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丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究
被引量：
5
1
作者
曹文尧
李江伟
+2 位作者
吕芳
侯秋莲
张富春
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期496-500,共5页
本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pG...
本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。
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关键词
丹毒丝菌
spaa基因
克隆
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职称材料
猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析
被引量：
10
2
作者
姚焱彬
陆萍
+3 位作者
杨志鹏
魏建忠
孙裴
李郁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期492-500,共9页
旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,W...
旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。
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关键词
猪丹毒丝菌
spaa基因
原核表达
免疫原性
免疫保护力
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职称材料
一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及spaA基因序列分析
被引量：
4
3
作者
李文春
杨仕标
李富祥
《上海畜牧兽医通讯》
2020年第3期9-12,共4页
从猪丹毒疑似病例肺脏中分离到1株革兰阳性小杆菌,编号为YN19071,对其进行形态学、分子生物学鉴定,并研究其致病性、耐药性以及spaA基因遗传进化关系。16S rRNA基因序列在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果显示分离株YN19071与猪丹毒杆菌(...
从猪丹毒疑似病例肺脏中分离到1株革兰阳性小杆菌,编号为YN19071,对其进行形态学、分子生物学鉴定,并研究其致病性、耐药性以及spaA基因遗传进化关系。16S rRNA基因序列在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果显示分离株YN19071与猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)模式菌株ATCC 19414~T同源性99.9%,对小鼠有较强的致病性。spaA基因进化分析显示,YN19071与10株猪丹毒杆菌中国分离株之间的同源性为98.8%~99.5%,与疫苗株G4T10同源性为99.3%。与疫苗株G4T10相比较,云南分离株YN19071的spaA基因存在3个突变位点T609G、A635G和A671G,对应的氨基酸序列也存在3个突变位点I203M、E212G和E224G。本研究在首次对云南猪丹毒杆菌spaA基因遗传进化分析,对云南猪丹毒杆菌的疫苗免疫防控具有指导意义。
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关键词
猪丹毒杆菌
分离
致病性
spaa基因
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职称材料
题名
丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究
被引量：
5
1
作者
曹文尧
李江伟
吕芳
侯秋莲
张富春
机构
新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期496-500,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30440084)
新疆高校科研计划重点项目(XJEDU2005I05)
文摘
本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。
关键词
丹毒丝菌
spaa基因
克隆
Keywords
Erysipelothrix rhusiopathiae
spaa
gene
cloning
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析
被引量：
10
2
作者
姚焱彬
陆萍
杨志鹏
魏建忠
孙裴
李郁
机构
安徽农业大学动物科技学院
安徽省畜禽产业共性技术研究院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期492-500,共9页
基金
国家星火计划重点项目(2014GA710002)
安徽省质量工程项目(2013sxzx008)
安徽省生猪产业体系基金
文摘
旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。
关键词
猪丹毒丝菌
spaa基因
原核表达
免疫原性
免疫保护力
Keywords
Erysipelothrix rhusiopathiae
spaa
gene
prokaryotic expression
immunogenicity
immune protection
分类号
S855.12 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及spaA基因序列分析
被引量：
4
3
作者
李文春
杨仕标
李富祥
机构
云南生物制药有限公司
云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室
出处
《上海畜牧兽医通讯》
2020年第3期9-12,共4页
基金
云南省创新人才计划项目(2017HB090)。
文摘
从猪丹毒疑似病例肺脏中分离到1株革兰阳性小杆菌,编号为YN19071,对其进行形态学、分子生物学鉴定,并研究其致病性、耐药性以及spaA基因遗传进化关系。16S rRNA基因序列在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果显示分离株YN19071与猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)模式菌株ATCC 19414~T同源性99.9%,对小鼠有较强的致病性。spaA基因进化分析显示,YN19071与10株猪丹毒杆菌中国分离株之间的同源性为98.8%~99.5%,与疫苗株G4T10同源性为99.3%。与疫苗株G4T10相比较,云南分离株YN19071的spaA基因存在3个突变位点T609G、A635G和A671G,对应的氨基酸序列也存在3个突变位点I203M、E212G和E224G。本研究在首次对云南猪丹毒杆菌spaA基因遗传进化分析,对云南猪丹毒杆菌的疫苗免疫防控具有指导意义。
关键词
猪丹毒杆菌
分离
致病性
spaa基因
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究
曹文尧
李江伟
吕芳
侯秋莲
张富春
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析
姚焱彬
陆萍
杨志鹏
魏建忠
孙裴
李郁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
10
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下载PDF
职称材料
3
一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及spaA基因序列分析
李文春
杨仕标
李富祥
《上海畜牧兽医通讯》
2020
4
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