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肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建
被引量：
2
1
作者
许雅萍
王语涵
+5 位作者
陈婷婷
李南
高萍萍
李玲
王华
孙妩弋
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第3期384-390,共7页
目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠...
目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre^(+/+))小鼠进行交配,F1代Sirt3^(flox/-)/Alb-Cre^(+/-)小鼠再与Sirt3^(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定,F2代基因型为Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3^(Δhep)小鼠,Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3 ^(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达;提取Sirt3^(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白,Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平;HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果成功鉴定出Sirt3^(Δhep)小鼠;免疫荧光及Western blot结果显示,小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P<0.01),而Sirt3^(Δhep)小鼠的心脏、脾脏、肾脏和肺组织中Sirt3表达与对照组相比无明显变化(P>0.05);HE染色结果显示Sirt3^(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠,为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。
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关键词
肝细胞
sirt
3
基因敲除
^
sirt
3
^(
δhep
)
小鼠
CRE-LOXP
基因型鉴定
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题名
肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建
被引量：
2
1
作者
许雅萍
王语涵
陈婷婷
李南
高萍萍
李玲
王华
孙妩弋
机构
安徽医科大学临床药理研究所
安徽医科大学第一附属医院肿瘤科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第3期384-390,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:82370632)
安徽省高校杰出青年科研项目(编号:2023AH020033)
+2 种基金
安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号:2022zhyx-C07)
安徽医科大学科研水平提升计划(编号:2021xkjT016)
安徽医科大学第三附属医院基础与临床合作研究提升计划培育专项(编号:2022sfy014)。
文摘
目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre^(+/+))小鼠进行交配,F1代Sirt3^(flox/-)/Alb-Cre^(+/-)小鼠再与Sirt3^(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定,F2代基因型为Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3^(Δhep)小鼠,Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3 ^(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达;提取Sirt3^(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白,Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平;HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果成功鉴定出Sirt3^(Δhep)小鼠;免疫荧光及Western blot结果显示,小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P<0.01),而Sirt3^(Δhep)小鼠的心脏、脾脏、肾脏和肺组织中Sirt3表达与对照组相比无明显变化(P>0.05);HE染色结果显示Sirt3^(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠,为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。
关键词
肝细胞
sirt
3
基因敲除
^
sirt
3
^(
δhep
)
小鼠
CRE-LOXP
基因型鉴定
Keywords
hep
atocyte
sirt
3
gene knockout
^
sirt
3
^(
δhep
)mice
Cre-loxP
identification of genotype
分类号
R-332 [医药卫生]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建
许雅萍
王语涵
陈婷婷
李南
高萍萍
李玲
王华
孙妩弋
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024
2
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