TGFβ1反义寡核苷酸对人腹膜间皮细胞增殖和纤维连接蛋白的影响 被引量：1

1

作者 刘映红 刘伏友 +3 位作者 彭佑铭 袁芳 段绍斌 刘虹 《中国血液净化》 2005年第6期317-321,共5页

目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防... 目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径。方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达。结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%。结论TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达。 展开更多

关键词 tgfβ1反义寡核苷酸 人腹膜间皮细胞 细胞增殖 纤维连接蛋白

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Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究 被引量：3

2

作者 王晓丽 田美丽 +4 位作者 王梅 朱红梅 杨晓娟 王亚利 宋天保 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期342-343,376,共3页

目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑... 目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果　cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论　CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。 展开更多

关键词 CYCLIN D1 反义寡核苷酸 人黑色素瘤 细胞周期 细胞增殖 抑制作用

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氯离子通道-3反义寡核苷酸对内皮素-1促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞的抑制作用 被引量：2

3

作者 胡维琨 谢二娟 +2 位作者 张虹 李贵刚 刘荣 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第10期914-917,923,共5页

目的观察氯离子通道-3(chloride channel3,ClC-3)反义寡核苷酸(antisense oli-gonucleotides,AS-ODN)对内皮素1(endothelin-1,ET-1)促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,BCECs)的抑制作用。方法 BCECs细... 目的观察氯离子通道-3(chloride channel3,ClC-3)反义寡核苷酸(antisense oli-gonucleotides,AS-ODN)对内皮素1(endothelin-1,ET-1)促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,BCECs)的抑制作用。方法 BCECs细胞悬液接种培养12h后,通过脂质体介导转染不同浓度的ClC-3寡核苷酸。体外培养BCECs24h后加入200pmol.L-1ET-1,继续培养48h。通过倒置荧光显微镜观察BCECs寡核苷酸的摄取。采用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。采用MTT法观察BCECs增殖状况,计算细胞存活率,同时应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果寡核苷酸可被培养的BCECs摄取。ClC-3mRNA与蛋白的表达变化呈平行关系。与不加时相比,ClC-3AS-ODN浓度依赖性地减少BCECsClC-3mRNA和蛋白的表达,同样也浓度依赖性地降低BCECs MTT吸光度值(OD值)和细胞存活率。经100mg·mL-1ClC-3AS-ODN处理后,与对照组相比,细胞G0/G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,出现明显的凋亡峰,增殖指数明显下降。结论 ClC-3AS-ODN可能通过减少ClC-3mRNA和蛋白的表达,浓度依赖性抑制ET-1对体外培养BCECs的增殖作用,并使细胞周期停滞在G1期。 展开更多

关键词 氯离子通道-3 反义寡核苷酸 内皮素-1 增殖 角膜内皮细胞 牛

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IL-1β,IL-6反义寡核苷酸脂质体抑制兔后发性白内障 被引量：3

4

作者 邓小艳 蔡小军 柯治生 《眼科新进展》 CAS 2006年第5期348-350,共3页

目的探讨IL-1β、IL-6反义寡核苷酸脂质体抑制后发性白内障的可行性和有效性。方法将20只健康新西兰大白兔双眼行透明晶状体囊外摘出术,均设左眼为实验眼,术后前房立即注射IL-1β、IL-6反义寡核苷酸脂质体,右眼为对照眼,术后前房注射单... 目的探讨IL-1β、IL-6反义寡核苷酸脂质体抑制后发性白内障的可行性和有效性。方法将20只健康新西兰大白兔双眼行透明晶状体囊外摘出术,均设左眼为实验眼,术后前房立即注射IL-1β、IL-6反义寡核苷酸脂质体,右眼为对照眼,术后前房注射单纯脂质体。分别于术前1d、术后1d、3d、1周、2周、1月、2月和3月抽取房水,用ELISA双抗体免疫夹心法检测IL-1β、IL-6的含量,定期裂隙灯检眼镜观察后囊混浊情况,术后3月行组织病理学检查。结果(1)术后3月实验眼与对照眼发生晶状体后囊膜混浊的眼数分别为16眼及20眼,差异有极显著意义(P=0.002<0.01);(2)实验眼和对照眼房水中IL-1β的浓度均值分别为(8.570±1.686)×10-9g·L-1、(11.900±3.873)×10-9g·L-1,有显著性差异(P=0.002<0.01),IL-6的浓度均值分别为(12.530±4.068)×10-9g·L-1、(16·600±6·636)×10-9g·L-1,亦有显著性差异(P=0.033<0.05);(3)光镜和电镜下实验眼晶状体后囊膜细胞增生不活跃,未发现眼内毒性反应。结论前房注射IL-1β、IL-6反义寡核苷酸脂质体对后发性白内障可能有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 IL-1Β IL-6 反义寡核苷酸类 脂质体 后发性白内障

