石蒜SRAP-PCR扩增体系的建立与优化 被引量：34

1

作者 袁菊红 权俊萍 +3 位作者 胡绵好 孙视 彭峰 夏冰 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2007年第4期1-6,共6页

以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,... 以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,含20ng模板DNA、3.0mmol·L-1Mg2+、0.20mmol·L-1dNTPs、0.4μmol·L-1引物和0.50UTaq DNA聚合酶。运用优化体系对9个石蒜居群的基因组DNA进行扩增,获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明SRAP-PCR可用于石蒜属植物的亲缘关系、系统演化、物种鉴别和遗传多样性等领域的研究。 展开更多

关键词 石蒜 srap—PCR 扩增体系优化 遗传多样性

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香菇SRAP扩增体系的建立与优化 被引量：17

2

作者 付立忠 魏海龙 +3 位作者 李海波 吴庆其 吴大丰 吴学谦 《食用菌学报》 2006年第4期10-20,共11页

为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)... 为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)法提取菌丝体基因组DNA,用琼脂糖检测扩增产物,筛选优化了SRAP扩增条件。可用于香菇SRAP分析的最佳PCR条件为20μL PCR反应体系中,模板DNA25ng,Buffer l×,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U。优化后的SRAP体系目标条带增多,重现性好。 展开更多

关键词 香菇 分子标记 扩增体系优化 srap

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小麦基因组SRAP扩增体系的初步研究 被引量：56

3

作者 武志朴 杨文香 +1 位作者 刘大群 张汀 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期66-69,共4页

对影响SRAP扩增结果的各种因素包括DNA、引物、dNTPMixture、TaqDNA聚合酶的浓度及变性、复性、延伸的时间及温度进行了摸索。获得了能够稳定扩增小麦基因组的体系:20μL体系中DNA25ng,dNTP188mmol/L,TaqDNA聚合酶0 75U,引物25ng。扩增... 对影响SRAP扩增结果的各种因素包括DNA、引物、dNTPMixture、TaqDNA聚合酶的浓度及变性、复性、延伸的时间及温度进行了摸索。获得了能够稳定扩增小麦基因组的体系:20μL体系中DNA25ng,dNTP188mmol/L,TaqDNA聚合酶0 75U,引物25ng。扩增程序为:94℃1min,37℃1min,72℃10sec,5个循环;94℃1min,50℃1min,72℃10sec,35个循环;72℃1min。 展开更多

关键词 srap 小麦基因组 扩增体系

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怀地黄SRAP扩增体系的建立与引物的筛选 被引量：6

4

作者 周春娥 谷凤平 +2 位作者 路淑霞 段红英 周延清 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期256-260,273,共6页

为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量... 为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量20ng/25μL、2.5mmol/LMg2+、0.32μmol/L的上下游引物、0.30μmol/L的dNTP以及2.5UTaq酶,并利用确定的体系从88个引物组合中筛选出12对适合怀地黄SRAP-PCR反应的引物。 展开更多

关键词 怀地黄 分子标记 扩增体系优化 srap 引物的筛选

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小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系的优化 被引量：4

5

作者 李剑峰 张跃强 +4 位作者 樊哲儒 王岩军 王浩 曲延英 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期489-494,共6页

【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯... 【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)1.0μLd、NTP(2.5 mM)1.8μL、Mg2+(25 mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)0.6μL、dNTP(2.5 mM)2.0μL、Mg2+(25 mM)1.6μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcriptderived fragments)。【结论】试验通过对引物、dNTP、Mg2+、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 小麦叶片 cDNA—AFLP 预扩增 选择性扩增 体系优化

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马褂木ISSR-PCR扩增体系的优化 被引量：4

6

作者 石晓蒙 谭飞燕 +2 位作者 黄寿先 蒙奕奕 黄家华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1087-1091,共5页

