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题名人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白T7噬菌体抗体库的构建
被引量：5
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作者
刘兵
王美莲
王斯
史俊岩
郑兰艳
牟玲
罗恩杰
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机构
中国医科大学基础医学院病原生物教研室
沈阳市传染病院肾综合征出血热研究所
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出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2007年第2期16-20,共5页
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基金
辽宁省自然科学基金资助(20062101)
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文摘
构建人源T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗体。从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以基因工程表达NP进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.35×107,扩增后初级库滴度为2.12×1010pfu/mL。以NP抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与NP抗原特异结合的噬菌体抗体。结果表明,研究成功构建了人源抗NP蛋白T7噬菌体抗体库。
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关键词
汉坦病毒
SCFV
t7噬菌体抗体库
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Keywords
Hantaan virus
seFv
t7 phage display library
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分类号
R373.3
[医药卫生—病原生物学]
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题名抗乙型肝炎病毒表面抗原T7噬菌体抗体库的构建
被引量：4
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作者
刘兵
马晓宇
李响
罗恩杰
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机构
中国医科大学基础医学院病原生物教研室
中国医科大学
沈阳医学院奉天医院药剂科
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出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第1期84-87,共4页
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文摘
构建T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体。从抗-HBs阳性患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第1条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以乙型肝炎病毒表面抗原进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.53×107,扩增后初级库滴度为2.42×1010pfu/mL。以乙型肝炎病毒表面抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与HBsAg抗原特异结合的噬菌体抗体,成功构建了抗HBsAg蛋白T7噬菌体抗体库。
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关键词
乙型肝炎病毒表面抗原
SCFV
t7噬菌体抗体库
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Keywords
HbsAg
scFv
t7 phage antibody library
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分类号
R373.21
[医药卫生—病原生物学]
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