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缺氧诱导因子1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌的放疗增效作用 被引量：2

5

作者 李震 屈永涛 +2 位作者 李晓明 路秀英 张佳宁 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2010年第11期586-589,共4页

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)反义寡核苷酸结合放射对人喉鳞状细胞癌(简称喉癌)裸鼠移植瘤生长抑制敏感性的影响。方法对25只裸鼠建立喉癌裸鼠模型,分为5组:A组(正义放疗)、B组(反义放疗)、C组(空... 目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)反义寡核苷酸结合放射对人喉鳞状细胞癌(简称喉癌)裸鼠移植瘤生长抑制敏感性的影响。方法对25只裸鼠建立喉癌裸鼠模型,分为5组:A组(正义放疗)、B组(反义放疗)、C组(空脂质体放疗)、D组(放疗)和E组(空白对照),治疗期间每3 d测量1次鼠重、瘤体最大长径及最大垂直径,治疗21 d后将实验鼠脱颈处死,瘤体称重后应用流式细胞仪、免疫组化观察抑瘤、凋亡情况及相关蛋白表达。结果反义放疗组瘤重(1.037±0.106)g明显低于其余4组(P<0.05),抑瘤率(50.21±8.10)%和凋亡率(34.52±4.159)%明显高于其余4组(P<0.05)。免疫组化PV法染色显示:HIF-1α正义放疗组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少;正义放疗组p53表达于胞核呈棕色颗粒浓染,而反义放疗组表达较少;VEGF正义对照组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少。流式细胞仪检测结果显示:反义放疗组的HIF-1α、p53、VEGF蛋白表达的荧光指数(fluorescen-ceindex,FI)分别为0.98±0.28、2.13±0.03、1.09±0.36明显低于其余4组(P<0.05)。结论 HIF-1α反义寡核苷酸结合放疗可以抑制喉癌异体移植瘤的生长,增加肿瘤细胞凋亡率,其机制之一可能是HIF-1α的下调降低了喉癌组织中p53、VEGF的蛋白表达,因此HIF-1α反义寡核苷酸增加喉癌对放疗的敏感性。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子1 寡核苷酸类 反义 放射疗法 荷瘤裸鼠

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新型载HIF-1α反义寡核苷酸微泡联合超声对肿瘤生长的抑制作用 被引量：1

6

作者 钟渝 赵洋 +1 位作者 高顺记 刘政 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期726-728,733,共4页

目的血管毁损术治疗肿瘤后,肿瘤血管均有不同程度的再生,导致肿瘤坏死不彻底,其核心可能与HIF-1α的高表达有关。本研究探讨采用载HIF-1α反义寡核苷酸微泡联合超声抑制肿瘤生长的可行性。材料与方法 24只荷皮下VX2肿瘤的新西兰大白兔... 目的血管毁损术治疗肿瘤后,肿瘤血管均有不同程度的再生,导致肿瘤坏死不彻底,其核心可能与HIF-1α的高表达有关。本研究探讨采用载HIF-1α反义寡核苷酸微泡联合超声抑制肿瘤生长的可行性。材料与方法 24只荷皮下VX2肿瘤的新西兰大白兔随机分为新型微泡超声组(n=8)、普通微泡超声组(n=8)和单纯超声组(n=8)。新型微泡超声组经耳缘静脉推注载HIF-1α反义寡核苷酸微泡联合超声辐照,普通微泡超声组和单纯超声组分别以普通微泡、生理盐水代替。每次10 min,每72 h治疗一次,采集各时间点肿瘤二维超声图像,测量肿瘤切面最大直径。结果在30 d的实验周期内,新型微泡超声组、普通微泡超声组和单纯超声组的肿瘤平均直径由(1.13±0.19)cm、(1.17±0.21)cm、(1.22±0.17)cm生长至(1.60±0.45)cm、(2.11±0.57)cm、(3.43±0.71)cm。治疗前,3组肿瘤平均直径差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,新型微泡超声组肿瘤生长最缓慢,直径显著小于普通微泡超声组和单纯超声组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用载HIF-1α反义寡核苷酸微泡联合超声治疗可以明显增强普通微泡超声的血管毁损作用,有望成为一种新的肿瘤治疗方法。 展开更多

