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猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:4
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作者 王伟 邹月红 +6 位作者 李雪松 陈欣 郎越坤 田华斌 符芳 李曦 李集临 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期104-107,共4页
为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法... 为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法。试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ型(BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性。本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 Shimen毒株 sybrgreen-ⅰ染料法实时荧光定量pcr
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Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期18-21,共4页
根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能检测出102个拷贝数... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能检测出102个拷贝数的阳性质粒。标准曲线相关系数为0.991,扩增效率为98%。对结核分支杆菌、衣原体、布鲁氏杆菌及牛血液的核酸样品的特异性检测结果均为阴性。结果表明本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法灵敏度高且特异性好,可用于临床检测。 展开更多
关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量pcr SYBR Green染料
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SYBR Green实时荧光定量PCR检测大豆转基因成分 被引量:18
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作者 王小花 李建祥 +3 位作者 王国卿 李新莉 邵景东 傅春玲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期171-176,共6页
采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术,建立了食品中大豆转基因成分的定量检测方法。通过设计特异引物,扩增内源参照基因lectin和转基因靶基因CP4EPSPS,建立两种基因的拷贝数-CT标准曲线,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量,并且通... 采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术,建立了食品中大豆转基因成分的定量检测方法。通过设计特异引物,扩增内源参照基因lectin和转基因靶基因CP4EPSPS,建立两种基因的拷贝数-CT标准曲线,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量,并且通过熔解曲线分析扩增反应特异性。结果表明,lectin和CP4EPSPS基因标准曲线线性关系好,R2值分别为0.9984和0.9953,方法的回收率为95%~110%,检测限为0.01%。本检测方法具有快速、灵敏、准确、特异、高通量等优点,可以作为食品中大豆转基因成分的定量检测方法。 展开更多
关键词 实时定量pcr SYBR Green 荧光染料 转基因大豆
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兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究 被引量:4
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作者 徐红伟 臧荣鑫 +4 位作者 杨具田 卢建雄 蔡勇 石来文 马伟龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期84-88,共5页
通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批... 通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP=-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数(r2)分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。 展开更多
关键词 兰州大尾羊 脂肪酸结合蛋白 SYBR Green 实时荧光定量pcr
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3种qPCR检测柑桔黄龙病的灵敏度研究 被引量:3
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作者 赵培娅 卢占军 +4 位作者 黄爱军 高玉霞 丁鹏 刘映雪 Umbreen Shahzad 《中国南方果树》 北大核心 2016年第2期33-37,共5页
把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLB... 把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLBp探针法可以从稀释105倍的阳性叶片核酸样品(病菌拷贝数约为60个)中检测到病原菌,高于CQULAP探针法和SYBR Green染料法。将3种qPCR检测体系用于赣州安远县、寻乌县和赣县送检的60份田间样品检测,结果发现,HLBp探针法的阳性率为86.7%,CQULAP探针的阳性率为60.0%,SYBR Green染料法的阳性率为68.3%。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 TaqMan水解探针 SYBR Green染料 实时荧光定量pcr 灵敏度
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