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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量:1
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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页
蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多
关键词 高效液相色谱 反相液相色谱 亲水相互作用色谱 疏水作用色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 蛋白质组学
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体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa的活性 被引量:12
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作者 张倩倩 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期684-690,共7页
发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定L... 发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性。首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间。底物被FXa水解,产生游离的pNA。体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰。该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 抗凝血因子 Xa 低分子量肝素
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Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究 被引量:3
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作者 杜新永 唐晓珍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期303-305,共3页
采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方... 采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。 展开更多
关键词 生姜蛋白酶 SEPHADEX G^50(葡聚糖凝胶) 尺寸排阻层析(sec) 纯化
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灌喂氯化汞大鼠组织中汞结合金属硫蛋白的色谱/质谱联用表征研究 被引量:1
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作者 黄志勇 沈金灿 +2 位作者 庄峙厦 王小如 黎先春 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期641-645,共5页
通过测定大鼠脏器组织中汞的总量、金属硫蛋白(MTs)含量及利用尺寸排阻色谱(SEC)与电感耦合等离子体质谱(ICP MS)联用技术,分析了灌喂HgCl2大鼠脏器组织中汞与MTs的积累量及金属与MTs的结合形态。结果表明,灌喂HgCl2大鼠各脏器中汞的积... 通过测定大鼠脏器组织中汞的总量、金属硫蛋白(MTs)含量及利用尺寸排阻色谱(SEC)与电感耦合等离子体质谱(ICP MS)联用技术,分析了灌喂HgCl2大鼠脏器组织中汞与MTs的积累量及金属与MTs的结合形态。结果表明,灌喂HgCl2大鼠各脏器中汞的积累量显著高于其相应的对照组,特别是在肾、肝和睾丸中汞的含量较高,表明此3个脏器受汞的危害最大。MTs的含量水平说明当大鼠脏器受汞污染时,肌体中的MTs将被大量诱导产生以对重金属进行解毒。通过SEC ICP MS联用技术获得了组织中的金属与MTs的结合形态,其中被汞污染的大鼠的肾脏、肝脏中Hg MTs的诱导产生量比对照组显著增加,与此同时,染汞组织中Cu MTs的组分也相应增加,这进一步表明了MTs在染汞大鼠肾脏中起着对有毒重金属汞的解毒和对营养元素铜的调节作用。 展开更多
关键词 尺寸排阻色谱 电感耦合等离子体质谱 氯化汞 金属硫蛋白 组织 大鼠
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膳食纤维分析方法研究进展 被引量:4
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作者 高瑞萍 赵国华 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期122-127,共6页
膳食纤维作为一种来源丰富的功能性食品原料,具有重要的生理功能——能够降低便秘、结肠癌、肥胖、心血管疾病、糖尿病等慢性病的发病率。文中就膳食纤维分析方法的研究进展进行了综述,介绍了传统的分析方法,以及近红外分析法、尺寸排... 膳食纤维作为一种来源丰富的功能性食品原料,具有重要的生理功能——能够降低便秘、结肠癌、肥胖、心血管疾病、糖尿病等慢性病的发病率。文中就膳食纤维分析方法的研究进展进行了综述,介绍了传统的分析方法,以及近红外分析法、尺寸排阻液相色谱法、高效阴离子色谱法等现代仪器分析方法。 展开更多
关键词 膳食纤维 近红外分析法 尺寸排阻液相色谱法 高效阴离子色谱法
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不同碳源反硝化滤池进出水中溶解性有机物对比分析 被引量:1
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作者 郑晓英 乔露露 +1 位作者 王慰 李魁晓 《净水技术》 CAS 2019年第1期61-67,82,共8页