【目的】建立稳定的马褂木ISSR-PCR扩增体系,为马褂木种群ISSR多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验对ISSR-PCR扩增体系中的MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、DNA模板用量和退火温度等主要因素进行筛选优化。【结果】... 【目的】建立稳定的马褂木ISSR-PCR扩增体系,为马褂木种群ISSR多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验对ISSR-PCR扩增体系中的MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、DNA模板用量和退火温度等主要因素进行筛选优化。【结果】采用试剂盒方法提取马褂木叶片DNA的效果优于改良CTAB法,最优PCR反应体系为:总体积20.0μL中含有10×Buffer2.0μL、MgCl21.8mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、引物0.5μmol/L、TaqDNA聚合酶1.00U、DNA模板60ng、退火温度59.1℃。【结论】优化后的马褂木ISSR-PCR扩增体系能够扩增获得清晰、稳定的条带,可满足马褂木种群ISSR多样性分析的要求。 展开更多

关键词 马褂木 ISSR 扩增体系 优化

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基于闭合哑铃介导等温扩增可视化检测大豆花叶病毒SC15方法的建立及应用

7

作者 殷丛丛 李睿琦 +5 位作者 岳霈尧 李晨 牛景萍 赵晋忠 杜维俊 岳爱琴 《作物学报》 北大核心 2025年第5期1248-1260,共13页

大豆花叶病是一种由大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)引起的最为普遍和严重的全球性大豆病害,可导致大豆产量和种子品质大幅降低,我国大豆产区均受其影响。在我国, SMV被划分为22个株系(SC1~SC22),其中SMV-SC15毒性最强。但是,... 大豆花叶病是一种由大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)引起的最为普遍和严重的全球性大豆病害,可导致大豆产量和种子品质大幅降低,我国大豆产区均受其影响。在我国, SMV被划分为22个株系(SC1~SC22),其中SMV-SC15毒性最强。但是,目前尚无有效的早期诊断方法,本研究基于闭合哑铃介导等温扩增(closeddumbbell mediated isothermal amplification, CDA),建立了一种可视化快速检测SMV-SC15的方法,实现了对SC15的高效特异检测与鉴定。根据SMV不同株系CP基因组序列的多态性设计了CDA方法的引物对(MF/MR),建立并优化了检测SMV-SC15的反应体系,确定了最佳反应条件:反应温度63℃、Bst DNA聚合酶用量4.8 U以及引物浓度0.6μmol L^(-1)。以溴百里酚蓝(BTB)和SYBR Green Ⅰ为指示剂实现了检测结果的可视化。对比分析CDA体系和加环引物CDA体系(L-CDA)检测SMV-SC15的稳定性、特异性和灵敏度发现, L-CDA体系实时荧光扩增曲线达到阈值的时间比CDA缩短5~6 min,其最低检出浓度低至1×10^(–4) ngμL^(-1),灵敏度为CDA体系的10倍。本研究通过L-CDA体系检测了200份不同品种的田间大豆叶片样本,显色结果对应于RT-qPCR检测的Ct值约为32,其灵敏度和特异性分别为100%和96.3%。 展开更多

关键词 大豆花叶病毒 可视化检测 闭合哑铃介导等温扩增 核酸检测 体系优化

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水稻叶片cDNA-AFLP选择性扩增反应体系的优化 被引量：10

8

作者 曹蕾 林明 +4 位作者 王育娜 许先松 赖燕 徐波 何水林 《山地农业生物学报》 2008年第3期189-194,共6页

在水稻Oryza sativa叶片响应稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis取食后的cDNA-AFLP试验中,对25μL体系中预扩增和选择性扩增的引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度及TaqDNA聚合酶用量4种反应条件影响因子进行不同梯度的优化研究。结果表明,... 在水稻Oryza sativa叶片响应稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis取食后的cDNA-AFLP试验中,对25μL体系中预扩增和选择性扩增的引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度及TaqDNA聚合酶用量4种反应条件影响因子进行不同梯度的优化研究。结果表明,PCR选择性扩增反应时,总反应液25μL体系中引物浓度为0.2μmol/L、dNTP浓度为0.2mmol/L、镁离子浓度为2.0mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为13.336n kat/25μL时,可得到更多鲜明可辨的TDFs。 展开更多

关键词 水稻 选择性扩增 体系优化 CDNA-AFLP

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松属部分种的ISSR-PCR扩增体系优化及鉴别 被引量：1

