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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建被引量：9: 1; 作者方六荣周复春 +2 位作者陈焕春吴斌何启盖《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期244-248,共5页; 本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将... 展开更多; 关键词伪狂犬病病毒鄂A株 tk-/lacz突变株基因缺失标志疫苗株; 在线阅读下载PDF 职称材料

伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究: 2; 作者刘正飞陈焕春 +2 位作者周复春方六荣何启盖《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期304-307,共4页; 本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,... 展开更多; 关键词伪狂犬病病毒 Bartha株 tk^-/lacz^+突变株生物学特性; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究被引量：6: 3; 作者王芳刘胜旺 +1 位作者邵昱昊陈洪岩《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期655-660,共6页; 在山羊痘病毒(Goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体质粒。将痘苗病毒(Vaccinia virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂... 展开更多; 关键词重组山羊痘病毒胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); 在线阅读下载PDF 职称材料

兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法被引量：6: 4; 作者秦海斌刘怀然 +4 位作者刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0020-I0024,共5页; 为了有效地预防和根除山羊痘，研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒（goat pox virus，GPV）疫苗株AV41胸苷激酶（thymidine kinase，TK）基因克隆、鉴定的基础上，构建转移载体。将痘苗病毒（Vaccinia Virus... 展开更多; 关键词重组山羊痘病毒标记疫苗胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); 在线阅读下载PDF 职称材料

山羊痘基因工程标记疫苗的初步研究被引量：2: 5; 作者王芳刘胜旺 +1 位作者邵昱昊陈洪岩《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0015-I0015,共1页; 为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期... 展开更多; 关键词重组山羊痘病毒标记疫苗胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); 在线阅读下载PDF 职称材料

题名伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建被引量：9: 1; 作者方六荣周复春陈焕春吴斌何启盖; 机构华中农业大学畜牧兽医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期244-248,共5页; 基金 "九五"国家科技攻关计划生物技术项目资助!(项目编号 96 -C0 1- 0 4- 0 3); 文摘本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点 ,构建转移质粒 pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待完全病变后在X gal存在下筛选蓝斑 ,蓝斑纯化 3次后 ,经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK- /LacZ+ 突变株。; 关键词伪狂犬病病毒鄂A株 tk-/lacz突变株基因缺失标志疫苗株; Keywords Pseudorabies virus Ea strain tk -/lacz + mutant; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学] S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究: 2; 作者刘正飞陈焕春周复春方六荣何启盖; 机构华中农业大学农业部农业微生物重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期304-307,共4页; 基金高等学校博士学科点专项科研基金资助; 文摘本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,同时用PCR扩增LacZ基因 ,经 3次空斑纯化 ,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因 ,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+ 突变株。TCID50 试验表明 ,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响 ;Balb/C小鼠试验表明。; 关键词伪狂犬病病毒 Bartha株 tk^-/lacz^+突变株生物学特性; Keywords Pseudorabies virus Bartha strain tk -/lacz + mutant strain Biological property; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究被引量：6: 3; 作者王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期655-660,共6页; 文摘在山羊痘病毒(Goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体质粒。将痘苗病毒(Vaccinia virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnⅠ酶切位点,经酶切、PCR鉴定筛选出阳性重组子,命名为pTK-LacZ。质粒经纯化后用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(Bovine testis,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,且在BT细胞和羔羊睾丸(Lamb testis,LT)细胞连续传20代遗传性状仍很稳定。本研究筛选、纯化的rGPV-LacZ为进一步研制表达外源基因的重组GPV活载体多价疫苗奠定了基础。; 关键词重组山羊痘病毒胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); Keywords recombinant goat pox virus thymidine kinase gene （tk） β -galactosidase gene （lacz）; 分类号 S852.654 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法被引量：6: 4; 作者秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心西北农林科技大学动物科技学院; 出处《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0020-I0024,共5页; 文摘为了有效地预防和根除山羊痘，研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒（goat pox virus，GPV）疫苗株AV41胸苷激酶（thymidine kinase，TK）基因克隆、鉴定的基础上，构建转移载体。将痘苗病毒（Vaccinia Virus，VV）晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（LacZ）报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点，经酶切、PCR鉴定出，命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸（bovine testes，BT）细胞，待出现80%以上的细胞病变时收获病毒，经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定，获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒，命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示，LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性，其毒力、生长特性与亲本株相似，保持原有疫苗株的生长特性，而且在BT细胞和羔羊睾丸（lamb testes，LT）细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物，为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。; 关键词重组山羊痘病毒标记疫苗胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); Keywords Antigen capture ELISA Monoclonal antibody Rabbit hemorrhagic disease （RHD）; 分类号 R-33 [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名山羊痘基因工程标记疫苗的初步研究被引量：2: 5; 作者王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室; 出处《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0015-I0015,共1页; 文摘为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点,经酶切、PCR鉴定出,命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(bovine testes,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,而且在BT细胞和羔羊睾丸(lamb testes,LT)细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物,为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。; 关键词重组山羊痘病毒标记疫苗胸苷激酶基因(tk) β-半乳糖苷酶基因(lacz); 分类号 R373 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建	方六荣周复春陈焕春吴斌何启盖	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2001	9	在线阅读下载PDF 职称材料
2	伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究	刘正飞陈焕春周复春方六荣何启盖	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2002	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究	王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法	秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东	《中国比较医学杂志》 CAS	2007	6	在线阅读下载PDF 职称材料
5	山羊痘基因工程标记疫苗的初步研究	王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩	《中国比较医学杂志》 CAS	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料