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TGEV和PEDV融合S蛋白在乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达与免疫原性分析
1
作者
徐波
熊维娜
+3 位作者
周通
刘志文
应碧
郭晓燕
《中国饲料》
北大核心
2014年第4期34-37,共4页
本研究以乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体pRNA48为基础,构建了含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)融合S基因的表达质粒pRNA48-TPs和重组菌L.lactis NZ9000/pRNA48-TPs。SDS-PAGE分析nisin诱导后重组菌表达的...
本研究以乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体pRNA48为基础,构建了含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)融合S基因的表达质粒pRNA48-TPs和重组菌L.lactis NZ9000/pRNA48-TPs。SDS-PAGE分析nisin诱导后重组菌表达的细胞内目的蛋白,然后分别对兔子进行注射免疫和口服免疫,并用Western Blot进行免疫原性分析,结果表明,重组菌细胞内表达的TPs融合蛋白具有较好的免疫原性,注射免疫产生的抗体能特异性识别胞内TPs融合蛋白,同时发现口服免疫也能产生特异的抗体血清,初步证明重组蛋白具有黏膜免疫原性。
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关键词
tgev和pedv融合s蛋白
乳酸乳球菌
食品级载体
细胞内高效诱导表达
免疫原性分析
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职称材料
PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定
2
作者
刘青
顾天越
+9 位作者
包利霞
朱凡杰
王鑫源
刘婷婷
朱晓琛
鄢明华
董志民
王利丽
张东超
金天明
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期3495-3505,共11页
[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T...
[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。
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关键词
猪流行性腹泻病毒(
pedv
)
猪传染性胃肠炎病毒(
tgev
)
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)
s
蛋白
表位疫苗
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职称材料
题名
TGEV和PEDV融合S蛋白在乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达与免疫原性分析
1
作者
徐波
熊维娜
周通
刘志文
应碧
郭晓燕
机构
江西农业大学生物科学与工程学院
出处
《中国饲料》
北大核心
2014年第4期34-37,共4页
基金
国家自然科学基金(31360372)
江西省科技支撑计划项目(2009BNB05704)
文摘
本研究以乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体pRNA48为基础,构建了含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)融合S基因的表达质粒pRNA48-TPs和重组菌L.lactis NZ9000/pRNA48-TPs。SDS-PAGE分析nisin诱导后重组菌表达的细胞内目的蛋白,然后分别对兔子进行注射免疫和口服免疫,并用Western Blot进行免疫原性分析,结果表明,重组菌细胞内表达的TPs融合蛋白具有较好的免疫原性,注射免疫产生的抗体能特异性识别胞内TPs融合蛋白,同时发现口服免疫也能产生特异的抗体血清,初步证明重组蛋白具有黏膜免疫原性。
关键词
tgev和pedv融合s蛋白
乳酸乳球菌
食品级载体
细胞内高效诱导表达
免疫原性分析
Keywords
fu
s
ion protein
s
of
tgev
and
pedv
Lactococcu
s
lacti
s
food-grade vector
the high efficient inductionexpre
s
s
ion intracellular
immunogenicity
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定
2
作者
刘青
顾天越
包利霞
朱凡杰
王鑫源
刘婷婷
朱晓琛
鄢明华
董志民
王利丽
张东超
金天明
机构
天津农学院动物科学与动物医学学院
天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室
天津市农业科学院畜牧兽医研究所
农业农村部智慧养殖重点实验室(部省共建)
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期3495-3505,共11页
基金
国家自然科学基金青年基金资助项目(32202760)
甘肃省科技计划项目(22CX8NL215)
+1 种基金
天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室开放基金课题资助项目(2020zdkf02)
农业农村部智慧养殖重点实验室(部省共建)开放基金资助(2023-TJAUKLSBF-2103)。
文摘
[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。
关键词
猪流行性腹泻病毒(
pedv
)
猪传染性胃肠炎病毒(
tgev
)
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)
s
蛋白
表位疫苗
Keywords
Porcine epidemic diarrhea viru
s
(
pedv
)
Porcine tran
s
mi
s
s
ible ga
s
troenteriti
s
viru
s
(
tgev
)
Porcine delta coronaviru
s
(PDCoV)
s
protein
epitope vaccine
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TGEV和PEDV融合S蛋白在乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达与免疫原性分析
徐波
熊维娜
周通
刘志文
应碧
郭晓燕
《中国饲料》
北大核心
2014
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定
刘青
顾天越
包利霞
朱凡杰
王鑫源
刘婷婷
朱晓琛
鄢明华
董志民
王利丽
张东超
金天明
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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