以某城市污水处理厂二级出水为反硝化滤池进水,利用分子排阻色谱、三维荧光(EEM)及溶解性微生物代谢产物(SMP)测定等不同分析方法对不同碳源反硝化生物滤池进出水中的溶解性有机物(DOM)进行对比研究。结果表明,滤池进水DOM中小分子物质... 以某城市污水处理厂二级出水为反硝化滤池进水,利用分子排阻色谱、三维荧光(EEM)及溶解性微生物代谢产物(SMP)测定等不同分析方法对不同碳源反硝化生物滤池进出水中的溶解性有机物(DOM)进行对比研究。结果表明,滤池进水DOM中小分子物质含量最高,其中分子量为1 kDa的有机物约占总有机物的50%,分子量>10 kDa的大分子有机物约占7%。经过反硝化滤池,出水有机物种类不变,小分子有机物出水浓度下降为进水的50%,说明滤池对小分子物质有一定的去除作用。SMP测定结果表明,滤池进水中主要的SMP物质为腐植酸,约占SMP总含量的70%。在整个过滤周期内,SMP的总量变化不大,反冲洗气水冲和水冲阶段SMP的浓度增加显著。EEM分析表明,滤池正常运行时,进出水中的DOM主要成分为可见腐植质(λ_(ex)/λ_(em)=330/425)和UV腐植质(λ_(ex)/λ_(em)=230/430);反冲洗阶段,DOM含量增加,且出现类蛋白、类色氨酸;整个过滤周期内有机物的含量基本不变,说明反硝化生物滤池不能对腐植酸类物质进行降解。 展开更多
关键词 溶解性有机物 反硝化滤池 分子排阻色谱 三维荧光光谱 溶解性微生物代谢产物 碳源 比较分析
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低分子量硫酸化多糖的体积排阻色谱法分离及其组成定量分析 被引量:3
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作者 吴艳芳 李晓鸽 +2 位作者 车铁军 朱智甲 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期178-183,共6页
建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响。最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.... 建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响。最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.8 mm)串联,流动相100 mmol/L Na2 HPO4-NaH2 PO4(pH 7.0),流速0.5 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,样品质量浓度10 g/L。在最佳的分离条件下,可以将低分子量硫酸化多糖样品中不同糖链数的各个组分分离并对各个组分的分布进行了定量分析。用该方法对美国药典标准品(USP)、商品和实验室制备的低分子量硫酸化多糖糖链数分布进行了定量化比较,证明该方法可用于低分子量硫酸化多糖类药物的组成成分的质量控制。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 低分子量硫酸化多糖 组成分布 质量控制
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分离技术在新型冠状病毒研究和防疫检测中的应用 被引量:2
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作者 李林森 朱超 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期679-685,共7页
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战。随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)相关研究的不断深入,众多分析检测技术相继被应用,推动了病毒检测、疫苗和创新疗法的研发,从而使疫情早日得到控制。分离技... 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战。随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)相关研究的不断深入,众多分析检测技术相继被应用,推动了病毒检测、疫苗和创新疗法的研发,从而使疫情早日得到控制。分离技术作为生命科学、医学、药学领域的关键技术,操作简单,分离效率高,选择性强,在新型冠状病毒的分离、检测、诊疗及防疫中起到不可替代的作用。该文以SARS-CoV-2或COVID-19为关键词在ISI Web of Science中进行主题检索,归纳了2020年度新型冠状病毒相关的研究论文,简要介绍主要的研究方向,并对国际顶级学术期刊Nature,Science,Cell的论文发表情况进行了统计。通过检索影响因子较高的期刊,综述了新型冠状病毒研究中主要应用的分离技术,并从亲和色谱和尺寸排阻色谱、液相色谱、磁珠分离、离心、微纳分离以及电泳6个方面进行说明。综述统计了亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化的病毒相关蛋白,并介绍了其在新型冠状病毒传播、感染机制以及药物筛选中的应用;介绍了液相色谱对病毒候选药物评估以及复杂基质中单一成分的鉴定;介绍了磁珠分离在细胞分离、核酸提取和免疫学检测中的应用;介绍了离心对病毒颗粒、细胞以及血清的分离;介绍了微纳分离结合其他技术以实现病毒蛋白的高灵敏检测;简要介绍了电泳在聚合酶链式反应(PCR)产物分析中的应用。该文综述了2020年度新型冠状病毒研究和防疫检测中分离技术的应用情况,分析了分离技术在新型冠状病毒检测中发挥的作用,旨在为从事分离研究的科研工作者提供一些参考。 展开更多
关键词 分离技术 亲和色谱 尺寸排阻色谱 液相色谱 磁珠分离 离心 微纳分离 电泳 新型冠状病毒
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体积排阻色谱法定量检测9种型别人乳头瘤病毒原液中病毒样颗粒
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作者 龙珍 李晓玉 +6 位作者 李秀玲 柳军凯 聂建辉 李长坤 李月琪 黄涛宏 黄维金 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期424-429,共6页
