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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建
被引量：
9
1
作者
方六荣
周复春
+2 位作者
陈焕春
吴斌
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期244-248,共5页
本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将...
本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点 ,构建转移质粒 pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待完全病变后在X gal存在下筛选蓝斑 ,蓝斑纯化 3次后 ,经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK- /LacZ+ 突变株。
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关键词
伪狂犬病病毒
鄂A株
tk
-
/lacz
突变株
基因缺失标志疫苗株
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职称材料
伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究
2
作者
刘正飞
陈焕春
+2 位作者
周复春
方六荣
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期304-307,共4页
本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,...
本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,同时用PCR扩增LacZ基因 ,经 3次空斑纯化 ,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因 ,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+ 突变株。TCID50 试验表明 ,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响 ;Balb/C小鼠试验表明 。
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关键词
伪狂犬病病毒
Bartha株
tk
^
-
/lacz
^+突变株
生物学特性
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职称材料
题名
伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建
被引量：
9
1
作者
方六荣
周复春
陈焕春
吴斌
何启盖
机构
华中农业大学畜牧兽医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期244-248,共5页
基金
"九五"国家科技攻关计划生物技术项目资助!(项目编号 96 -C0 1- 0 4- 0 3)
文摘
本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点 ,构建转移质粒 pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待完全病变后在X gal存在下筛选蓝斑 ,蓝斑纯化 3次后 ,经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK- /LacZ+ 突变株。
关键词
伪狂犬病病毒
鄂A株
tk
-
/lacz
突变株
基因缺失标志疫苗株
Keywords
Pseudorabies virus
Ea
strain
tk
-
/lacz
+
mutant
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究
2
作者
刘正飞
陈焕春
周复春
方六荣
何启盖
机构
华中农业大学农业部农业微生物重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期304-307,共4页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金资助
文摘
本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,同时用PCR扩增LacZ基因 ,经 3次空斑纯化 ,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因 ,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+ 突变株。TCID50 试验表明 ,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响 ;Balb/C小鼠试验表明 。
关键词
伪狂犬病病毒
Bartha株
tk
^
-
/lacz
^+突变株
生物学特性
Keywords
Pseudorabies virus
Bartha
strain
tk
-
/lacz
+
mutant
strain
Biological property
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建
方六荣
周复春
陈焕春
吴斌
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
9
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下载PDF
职称材料
2
伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究
刘正飞
陈焕春
周复春
方六荣
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
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