9

作者 赵虎 王玉 +1 位作者 王晓燊 洑香香 《林业科技开发》 2010年第5期64-67,共4页

对松属部分种的ISSR-PCR的反应体系及扩增程序进行优化,并进行种质鉴别。优化的10μL扩增体系为:Taq酶0.5 U,10×Buffer(Mg2+free),dNTP 0.35 mmol/L,Mg2+2.25 mmol/L,20ng DNA,0.8μL引物。扩增程序为:94℃预变性7 min,然后进行40... 对松属部分种的ISSR-PCR的反应体系及扩增程序进行优化,并进行种质鉴别。优化的10μL扩增体系为:Taq酶0.5 U,10×Buffer(Mg2+free),dNTP 0.35 mmol/L,Mg2+2.25 mmol/L,20ng DNA,0.8μL引物。扩增程序为:94℃预变性7 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,56℃退火45 s,72℃延伸2 min;最后72℃延伸7 min,4℃保温。从100条UBC系列引物中筛选出5条特异性强、稳定性好的引物UBC823、UBC840、UBC841、UBC855、UBC873,扩增的特异性条带可对松属的7个种进行鉴别。 展开更多

关键词 松属 ISSR-PCR 扩增体系优化 鉴别

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薏苡ISSR-PCR扩增体系的优化 被引量：2

10

作者 王盈 谈探 +2 位作者 李钧敏 俞旭平 金则新 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第6期233-235,共3页

采用改进的SDS法提取薏苡种子胚基因组DNA,测试薏苡ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试Mg2+、dNTP、BSA、引物浓度及模板DNA、TaqDNA聚合酶用量等6个因素对ISSR-PCR扩增结果的影响。结果显示,10μl PCR反应体积中包括:1×... 采用改进的SDS法提取薏苡种子胚基因组DNA,测试薏苡ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试Mg2+、dNTP、BSA、引物浓度及模板DNA、TaqDNA聚合酶用量等6个因素对ISSR-PCR扩增结果的影响。结果显示,10μl PCR反应体积中包括:1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl pH值9.0,50 mmol/LKCl,0.1%Triton X-100),1.75 mmol/L Mg2+,0.6 mmol/L dNTP,1 mg/ml BSA,10 ng模板DNA,20 pmol引物,0.45 UTaq酶。 展开更多

关键词 薏苡 ISSR PCR扩增 反应体系 优化

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香蕉基因组SRAP反应体系的建立和优化 被引量：7

11

作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 魏守兴 谢子四 陈业渊 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期352-356,共5页

为建立并优化适于香蕉(Musaspp.)SRAP分析的扩增体系,对影响香蕉SRAP反应的dNTP、Mg2+、模板DNA、引物浓度和Taq酶用量等因素进行优化。确定的优化扩增体系为Mg2+2.5mmol.L-1,dNTP250μmol.L-1,Taq酶1.0U,引物0.5μmol.L-1,模板DNA20ng,... 为建立并优化适于香蕉(Musaspp.)SRAP分析的扩增体系,对影响香蕉SRAP反应的dNTP、Mg2+、模板DNA、引物浓度和Taq酶用量等因素进行优化。确定的优化扩增体系为Mg2+2.5mmol.L-1,dNTP250μmol.L-1,Taq酶1.0U,引物0.5μmol.L-1,模板DNA20ng,10×PCRbuffer2.5μL,在此条件下SRAP扩增香蕉基因组DNA条带清晰,多态性丰富。该体系在29个香蕉基因组中获得较好的扩增结果,可望在香蕉植物起源和进化研究中应用。 展开更多

关键词 香蕉 srap 扩增条件优化

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香菇SRAP反应体系的优化 被引量：17

12

作者 应正河 吴小平 +4 位作者 谢宝贵 陈丽娜 卢启泉 高巍 孙淑静 《食用菌学报》 2006年第4期1-9,共9页

为建立并优化适于香菇(Lentinulaedodes)SRAP(Sequence-related amplified polymorphism,相关序列扩增多态性)分析的扩增体系,通过单因子实验分别研究了dNTP、Mg2+、模板DNA、引物浓度和Taq酶用量对香菇SRAP反应的影响。试验获得的25μ... 为建立并优化适于香菇(Lentinulaedodes)SRAP(Sequence-related amplified polymorphism,相关序列扩增多态性)分析的扩增体系,通过单因子实验分别研究了dNTP、Mg2+、模板DNA、引物浓度和Taq酶用量对香菇SRAP反应的影响。试验获得的25μL优化扩增体系为Mg2+2.5mmol/L,dNTPs250μmol/L,Taq酶1.5U,引物0.5μmol/L,模板DNA20ng,10×PCR buffer2.5μL,此条件下SRAP扩增香菇菌丝DNA条带清晰,多态性丰富。 展开更多