关键词 空化 HIF-1α反义寡核苷酸 微泡 肿瘤

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包载缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸纳米粒子的制备和特性评价 被引量：1

7

作者 郑延波 刘胜 +1 位作者 李丽君 刘万卉 《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第6期579-583,共5页

目的制备一种包载缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子,并评价其理化特性。方法应用复乳化-溶剂挥发法制备包载HIF-1α反义寡核苷酸PLGA纳米粒子,并固定其他因素,选择不同的聚乙烯醇(PVA)浓度(... 目的制备一种包载缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子,并评价其理化特性。方法应用复乳化-溶剂挥发法制备包载HIF-1α反义寡核苷酸PLGA纳米粒子,并固定其他因素,选择不同的聚乙烯醇(PVA)浓度(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%)和乳化速度(17 500、21 500、24 000 r/min),观察其对制备的纳米粒子粒度和载药量的影响;应用电子显微镜和粒度测定仪对制得的纳米粒子进行形态观察和粒径测定;应用高效液相色谱法测定纳米粒子的载药量和包封率并进行体外释药实验。结果制得的载HIF-1α反义寡核苷酸PLGA纳米粒子外观呈圆形或介于圆形与椭圆形之间,表面光滑圆整,粒径分布范围较窄,平均粒度为320 nm(标准差50 nm),纳米粒子载药量为(0.930±0.015)%,包封率为(79.14±1.78)%;纳米粒子中HIF-1α反义寡核苷酸在24 h突释期内累积释放率为31.2%,10 d内呈缓慢线性稳定性释放,释放量达81.5%。结论应用复乳化-溶剂挥发法制备包载HIF-1α反义寡核苷酸PLGA纳米粒子,方法实用有效,工艺稳定,重复性好。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1Α 反义寡核苷酸 纳米粒子 聚乳酸-聚乙醇酸共聚物

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WT1-反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞的促凋亡作用

8

作者 林露阳 陈大庆 张近波 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第28期46-47,共2页

应用缺陷型重组腺病毒介导W T 1-反义寡核苷酸(A SODN)转染人脑胶质瘤(U 251)细胞,逆转录聚合酶链反应检测W T 1 mRNA的表达,W estern b lot检测W T 1蛋白的表达;观察转染前后半胱天冬氨酸酶(caspase)3活性的变化及细胞凋亡情况。结果发... 应用缺陷型重组腺病毒介导W T 1-反义寡核苷酸(A SODN)转染人脑胶质瘤(U 251)细胞,逆转录聚合酶链反应检测W T 1 mRNA的表达,W estern b lot检测W T 1蛋白的表达;观察转染前后半胱天冬氨酸酶(caspase)3活性的变化及细胞凋亡情况。结果发现W T 1-A SODN可使U 251细胞中W T 1 mRNA和蛋白表达下降;caspase3活性明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。 展开更多

关键词 胶质瘤 WT1 反义寡核苷酸 凋亡

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Th1/Th2细胞因子的平衡与实验性肺间质纤维化 被引量：8

9

作者 谷秀 刘宏博 +2 位作者 张晓晔 李胜岐 佐久间勉 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第24期43-44,共2页

目的观察核因子-κB(NF-κB)及Th1/Th2细胞因子在博莱霉素所致小鼠肺纤维化模型中的表达及作用。方法气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型,给予P65的反义寡核苷酸作为干预因素,应用双抗夹心ELISA法对Th1/Th2细胞因子的代表因子IFN-... 目的观察核因子-κB(NF-κB)及Th1/Th2细胞因子在博莱霉素所致小鼠肺纤维化模型中的表达及作用。方法气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型,给予P65的反义寡核苷酸作为干预因素,应用双抗夹心ELISA法对Th1/Th2细胞因子的代表因子IFN-γ和IL-4分别进行检测,以IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2细胞因子的比值。应用免疫组化方法检测肺组织中NF-κB的活性。并分别测定不同时间段肺泡灌洗液中羟脯氨酸的含量。结果肺纤维化的动物模型中NF-κB活性明显增强;出现Th1/Th2细胞因子失衡;P65反义寡核苷酸明显抑制NF-κB活化,并明显纠正Th1/Th2细胞因子失衡,减轻肺泡炎和肺纤维化程度。结论 NF-κB的活化可能为肺间质纤维化的始动因子,阻断其活性可以纠正Th1/Th2的失衡情况,明显改善肺纤维化的病理过程。 展开更多

