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SerpinA3N通过抑制Müller细胞炎症减轻糖尿病小鼠视网膜神经损伤的作用机制研究
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作者 孙时磊 吕涛 +1 位作者 左中夫 冯闯 《眼科新进展》 北大核心 2025年第12期949-955,共7页
目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N(SerpinA3N)通过抑制Müller细胞炎症减轻糖尿病小鼠视网膜神经损伤的作用机制。方法将36只(72眼)db/db小鼠随机分为db/db组、db/db+过表达SerpinA3N腺相关病毒(AAV-SerpinA3N)组及db/db+空载体腺相... 目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N(SerpinA3N)通过抑制Müller细胞炎症减轻糖尿病小鼠视网膜神经损伤的作用机制。方法将36只(72眼)db/db小鼠随机分为db/db组、db/db+过表达SerpinA3N腺相关病毒(AAV-SerpinA3N)组及db/db+空载体腺相关病毒SerpinA3N(NC-SerpinA3N)组,每组12只。随机选取12只年龄匹配的同窝健康雄性小鼠作为健康对照组(db/m组)。各组小鼠进行相应处理后4周处死。免疫荧光染色检测小鼠视网膜SerpinA3N和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位情况,HE染色观察小鼠视网膜组织病理变化,TUNEL染色检测小鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡情况,免疫组织化学检测小鼠视网膜GFAP表达,ELISA检测小鼠视网膜组织中炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]含量。将SerpinA3N预测靶基因导入String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI),依评分结果筛选最高分靶点后进行分子对接。Western blot检测小鼠视网膜组织中SerpinA3N、核因子κB(NF-κB)和脾焦点形成病毒前病毒整合癌基因(Spi1)蛋白表达水平。结果免疫荧光染色结果显示,视网膜组织中SerpinA3N与GFAP共定位表达。与db/m组相比,db/db组、db/db+NC-SerpinA3N组和db/db+AAV-SerpinA3N组小鼠视网膜厚度和RGCs数量均减少,TUNEL阳性细胞数量、GFAP阳性相对表达强度及各种炎症因子含量均增加,SerpinA3N蛋白表达水平均减少,NF-κB和Spi1蛋白表达水平均增加(均为P<0.05)。与db/db组相比,db/db+AAV-SerpinA3N组小鼠视网膜厚度和RGCs数量均增加,TUNEL阳性细胞数量、GFAP阳性相对表达强度及各种炎症因子含量均减少,SerpinA3N蛋白表达水平增加,NF-κB和Spi1蛋白表达水平均减少(均为P<0.05)。与db/db+AAV-SerpinA3N组相比,db/db+NC-SerpinA3N组小鼠视网膜厚度和RGCs数量均减少,TUNEL阳性细胞数量、GFAP阳性相对表达强度及各种炎症因子含量均增加,SerpinA3N蛋白表达水平减少,NF-κB和Spi1蛋白表达水平均增加(均为P<0.05)。PPI结果显示,SerpinA3N与Spi1存在相互作用;分子对接结果显示,Spi1与SerpinA3N周围残基可形成氢键。结论过表达SerpinA3N可抑制Müller细胞炎症改善糖尿病小鼠视网膜神经损伤,其机制可能与抑制Spi1/NF-κB信号通路相关。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 MÜLLER细胞 serpina3n 炎症反应
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