关键词 香菇 srap 扩增条件优化

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均匀设计优化杨属的SRAP-PCR反应体系 被引量：7

13

作者 郭丽琴 卫尊征 +3 位作者 张金凤 王欢 李贤 郭军 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期34-38,共5页

采用均匀设计方法,对影响杨属SRAP-PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板浓度等因素分别进行了U16(45)和U12(35)两轮优化,建立了适用于杨属的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,MgCl23.5mmol/L、dNTPs0.20mmol/L、引物0... 采用均匀设计方法,对影响杨属SRAP-PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板浓度等因素分别进行了U16(45)和U12(35)两轮优化,建立了适用于杨属的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,MgCl23.5mmol/L、dNTPs0.20mmol/L、引物0.44μmol/L、TaqDNA聚合酶1.50U、模板浓度28ng/L为最适条件。在此基础上又对退火温度进行了摸索,结果发现,扩增结果对退火温度变化不敏感。最后运用优化体系对杨属3派10个种共16个单株的DNA进行扩增验证,结果获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明这一优化的SRAP-PCR反应体系可用于杨属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。 展开更多

关键词 杨属 均匀设计 srap--PCR 扩增体系优化

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莴苣属蔬菜资源SRAP标记PCR体系的构建与优化 被引量：9

14

作者 刘丽娟 刘灶长 +1 位作者 陈海荣 罗利军 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第2期157-162,共6页

以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素,包括Mg2+、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等,建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系:在20μl反应体系中,模板DNA为50ng,Mg2+浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为0.2mmol/L,引物浓度... 以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素,包括Mg2+、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等,建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系:在20μl反应体系中,模板DNA为50ng,Mg2+浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为0.2mmol/L,引物浓度为0.75μmol/L,Taq酶用量为1U。适宜的扩增程序为94℃5min;94℃1min,35℃1min,72℃1min,5个循环;94℃1min,51℃1min,72℃1min,30个循环;72℃7min。对体系的验证结果表明本研究建立的莴苣SRAP体系重复性好、分辨率高、多态性丰富,在莴苣属蔬菜种质资源评价、分子标记辅助选择育种等多方面都有重要作用。 展开更多

关键词 莴苣 srap PCR扩增体系

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橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化 被引量：11

15

作者 聂珍素 赖钟雄 +5 位作者 潘东明 郭玉琼 陈义挺 邓传远 陈桂信 吴金寿 《亚热带农业研究》 2005年第2期6-8,共3页

以橄榄叶片为材料,进行橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化。试验表明,采用改良的SDS法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。在25μL反应体积中,RAPD反应的优化体系为:18.5μLddH2O,0.5μLdNTP,2.5μlBuffer,1μL引物,0.5μLDNA模板,2... 以橄榄叶片为材料,进行橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化。试验表明,采用改良的SDS法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。在25μL反应体积中,RAPD反应的优化体系为:18.5μLddH2O,0.5μLdNTP,2.5μlBuffer,1μL引物,0.5μLDNA模板,2μLTaqDNA聚合酶。 展开更多

关键词 基因组DNA提取 RAPD扩增 条件优化 橄榄 TAQDNA聚合酶 RAPD分析 RAPD反应 DNA模板 SDS法 反应体积 优化体系

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怀地黄SRAP分子标记优化体系的建立 被引量：3

16

作者 周春娥 谷凤平 +2 位作者 路淑霞 段红英 周延清 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第3期536-540,共5页

