胸腺输出功能的评价手段—T细胞受体重排删除环的定量分析 被引量：25

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作者 李扬秋 韩素芳 杨力建 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期667-672,共6页

多年来 ,因缺乏合适的检测胸腺输出naiveT细胞的技术 ,未能明确胸腺输出功能。由于胸腺T细胞的分化始于T细胞受体 (TCR)基因的重排 ,在TCRα基因重排时 ,通过δRec和 ψJα基因片段重组形成染色体外DNA环而删除TCRδ基因 ,该删除环称为... 多年来 ,因缺乏合适的检测胸腺输出naiveT细胞的技术 ,未能明确胸腺输出功能。由于胸腺T细胞的分化始于T细胞受体 (TCR)基因的重排 ,在TCRα基因重排时 ,通过δRec和 ψJα基因片段重组形成染色体外DNA环而删除TCRδ基因 ,该删除环称为信号结合T细胞受体重排删除环 (sjTRECS)或TRECs。TRECs十分稳定 ,不扩增且随着细胞增殖而稀释 ,故近期研究认为对TRECs的定量检测可以直接地估计胸腺的输出功能。本文综述了TRECs定量分析在评价正常人和造血干细胞移植 ,血液肿瘤、HIV感染和自身免疫性疾病等等的胸腺输出功能中的作用。 展开更多

关键词 t细胞受体重排删除环 胸腺输出功能 定量PCR 基因 tCR

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清髓性非血缘脐血与同胞供体造血干细胞移植后T淋巴细胞亚群及其受体重排删除环早期重建规律的比较分析 被引量：4

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作者 聂豪 汪健 +8 位作者 路幼佳 郑昌成 汤宝林 姚雯 朱小玉 强萍 张磊 刘会兰 孙自敏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期440-446,共7页

本研究比较分析清髓性非血缘脐血移植(UCBT)与同胞供体骨髓和/或外周血干细胞移植(BMT/PBSCT)后恶性血液病受者早期T细胞亚群及T细胞受体重排删除环(T-cell receptor excision cycles,TREC)的重建规律。用流式细胞术检测40例恶性血液病... 本研究比较分析清髓性非血缘脐血移植(UCBT)与同胞供体骨髓和/或外周血干细胞移植(BMT/PBSCT)后恶性血液病受者早期T细胞亚群及T细胞受体重排删除环(T-cell receptor excision cycles,TREC)的重建规律。用流式细胞术检测40例恶性血液病患者清髓性异基因造血干细胞移植后6个月外周血中T细胞亚群的变化,实时定量PCR检测TREC。结果表明,UCBT与BMT/PBSCT相比,在移植后1个月内CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞绝对值明显降低,此后无明显差别;2个月内CD3+细胞比例较低,但无明显差别。UCBT同BMT/PBSCT类似,CD3+CD4+细胞自植入开始即明显减低,2个月达最低,以后缓慢恢复,但至6个月仍未达正常;而CD3+CD8+亚群植入时已达正常水平,CD4+/CD8+比值至6个月仍低于正常。UCBT组在移植后1个月内naive T细胞明显高于BMT/PBSCT组;而在移植后3个月开始终末分化效应记忆T细胞明显高于BMT/PBSCT组,且明显高于正常对照组。移植后6个月内两组移植受者TREC均较低。结论:与同胞供体BMT/PBSCT相比较,UCBT后早期T细胞重建显著延迟,但终末效应记忆T细胞亚型水平明显升高,从而发挥着抗感染或抗白血病作用。 展开更多

关键词 造血干细胞移植 脐血移植 免疫重建 t细胞亚群 t细胞受体重排删除环

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TaqMan-MGB探针实时荧光PCR法检测T细胞受体重排删除环评估慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能 被引量：5

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作者 潘克女 张永乐 +3 位作者 张钧 左中宝 俞哲 刘寿荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期834-839,共6页

