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正向和反向SV40 poly(A)信号序列对上游基因表达的影响
1
作者
侯兵
金华君
+2 位作者
刘文超
钱其军
吕赛群
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期630-633,共4页
目的研究正向和反向SV40poly(A)信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly(A)信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Lu...
目的研究正向和反向SV40poly(A)信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly(A)信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly(A)信号序列,得到2个带有不同SV40poly(A)信号的载体Dual-Luc2、Dual-Luc3。将其分别转染常用的3类细胞株293、L-02和HeLa细胞,应用双荧光素酶标仪和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定报告基因(F-Luc)的表达量,以R-Luc基因的表达量作对照。结果成功构建携带正向和反向互补SV40poly(A)序列的双荧光素酶载体Dual-Luc2、Dual-Luc3;双荧光素酶标仪检测表明,在293细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为3.25±0.43、3.03±0.14,差异无统计学意义(P>0.05);在L-02细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为6.16±0.39、3.83±0.39,差异有统计学意义(P<0.05);在HeLa细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为1.21±0.10、0.66±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测与荧光素酶检测结果一致。结论不同细胞中poly(A)信号序列对上游基因的调控作用存在差异;poly(A)信号对上游基因的调控作用主要发生于转录水平。
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关键词
sv
40
poly
(A)加尾信号序列
基因表达
双荧光素酶报告系统
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职称材料
题名
正向和反向SV40 poly(A)信号序列对上游基因表达的影响
1
作者
侯兵
金华君
刘文超
钱其军
吕赛群
机构
第四军医大学西京医院肿瘤科
第二军医大学长海医院预防保健科
第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期630-633,共4页
基金
国家高技术研究发展计划重点项目("863计划"
2007AA021108)~~
文摘
目的研究正向和反向SV40poly(A)信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly(A)信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly(A)信号序列,得到2个带有不同SV40poly(A)信号的载体Dual-Luc2、Dual-Luc3。将其分别转染常用的3类细胞株293、L-02和HeLa细胞,应用双荧光素酶标仪和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定报告基因(F-Luc)的表达量,以R-Luc基因的表达量作对照。结果成功构建携带正向和反向互补SV40poly(A)序列的双荧光素酶载体Dual-Luc2、Dual-Luc3;双荧光素酶标仪检测表明,在293细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为3.25±0.43、3.03±0.14,差异无统计学意义(P>0.05);在L-02细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为6.16±0.39、3.83±0.39,差异有统计学意义(P<0.05);在HeLa细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为1.21±0.10、0.66±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测与荧光素酶检测结果一致。结论不同细胞中poly(A)信号序列对上游基因的调控作用存在差异;poly(A)信号对上游基因的调控作用主要发生于转录水平。
关键词
sv
40
poly
(A)加尾信号序列
基因表达
双荧光素酶报告系统
Keywords
sv40 poly（a） signal
gene expression
dual luciferase reporter system
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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1
正向和反向SV40 poly(A)信号序列对上游基因表达的影响
侯兵
金华君
刘文超
钱其军
吕赛群
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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