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基于线性荧光探针对T4 DNA连接酶的活性分析
被引量：
3
1
作者
刘斌
羊小海
+1 位作者
王柯敏
谭蔚泓
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期463-467,共5页
利用线性荧光探针作为核酸连接反应的模板和信号分子,通过实时监测荧光信号的降低来表征连接产物的生成过程,从而建立了一种连续、简单且特异性高的T4 DNA连接酶活性分析的新方法,检出限可达1.2 U/mL;同时,该方法还可用于快速考察金属...
利用线性荧光探针作为核酸连接反应的模板和信号分子,通过实时监测荧光信号的降低来表征连接产物的生成过程,从而建立了一种连续、简单且特异性高的T4 DNA连接酶活性分析的新方法,检出限可达1.2 U/mL;同时,该方法还可用于快速考察金属离子和化学药物对酶促反应的影响.实验结果表明,该法不仅为灵敏、实时监测核酸连接反应提供了一种简便快捷的非同位素分析方法,也为开展核酸连接酶活性分析、反应动力学机制探讨和药物快速筛选提供了一种新技术.
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关键词
线性荧光探针
t4dna连接酶
实时监测
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职称材料
融合蛋白Trx-T4 DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用
被引量：
2
2
作者
付大伟
陈启蒙
徐伟
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期83-89,96,共8页
构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%...
构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Transetta(DE3)(p NBEVII-T4 DL)诱导表达的可溶性融合蛋白Trx-T4 DL的产量最多,经诱导培养条件优化后,Trx-T4 DL的可溶性大幅度提高,确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50 m L/250 m L、接种量2‰、p H7。分别用镍柱和Mag Ni磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Trx-T4 DL,结果显示后者纯化效率更高,最终获得的融合蛋白浓度为1700.462 mg/L。与其他公司T4 DL活性进行比较,检测其酶活性约为500 U/μL,并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中,为融合蛋白Trx-T4 DL的生产及应用提供理论基础。
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关键词
t4dna连接酶
融合标签
自诱导
磁珠法
纯化
低背景克隆载体
连接
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职称材料
条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定
被引量：
6
3
作者
赵艳景
胡亚楠
+5 位作者
刘睿
王颖
余江河
叶波平
王旻
吴梧桐
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期82-86,共5页
建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含H...
建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含HindIII酶切位点的Oligo(dG)10为引物,通过LD-PCR (long- distance-PCR)方法合成双链cDNA,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库.对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4.92×105个/μg dscDNA,重组率达96.7%.对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中25个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76%).鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础.
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关键词
肝组织
鲨鱼
构建
质粒文库
c
dna
第一链
t4dna连接酶
c
dna
文库
GENBANK
鉴定
斑竹
条纹
ES
t
数据库
差异显示技术
酶切位点
末端转移酶
总RNA
mRNA
分析结果
重复序列
比对分析
功能基因
差异表达
再生过程
双酶切
库容量
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职称材料
题名
基于线性荧光探针对T4 DNA连接酶的活性分析
被引量：
3
1
作者
刘斌
羊小海
王柯敏
谭蔚泓
机构
湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期463-467,共5页
基金
国家自然科学基金(批准号:90606003,20805012)
国家“八六三”计划项目(批准号:2007AA022007)
湖南省杰出青年科学基金(批准号:08JJ1002)资助
文摘
利用线性荧光探针作为核酸连接反应的模板和信号分子,通过实时监测荧光信号的降低来表征连接产物的生成过程,从而建立了一种连续、简单且特异性高的T4 DNA连接酶活性分析的新方法,检出限可达1.2 U/mL;同时,该方法还可用于快速考察金属离子和化学药物对酶促反应的影响.实验结果表明,该法不仅为灵敏、实时监测核酸连接反应提供了一种简便快捷的非同位素分析方法,也为开展核酸连接酶活性分析、反应动力学机制探讨和药物快速筛选提供了一种新技术.
关键词
线性荧光探针
t4dna连接酶
实时监测
Keywords
Linear fluorescence probe
t
4
dna
ligase
Real-
t
ime moni
t
oring
分类号
O657 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
融合蛋白Trx-T4 DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用
被引量：
2
2
作者
付大伟
陈启蒙
徐伟
机构
哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期83-89,96,共8页
基金
哈尔滨商业大学博士科研启动基金项目(92508633)
文摘
构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Transetta(DE3)(p NBEVII-T4 DL)诱导表达的可溶性融合蛋白Trx-T4 DL的产量最多,经诱导培养条件优化后,Trx-T4 DL的可溶性大幅度提高,确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50 m L/250 m L、接种量2‰、p H7。分别用镍柱和Mag Ni磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Trx-T4 DL,结果显示后者纯化效率更高,最终获得的融合蛋白浓度为1700.462 mg/L。与其他公司T4 DL活性进行比较,检测其酶活性约为500 U/μL,并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中,为融合蛋白Trx-T4 DL的生产及应用提供理论基础。
关键词
t4dna连接酶
融合标签
自诱导
磁珠法
纯化
低背景克隆载体
连接
Keywords
t
4
dna
ligase
fusion
t
ags
au
t
o- induc
t
ion
magne
t
ic bead me
t
hod
purifica
t
ion
low background cloning vec
t
or
liga
t
ion
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定
被引量：
6
3
作者
赵艳景
胡亚楠
刘睿
王颖
余江河
叶波平
王旻
吴梧桐
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期82-86,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)，教育部霍英东教育基金会高等院校青年教师基金，江苏省自然科学基金
文摘
建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含HindIII酶切位点的Oligo(dG)10为引物,通过LD-PCR (long- distance-PCR)方法合成双链cDNA,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库.对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4.92×105个/μg dscDNA,重组率达96.7%.对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中25个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76%).鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础.
关键词
肝组织
鲨鱼
构建
质粒文库
c
dna
第一链
t4dna连接酶
c
dna
文库
GENBANK
鉴定
斑竹
条纹
ES
t
数据库
差异显示技术
酶切位点
末端转移酶
总RNA
mRNA
分析结果
重复序列
比对分析
功能基因
差异表达
再生过程
双酶切
库容量
分类号
Q959.42 [生物学—动物学]
S858.32 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于线性荧光探针对T4 DNA连接酶的活性分析
刘斌
羊小海
王柯敏
谭蔚泓
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
融合蛋白Trx-T4 DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用
付大伟
陈启蒙
徐伟
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定
赵艳景
胡亚楠
刘睿
王颖
余江河
叶波平
王旻
吴梧桐
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2005
6
在线阅读
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职称材料
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