目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环(TRECs)的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能。方法:根据T细胞受体(TCR)基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感... 目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环(TRECs)的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能。方法:根据T细胞受体(TCR)基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性;并将此技术应用于慢性乙型肝炎中型(CHB)患者中评价胸腺输出功能。结果:通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×10~5copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出可达50 copies;对6. 18 Lg copies/10~6PBMCs和3. 54 Lg copies/10~6PBMCs高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6. 08±0. 14,3. 52±0. 18 Lg copies/10~6PBMCs批内变异系数分别为2. 26%,5. 12%,对这两份标本连续5 d重复20次试验结果平均值为6. 10±0. 23,3. 51±0. 22 Lg copies/10~6PBMCs批间变异系数分别为3. 85%、6. 27%;用双蒸水代替模板进行检测无目的基因扩增。35例健康成年人外周血TRECs平均含量为5. 62±1. 38 Lg copies/10~6PBMCs,45例同年龄段CHB患者外周血TRECs平均含量为4. 09±0. 97 Lg copies/10~6PBMCs,两者差异存在统计学意义(t=11. 25,P <0. 05)。结论:Taq Man-MGB双标记探针时荧光定量PCR技术检测TRECs特异性强,灵敏度高,重复性好;成年CHB中型患者外周血TRECs含量明显低于同龄健康人群,TRECs可用于CHB患者胸腺功能的评估。 展开更多

关键词 t细胞受体重排删除环 胸腺 实时荧光定量聚合酶链反应 肝炎 乙型 慢性

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AML患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的检测 被引量：5

4

作者 尹青松 李扬秋 +2 位作者 陈少华 杨力建 耿素霞 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期475-479,共5页

目的:检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1sjTRECs的存在情况。方法:利用半巢式PCR扩增31例不同亚型AML患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(sjTRECs)中的Vβ2-、Vβ5-和V... 目的:检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1sjTRECs的存在情况。方法:利用半巢式PCR扩增31例不同亚型AML患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(sjTRECs)中的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1sjTRECs,10例正常人外周血作为对照。结果:TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人和AML患者中均可检测到,AML患者三者的检出率分别为45.16%、41.94%和32.26%,均略低于正常人,但差别未显示出统计学意义。≤30岁的AML患者3种VβsjTRECs的检出率均高于30岁以上的患者,以Vβ2-Dβ1 sjTRECs最明显。结论:率先提供AML患者外周血T细胞中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,为研究AML患者胸腺近期各Vβ亚家族幼稚(na ve)T细胞的输出情况提供资料。 展开更多

关键词 急性髓性白血病 NAIVE t细胞 t细胞受体删除dna环 胸腺近期输出功能

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正常人外周血和脐血中TCRVβ亚家族sjTRECs的检测情况 被引量：5

5

作者 尹青松 李扬秋 +3 位作者 陈少华 杨力建 卢育洪 张学利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期477-479,共3页

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1... 目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。 展开更多

关键词 t细胞受体 t细胞受体重排删除环 VΒ亚家族

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实时荧光定量PCR检测外周血TREC的方法研究 被引量：2

6

作者 阴继霞 武大林 +1 位作者 许文娟 孙竞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1009-1013,共5页

目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在ABI7000PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品,摸索最佳扩增条... 目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在ABI7000PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品,摸索最佳扩增条件及建立标准曲线,然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本。结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物。TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高。金牌热启动Taq酶,比较普通Taq酶而言,提高了PCR的特异性和敏感性。FQ-PCR的反应条件设定:95℃10min后95℃5s,53℃30s,40循环结束。结论通过摸索与优化实验条件,建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR t细胞受体删除dna环(trec) 造血干细胞移植

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利用人体外周血痕sjTREC含量推断个体年龄 被引量：4

7

作者 曲冬阳 邓淑娇 +2 位作者 葛芸英 陈松 欧雪玲 《法医学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期256-258,272,共4页