为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合... 为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合怀地黄SRAP反应的体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA20ng、2.5mmol·L-1Mg2+、0.32μmol·L-1的上下游引物、0.30mmol·L-1的dNTPs以及2.5UTaq酶。并利用该反应体系对怀地黄22个不同品种进行了SRAP反应,发现不同品种间的DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于怀地黄的分子标记研究。 展开更多

关键词 怀地黄 相关序列扩增多态性分子标记 扩增体系优化

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分蘖洋葱ISSR-PCR扩增体系的建立 被引量：1

17

作者 刘淑芹 吴凤芝 +1 位作者 刘守伟 潘凯 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期130-135,共6页

以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Bu... 以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Buffer 3μL,Mg2(+2.5 mmol.L-1)2μL,dNTPs(2.5 mmol.L-1)3μL,引物(5 mmol.L-1)3μL,Taq酶(5 U.μL-1)0.4μL,退火温度为56℃时,分蘖洋葱ISSR-PCR扩增获得最佳效果,初步建立分蘖洋葱叶片最佳ISSR-PCR扩增体系,为ISSR分子标记技术应用于分蘖洋葱种群遗传多样性分析、遗传图谱构建、核心种质资源保存利用等奠定分子生物学的理论基础和技术支撑。 展开更多

关键词 分蘖洋葱 ISSR-PCR 扩增体系优化

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八仙花SRAP反应体系的建立与优化 被引量：8

18

作者 李艳香 李达 +2 位作者 李炎林 彭尽晖 朱霁琪 《湖南农业科学》 2008年第6期14-16,45,共4页

为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25... 为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DNA60ng、Mg2+2.0mmol/L、dNTPs0.7mmol/L、Taq酶0.5U、引物0.7μmol/L×2、10×PCRBuffer2.5μl,该反应条件下八仙花SRAP扩增条带清晰,多态性丰富。 展开更多

关键词 八仙花 srap 扩增体系优化

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油莎豆SRAP-PCR体系优化及遗传多样性分析 被引量：3

19

作者 赵琦琦 郭玉静 +3 位作者 于梦斐 王颖 高文伟 张斌 《山东农业科学》 北大核心 2022年第8期31-38,共8页

以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分... 以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分析。结果表明,混合酶体积对SRAP-PCR反应体系影响最大,引物浓度影响最小;油莎豆SRAP-PCR总体系为15μL时,引物浓度为0.5μmol/L、混合酶体积为10.5μmol/L、DNA模板含量为80 ng的扩增效果最佳。利用最佳扩增体系,从102对引物组合中筛选出30对多态性引物,共扩增出289个多态性位点,平均多态性比率为92.82%。进一步对16份油莎豆种质的遗传多样性进行分析,结果显示其遗传一致度范围为0.60~0.93,遗传距离范围为0.07~0.40,表明供试油莎豆种质资源的遗传背景差异较小;UPGMA聚类结果表明,油莎豆种质资源亲缘关系受油莎豆品种特性和地域的影响。本研究结果可为油莎豆种质资源的多样性评价及鉴定提供方法和技术,并为其遗传育种提供依据。 展开更多

关键词 油莎豆 srap-PCR 扩增体系优化 遗传多样性

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南方红豆杉SSR-PCR扩增体系的建立 被引量：2

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作者 徐璕 张合平 《广西林业科学》 2015年第1期54-58,共5页

为了建立适合于南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)种群遗传多样性分析的SSR-PCR扩增体系,在单因素试验确定各因素浓度范围的基础上,采用正交试验设计,对影响南方红豆杉SSR-PCR扩增的主要因素浓度进行了筛选。结果表明,南方红豆杉S... 为了建立适合于南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)种群遗传多样性分析的SSR-PCR扩增体系,在单因素试验确定各因素浓度范围的基础上,采用正交试验设计,对影响南方红豆杉SSR-PCR扩增的主要因素浓度进行了筛选。结果表明,南方红豆杉SSR-PCR最佳反应扩增体系为:20μL反应体系中含有1.50mmol/L Mg2++0.2 mmol/L d NTP+0.5U Taq DNA聚合酶+0.3μmol/L引物+75 ng DNA模板。 展开更多

关键词 南方红豆杉 SSR-PCR扩增 反应体系 优化

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