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成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化
被引量：
2
1
作者
万晓珊
赵宏鑫
+4 位作者
张耀方
张海淼
邵明龙
王会岩
李校堃
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期491-495,共5页
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变...
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。
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关键词
成纤维细胞生长因子-21
突变体
sumo融合表达
纯化
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职称材料
题名
成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化
被引量：
2
1
作者
万晓珊
赵宏鑫
张耀方
张海淼
邵明龙
王会岩
李校堃
机构
吉林农业大学生命科学学院
吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心
温州医学院药学院
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期491-495,共5页
基金
吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20080712)
吉林省长春市净月科技三项费用项目资助课题(2008B003)
浙江省温州市科技计划项目资助课题(Y20090015)
文摘
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。
关键词
成纤维细胞生长因子-21
突变体
sumo融合表达
纯化
Keywords
fibroblast growth factor-21
mutant
sumo
fusion expression
purification
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化
万晓珊
赵宏鑫
张耀方
张海淼
邵明龙
王会岩
李校堃
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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