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类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术
被引量：
52
1
作者
沈延
肖安
+3 位作者
黄鹏
王唯晔
朱作言
张博
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期395-409,共15页
人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效...
人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。
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关键词
类
转录
激活
因子
效应物(
tale
)
类
转录
激活
因子
效应物核酸酶(
tale
N)
人工核酸内切酶(EEN)
基因组编辑
基因组定点修饰
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职称材料
利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）
2
作者
吴芸
张志强
+6 位作者
李铎
徐坤
韩芙蓉
任充华
闫强
王昕
张智英
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期461-469,共9页
转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效...
转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。
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关键词
tale
-N端
转录
激活
子样效应
因子
核酸酶(
tale
Ns)
Oct4基因
tale
转录
激活
因子
(
tale-tf
)
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职称材料
题名
类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术
被引量：
52
1
作者
沈延
肖安
黄鹏
王唯晔
朱作言
张博
机构
北京大学生命科学学院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期395-409,共15页
基金
国家重大科学研究计划项目(编号:2011CBA01000和2012CB945101)
国家自然科学基金项目(编号:31110103904)资助
文摘
人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。
关键词
类
转录
激活
因子
效应物(
tale
)
类
转录
激活
因子
效应物核酸酶(
tale
N)
人工核酸内切酶(EEN)
基因组编辑
基因组定点修饰
Keywords
transcription activator-like effector （
tale
）
transcription activator-like effector nuclease （
tale
N）
engineered endonuclease （EEN）
genome editing
targeted genome modification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）
2
作者
吴芸
张志强
李铎
徐坤
韩芙蓉
任充华
闫强
王昕
张智英
机构
西北农林科技大学动物科技学院
遵义师范学院生物与农业科技学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期461-469,共9页
基金
Supported by Scientific and Technological Project of Shaanxi Province,China(No.2014K02-07-01)
China Postdoctoral Science Foundation(No.2015M580887)~~
文摘
转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。
关键词
tale
-N端
转录
激活
子样效应
因子
核酸酶(
tale
Ns)
Oct4基因
tale
转录
激活
因子
(
tale-tf
)
Keywords
tale
N-terminal
tale
-based nucleases （
tale
Ns）
Oct4 gene
tale
transcript factors （
tale-tf
）
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术
沈延
肖安
黄鹏
王唯晔
朱作言
张博
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2013
52
在线阅读
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职称材料
2
利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）
吴芸
张志强
李铎
徐坤
韩芙蓉
任充华
闫强
王昕
张智英
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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