目的验证人外周血中信号结合T细胞受体删除DNA环(signal joint T-cell receptor excision DNAcircle,sjTREC)水平与年龄的相关性公式,探讨其在鉴定实践中的应用价值。方法收集已知年龄的健康无关个体外周血痕样品30例,室温放置4周后,分... 目的验证人外周血中信号结合T细胞受体删除DNA环(signal joint T-cell receptor excision DNAcircle,sjTREC)水平与年龄的相关性公式,探讨其在鉴定实践中的应用价值。方法收集已知年龄的健康无关个体外周血痕样品30例,室温放置4周后,分别提取血痕DNA。通过实时荧光定量PCR技术,定量测定外周血痕DNA中sjTREC含量,并选择人TATA盒结合蛋白(TATA box binding protein,TBP)序列作为内参基因。采用年龄推断公式Age=-7.1815Y-42.458±9.42(Y=dCtTBP-sjTREC)推算血痕的供体年龄,并与供体实际年龄作比较,验证方法准确性。结果在收集的30例血痕样品中均能检测到目的基因sjTREC和内参基因TBP。外周血痕sjTREC含量随供体年龄的增长而降低(P<0.01)。采用本方法推断血痕个体年龄的准确率为76.67%。结论利用sjTREC含量推断血痕个体年龄的方法简单、快速、灵敏、种属特异性好,具有重要的应用前景。 展开更多

关键词 法医遗传学 血液 信号结合t细胞受体删除dna环 年龄

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慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后TRECs含量的变化 被引量：4

8

作者 葛国洪 陈明 +2 位作者 李红兵 郭海燕 汪莉萍 《临床肝胆病杂志》 CAS 2007年第3期163-165,共3页

观察慢性乙型肝炎(CHB)患者经抗病毒治疗前后T细胞受体重排删除环(TRECs)含量的变化。利用实时荧光定量PCR方法检测15例干扰素、13例阿德福韦酯治疗前后的CHB患者及27例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中TRECs的含量。CHB患者中TREC... 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者经抗病毒治疗前后T细胞受体重排删除环(TRECs)含量的变化。利用实时荧光定量PCR方法检测15例干扰素、13例阿德福韦酯治疗前后的CHB患者及27例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中TRECs的含量。CHB患者中TRECs含量为(7.29±2.26)copies/103PBMCs,低于健康体检者TRECs水平(10.48±6.90)copies/103PBMCs,P<0.05;TRECs含量与HBV载量直线相关分析r=0.06,P=0.975;干扰素组治疗后TRECs含量(12.77±5.25)copies/103PBMCs,高于治疗前(7.14±2.69)copies/103PBMCs,P<0.05;阿德福韦酯组治疗后TRECs含量(8.63±3.26)copies/103PBMCs与治疗前(7.46±1.73)copies/103PBMCs比较,P>0.05,差异无统计学意义。CHB患者组中TRECs含量低于正常对照组,TRECs含量与HBV载量无明显相关性,干扰素治疗能提高CHB患者中TRECs的含量,而阿德福韦酯无此作用。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 t细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 抗病毒药

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急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究 被引量：1

9

作者 吴秀丽 李扬秋 +5 位作者 朱康儿 杨力建 陈少华 卢育洪 陈洁 刘启发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期828-830,共3页

目的:监测急性髓性白血病(AML)患者接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,了解移植后早期的T细胞免疫重建情况。方法:AML患者15例分别在allo-HSCT前以及allo-HSCT后每隔2周收集外周血,采用... 目的:监测急性髓性白血病(AML)患者接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,了解移植后早期的T细胞免疫重建情况。方法:AML患者15例分别在allo-HSCT前以及allo-HSCT后每隔2周收集外周血,采用实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;7例年龄相近的正常人外周血样本作为对照。流式检测CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的阳性率。结果:allo-HSCT组移植前的TRECs平均拷贝数为(1.42±1.51)拷贝/1000 PBMNCs,明显低于正常组的(3.03±0.45)拷贝/1000 PBMNCs水平;移植后第12周的TRECs平均拷贝数为(1.67±1.93)拷贝/1000 PBMNCs,与正常相比仍然较低。移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主,而外周血TRECs水平在allo-HSCT后4周左右出现短暂地升高趋势,随后又下降,至allo-HSCT8周后才开始稳步上升。有急性移植物抗宿主病(aGVHD)病史的移植患者的外周血TRECs水平显著降低,明显低于无aGVHD病史移植患者的外周血TRECs水平。3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到。结论:不同个体T细胞免疫重建时间存在差异;AML患者在allo-HSCT后早期(90d内)的胸腺输出功能仍处于恢复阶段,移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主;外周血TRECs水平可能与AML患者allo-HSCT后病情的发展、转归有关。 展开更多

