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甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建
被引量：
3
1
作者
汪淼
李双喜
+5 位作者
桂意云
秦翠鲜
陈忠良
廖青
李杨瑞
黄东亮
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期532-539,共8页
【目的】克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础。【方法】通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA。扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHA...
【目的】克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础。【方法】通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA。扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHANNIBAL构建该片段的hpRNA结构,然后用Not Ⅰ将整个hpRNA结构切下,克隆到双元植物表达载体pART27上,构建该基因的hpRNA表达载体。【结果】通过同源克隆和RACE技术获得SofSPSDⅢ基因全长cDNA序列,该基因全长3252 bp,5′端UTR长度59 bp,3′端UTR长度292 bp,开放阅读框(ORF)长度2895 bp,带有真核生物典型的poly(A)尾巴(GenBank登录号:HQ117935)。该基因编码蛋白含有964个氨基酸,理论分子量108.03kDa,等电点pI=6.66;SofSPSDⅢ与SoSPS2、SbSPS和TaSPS9的氨基酸序列同源性分别为99.0%、98.9%和90.0%。构建获得SofSPSDⅢ基因的hpRNA载体pART-DⅢ-Ri。【结论】成功克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建基hpRNA载体,可为下一步沉默该基因、进而解析该基因的生物学功能奠定基础。
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关键词
甘蔗
蔗糖磷酸合成酶
sofspsdⅲ
克隆
发夹RNA
载体构建
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职称材料
题名
甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建
被引量：
3
1
作者
汪淼
李双喜
桂意云
秦翠鲜
陈忠良
廖青
李杨瑞
黄东亮
机构
广西农业科学院甘蔗研究所/广西甘蔗遗传改良重点实验室/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室
中国农业科学院甘蔗研究中心
广西农业科学院农业资源与环境研究所
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期532-539,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31160301)
"十二五"农村领域国家科技计划项目(2013AA102604-1)
+3 种基金
广西自然科学基金项目(2011GXNSFF018002)
广西农业科学院基本科研业务专项项目(桂农科2012JM06
桂农科2012YZ11
桂农科2013YM41)
文摘
【目的】克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础。【方法】通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA。扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHANNIBAL构建该片段的hpRNA结构,然后用Not Ⅰ将整个hpRNA结构切下,克隆到双元植物表达载体pART27上,构建该基因的hpRNA表达载体。【结果】通过同源克隆和RACE技术获得SofSPSDⅢ基因全长cDNA序列,该基因全长3252 bp,5′端UTR长度59 bp,3′端UTR长度292 bp,开放阅读框(ORF)长度2895 bp,带有真核生物典型的poly(A)尾巴(GenBank登录号:HQ117935)。该基因编码蛋白含有964个氨基酸,理论分子量108.03kDa,等电点pI=6.66;SofSPSDⅢ与SoSPS2、SbSPS和TaSPS9的氨基酸序列同源性分别为99.0%、98.9%和90.0%。构建获得SofSPSDⅢ基因的hpRNA载体pART-DⅢ-Ri。【结论】成功克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建基hpRNA载体,可为下一步沉默该基因、进而解析该基因的生物学功能奠定基础。
关键词
甘蔗
蔗糖磷酸合成酶
sofspsdⅲ
克隆
发夹RNA
载体构建
Keywords
sugarcane
sucrose phosphate synthase
sofspsdⅲ
cloning
hpRNA
vector construction
分类号
S566.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建
汪淼
李双喜
桂意云
秦翠鲜
陈忠良
廖青
李杨瑞
黄东亮
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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