关键词 博莱霉素 肺纤维化 核因子-ΚB TH1/TH2细胞因子 反义寡核苷酸

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H5N1禽流感病毒及抗病毒新药的研究进展 被引量：5

10

作者 陈执中 《食品与药品》 CAS 2008年第5期58-61,共4页

禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是引起鸟禽类烈性传染病的病毒。1997年发现AIV跨越物种障碍使人感染。H5N1是有强致病力的禽流感病毒,感染H5N1的患者死亡率高。本文综述了禽流感病毒致病机制研究以及抗H5N1禽流感病毒新药的进展... 禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是引起鸟禽类烈性传染病的病毒。1997年发现AIV跨越物种障碍使人感染。H5N1是有强致病力的禽流感病毒,感染H5N1的患者死亡率高。本文综述了禽流感病毒致病机制研究以及抗H5N1禽流感病毒新药的进展,包括:神经氨酸苷酶新抑制剂及核酸基的抗禽流感病毒新药——免疫调节双链核糖核酸聚ICLC脂质体和反义寡核苷酸。 展开更多

关键词 H5N1禽流感病毒 致病机制 抗禽流感病毒新药 聚ICLC脂质体 反义寡核苷酸

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黏着斑激酶对血小板源性生长因子刺激的血管平滑肌细胞迁移和黏附的调控 被引量：5

11

作者 武衡 钟杨 +1 位作者 汤显靖 成志 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第7期648-651,共4页

目的探讨黏着斑激酶(FAK)信号分子在雷帕霉素抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、黏附中的调控作用。方法将培养的大鼠VSMC分为对照组、PDGF组、雷帕霉素+PDGF组(雷帕霉素组)和FAK反义寡核苷酸+PDGF组(FAK组)。... 目的探讨黏着斑激酶(FAK)信号分子在雷帕霉素抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、黏附中的调控作用。方法将培养的大鼠VSMC分为对照组、PDGF组、雷帕霉素+PDGF组(雷帕霉素组)和FAK反义寡核苷酸+PDGF组(FAK组)。用PDGF诱导VSMC的迁移和黏附,计数贴壁细胞;采用Boyden检测细胞迁移;采用RT-PCR、Western blot、免疫沉淀方法分别检测FAK基因、蛋白及蛋白磷酸化表达量。将FAK反义寡核苷酸经脂质体转染VSMC,观察FAK mRNA及蛋白磷酸化、细胞迁移和黏附的变化。结果与对照组比较,PDGF组明显诱导细胞迁移和黏附,上调FAK mRNA的表达,提高FAK蛋白和磷酸化FAK表达,差异有统计学意义(P<0.05),与PDGF组比较,FAK组和雷帕霉素组细胞迁移、黏附能力减弱,FAK mRNA、FAK蛋白和磷酸化FAK表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDGF诱导细胞迁移和黏附可能是FAK介导的,雷帕霉素可能是通过抑制FAK蛋白和磷酸化FAK来抑制VSMC的迁移和黏附。 展开更多

关键词 黏着斑激酶1 西罗莫司 血小板源性生长因子 肌 平滑 血管 寡核苷酸类 反义 细胞黏附

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survivin ASODN对人胰腺癌PANC细胞移植瘤生长的影响及机制探讨 被引量：1

12

作者 张超 刘志明 《山东医药》 CAS 2012年第14期19-22,共4页

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中survivin、PTEN、CEACAM-1表达的影响,并探讨其作用机制。方法构建28只人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、正义寡核苷酸(SODN)组、AS... 目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中survivin、PTEN、CEACAM-1表达的影响,并探讨其作用机制。方法构建28只人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、正义寡核苷酸(SODN)组、ASODN组、脂质体组,各7只,分别于瘤周及瘤体注射50μL的PBS、SODN、ASODN、脂质体+无血清DMEM。注射结束后2 d,切取瘤体,测算肿瘤生长抑制率和生长指数,免疫组化法检测瘤组织中的survivin、PTEN、CEACAM-1蛋白,TUNEL染色镜下观察细胞凋亡情况,半定量RT-PCR检测瘤组织中的survivin mRNA、PTEN mRNA、CEACAM-1 mRNA。结果与其他三组相比,ASODN组肿瘤生长抑制率高、生长指数低、细胞凋亡指数高(P均<0.05),其瘤组织中survivin和CEACAM-1表达下降、PTEN表达上升(P均<0.05)。结论 survivin ASODN可有效抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin和CEACAM-1的表达、促进PTEN的表达有关。 展开更多

关键词 生存素 癌胚抗原相关细胞黏附分子1 第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因 反义寡核苷酸 胰腺肿瘤

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