抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细...目的:克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular regionof the human TRAIL cDNA,TPAILex）,构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法:抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞,用RT-PCR、巢式-PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段oDNA,并克隆到pGEM-T Easy载体中,DNA测序鉴定。将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T,构建重组表达质粒pGEX/TRAILex,用IPTC诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段,GST-Agarose4B层析柱纯化 GST-TRAILex融合蛋白,Western-blot鉴定纯化产物。结果:抗CD3 McAb能诱导正常人外周血单个核细胞TRAIL的高表达,成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因,构建了重组表达载体pGEX/TRAILex,IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段,经12％SDS-PAGE分析,可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达带。Kodak软件分析表面GST-TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％,进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达,用GST-Agarose4B层析柱纯化超声破菌后的上清,每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST-Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结?展开更多
文摘TNF相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是TNF超家族的新成员。TRAIL与死亡受体结合，通过多种信号传导通路，能够诱导多种肿瘤细胞发生快速、高效的凋亡反应，而对正常细胞无明显毒性，成为近年来人们研究抗肿瘤治疗的热点。然而越来越多的研究证实并不是所有的肿瘤细胞都对TRAIL敏感，特别是那些高度恶性的肿瘤细胞，为克服肿瘤细胞对TRAIL的耐药性，提高TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的效率，国内外学者均作了较多的研究。本文就此将近年来国内外的相关文献作一综述。