据统计,5%以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致。HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生。例如,9价HPV疫苗可有效预防90%以上HPV相关癌前病变。人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原。VLP由36... 据统计,5%以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致。HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生。例如,9价HPV疫苗可有效预防90%以上HPV相关癌前病变。人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原。VLP由360份衣壳蛋白L1组成。VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫苗的质量评价至关重要。该文发展了一种以体积排阻色谱(SEC)为基础的9种型别人乳头病毒样颗粒的定量方法。实验优化了包括色谱柱类型、色谱柱孔径、流动相离子强度和流动相pH值在内的色谱条件。经过考察,以SHIMSEN Ankylo SEC-300色谱柱(300 mm×7.8 mm,3μm)为固定相,以含有300 mmol/L NaCl和50 mmol/L磷酸盐(pH 7.0)的缓冲溶液为流动相时,VLP的色谱峰更窄,从而可获得更高的响应和更好的灵敏度,因此选择该色谱条件用于VLP与基质的分离。优化所得的方法具有较宽的线性范围,良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于5.0%)和灵敏度(定量限为4.58~15.24μg/mL)。将方法用于HPV原液中VLP的含量测定,监测VLP的稳定性。结果显示,HPV原液中VLP颗粒不稳定,于4℃放置一周后,VLP含量与生产后立即测得的含量相比存在一定程度的降解。此外,方法还可用于疫苗上清液中游离蛋白质的分析,监测铝佐剂对VLP的吸附情况。被测厂家的铝佐剂可较好的吸附VLP,无明显残余蛋白质检出。与传统的蛋白质定量方法相比,如Folin-酚法(Lowry法),该法具有操作简单、自动化程度高、分析通量高等优点,可实现VLP含量的批量化分析。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 定量 人乳头瘤病毒 病毒样颗粒 疫苗
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尺寸排阻-反相液相色谱-质谱联用技术在大鼠肾脏翻译后修饰蛋白质鉴定中的应用 被引量:2
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作者 李健民 卓越 +2 位作者 张毅达 李娜 伍建林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期87-95,共9页
LC-MS联用技术在蛋白质组学研究中具有重要的作用,但是在复杂的生物体系中,由于样品的高度复杂性和其中蛋白质含量的巨大差异,执行全面且无倾向的蛋白质组分析是一项挑战。因此,在液相色谱分离中采用基于不同原理的色谱分离方法来降低... LC-MS联用技术在蛋白质组学研究中具有重要的作用,但是在复杂的生物体系中,由于样品的高度复杂性和其中蛋白质含量的巨大差异,执行全面且无倾向的蛋白质组分析是一项挑战。因此,在液相色谱分离中采用基于不同原理的色谱分离方法来降低蛋白质样本的复杂度,并对微量蛋白质进行富集,对后续采用质谱方法进行信息的采集和深入分析至关重要。在这里我们开发了一种基于尺寸排阻色谱(SEC)与反相液相色谱(RPLC)结合的新方法来进行复杂体系蛋白质的分离和鉴定,特别是对于微量蛋白质的分析。首先使用SEC对蛋白质进行分离和富集,并酶解成多肽,再通过RPLC-MS联用的方法对酶解后的多肽进行分离和鉴定。结果显示使用上述方法可以有效降低蛋白质样本的复杂度,并有效提高微量蛋白质的鉴定能力,可从大鼠肾脏鉴定出23621个肽段及1345个蛋白质,比常规的二维强阳离子交换-反相液相色谱法(2D SCX-RPLC)鉴定到的肽段及蛋白质分别多出69%及27%。此外,该方法对肾脏翻译后修饰(PTM)蛋白质的鉴定显示出更多的优势,翻译后修饰的多肽鉴定率显著增加,特别是磷酸化肽段的鉴定效率可达到靶向富集策略的水平。在此展示的SEC-RPLC-MS可以更好地了解蛋白质翻译后修饰对肾脏的影响,最终将有助于增加我们对正常的生理性肾功能以及病理过程机制的理解。 展开更多
关键词 蛋白质组学 尺寸排阻色谱 翻译后修饰
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吉妥单抗复兴史
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作者 吴仪 刘睿 吕弋 《大学化学》 CAS 2022年第9期170-178,共9页
采用访谈的形式,以首个上市的抗体偶联药物“吉妥单抗”的传奇历程为明线,靶向药物在化学分子设计和分析检测上的进步为暗线,讲述了抗体偶联药物的发展史。较为全面地介绍了抗体偶联药物的化学结构、设计思路、分析方法与发展前景。
关键词 抗体偶联药物(ADC) 吉妥单抗(Mylotarg) 靶向治疗 抗体药物比(DAR) 尺寸排阻色谱(sec) 疏水作用色谱(HIC)
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过敏物的高效液相排阻色谱测定
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作者 李金华 Vera Pacakova 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期442-444,共3页
采用高效液相排阻色谱对几种过敏物质,树木花粉、寄生虫和猫狗毛萃取物进行分析,测定主要成分的分子量。结果表明,高效液相排阻色谱适合过敏物质的成分分离和分子量测定。
关键词 高效液相排阻色谱 过敏物质 主成分 相对分子质量
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