关键词 造血干细胞移植 异基因 t细胞受体重排删除环 免疫重建

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自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能 被引量：2

10

作者 吴秀丽 李扬秋 +3 位作者 朱康儿 陈少华 杨力建 杜欣 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期564-567,572,共5页

目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况。方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PB... 目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况。方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照。结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P<0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平。结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异。 展开更多

关键词 自体造血干细胞移植 t细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能

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重度苯中毒患者胸腺输出近期功能明显低下 被引量：18

11

作者 李扬秋 韩素芳 +4 位作者 杨力建 陈少华 周羽竝 陈嘉愉 刘薇薇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期114-117,共4页

本研究目的在于分析重度苯中毒患者外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环 (T cellreceptorexci sionDNAcircle ,TREC)的含量 ,从而了解其初始 (naive)T细胞的含量和胸腺近期输出功能。利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 8例重度苯中毒... 本研究目的在于分析重度苯中毒患者外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环 (T cellreceptorexci sionDNAcircle ,TREC)的含量 ,从而了解其初始 (naive)T细胞的含量和胸腺近期输出功能。利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 8例重度苯中毒患者和 16例正常人外周血单个核细胞 (PBMNC)中TREC的水平。结果显示正常人中TREC含量为 :6 .6 9± 4 .79 10 0 0PBMNC ;而重度苯中毒患者则为 1.0 3± 0 .4 4 10 0 0PBMNC ,显著低于正常人TREC水平 (P <0 .0 1) ,并持续苯中毒的全过程 ,即使在外周血血象基本恢复正常时 ,TREC水平仍处于较低状态。结论 :重度苯中毒患者胸腺近期输出功能明显低下 ,苯中毒明显损伤T细胞免疫功能。 展开更多

关键词 苯中毒 t细胞受体删除dna环 胸腺输出功能

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实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立 被引量：1

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作者 张华华 曾耀英 +1 位作者 何贤辉 刑飞跃 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期62-65,共4页

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细... 目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB／c和C57BL／6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。 展开更多

关键词 实时定量PCR t细胞受体删除环 幼稚t细胞

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原发性血小板减少性紫癜患者胸腺近期输出功能状态

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作者 张学利 李扬秋 +5 位作者 吴秀丽 陈少华 杨力建 张涛 钟隽 朱康儿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期157-159,163,共4页

目的:了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者胸腺近期输出功能的状态,评价其T细胞潜能。方法:采用实时定量PCR(TaqM an)方法检测15例ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,17例正常人作为对照。结果:正... 目的:了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者胸腺近期输出功能的状态,评价其T细胞潜能。方法:采用实时定量PCR(TaqM an)方法检测15例ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,17例正常人作为对照。结果:正常人外周血中每1 000个PBMCs中TRECs拷贝数为(3.76±3.42),ITP患者TRECs水平变化较大[每1000个PBMCs中TRECs拷贝数为(2.60±2.99)],4例病人未能检测到TRECs,病人平均TRECs水平与正常人的差异没有显著性(P>0.05),女性病人TRECs水平略高于男性(P=0.499),但无统计学意义。结论:多数ITP患者外周血初始T细胞水平和胸腺近期输出功能保持正常水平。 展开更多

关键词 原发性血小板减少性紫癜 胸腺近期输出功能 t细胞受体重排dna删除 实时定量多聚酶链 反应

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