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T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR⁃T细胞功能鉴定中的应用
1
作者
梁思辛
郑瑞
+5 位作者
赵晓娟
张仪婷
王鹏举
蒙若彤
阎博
杨安钢
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期397-403,共7页
目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病...
目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率。通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR⁃T细胞的功能。结果酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR⁃T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR⁃T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR⁃T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能。结论TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR⁃T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段。
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关键词
t
细胞
活力
响应
性
启动子
(
tarp
)
萤光素酶报告基因系统
嵌合抗原受体修饰
t
细胞
(CAR⁃
t
cells)
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题名
T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR⁃T细胞功能鉴定中的应用
1
作者
梁思辛
郑瑞
赵晓娟
张仪婷
王鹏举
蒙若彤
阎博
杨安钢
机构
新乡医学院医学技术学院
空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
延安大学生命科学学院
空军军医大学基础医学院免疫学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期397-403,共7页
基金
国家自然科学基金(81972870)
国家肿瘤生物学重点实验室自主课题(CBSKL2022ZZ20)。
文摘
目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率。通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR⁃T细胞的功能。结果酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR⁃T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR⁃T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR⁃T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能。结论TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR⁃T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段。
关键词
t
细胞
活力
响应
性
启动子
(
tarp
)
萤光素酶报告基因系统
嵌合抗原受体修饰
t
细胞
(CAR⁃
t
cells)
Keywords
t
cell ac
t
ivi
t
y⁃responsive promo
t
er(
tarp
)
luciferase repor
t
er gene sys
t
em
chimeric an
t
igen recep
t
or modified
t
cells(CAR⁃
t
cells)
分类号
R457.2 [医药卫生—治疗学]
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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1
T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR⁃T细胞功能鉴定中的应用
梁思辛
郑瑞
赵晓娟
张仪婷
王鹏举
蒙若彤
阎博
杨安钢
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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