体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响 被引量：2

1

作者 邵丽洁 江子丰 刘荣玉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期387-391,共5页

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦... 目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。 展开更多

关键词 脱落酸 肺腺癌细胞系Spc-A1 自噬 BECLIN-1 LC3

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蛇葡萄素钠协同卡铂抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖 被引量：4

2

作者 徐明丽 韩伟 吴勇杰 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2011年第8期890-894,共5页

目的:探讨蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及其与卡铂(CBP)合用对SPC-A-1人肺腺癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法:采用MTT比色法测定AMP-Na单用及其与CBP合用对SPC-A-1细胞的体外细胞毒活性;用流式细胞仪分析AMP-Na单用及与卡铂合用后对S... 目的:探讨蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及其与卡铂(CBP)合用对SPC-A-1人肺腺癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法:采用MTT比色法测定AMP-Na单用及其与CBP合用对SPC-A-1细胞的体外细胞毒活性;用流式细胞仪分析AMP-Na单用及与卡铂合用后对SPC-A-1细胞凋亡的影响。结果:体外细胞毒实验和流式细胞仪结果表明,AMP-Na对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用具有明显的量效关系,与CBP联用后凋亡率较卡铂单用明显上升,有协同抑制作用。结论:AMP-Na单用能够显著抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞的增殖,与卡铂合用可以增强卡铂的活性,协同抑制SPC-A-1细胞的增殖;AMP-Na可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 蛇葡萄素钠 卡铂 人肺腺癌spc-a-1细胞 细胞凋亡

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低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用 被引量：2

3

作者 贺承健 邓立普 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第33期3833-3836,共4页

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和H... 目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达;HIF-2α与HIF-1α的mRNA和蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同,翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用;低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1Α 低氧诱导因子-2α 肺腺癌细胞 细胞低氧

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RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用 被引量：1

4

作者 邓征浩 周建华 +2 位作者 曹慧秋 沈明 文继舫 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期193-196,共4页

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernbl... 目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P<0. 05),细胞周期中G1 /G0期比例明显增加(P<0. 05),而S期比例减少;转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低(P<0. 05),而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论:RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。 展开更多

关键词 基因转染 细胞株A549 RASSF1A基因 抑制作用 人肺腺癌 肺腺癌细胞A549 增殖 blotting Western pcDNA3 真核表达重组体 脂质体转染技术 四甲基偶氮唑盐 流式细胞仪分析 A549细胞系 RT-PCR mRNA表达 P65 生物学行为 B亚单位

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内皮素-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响

5

作者 叶倩君 周娟 张为民 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第1期1-4,共4页

背景与目的内皮素-1（endothelin-1,ET-1）是强大的细胞促有丝分裂素,在一些肿瘤细胞生长和肿瘤血管新生中起重要作用。本研究的目的是探讨ET-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法采用细胞体外培养技术,四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimet... 背景与目的内皮素-1（endothelin-1,ET-1）是强大的细胞促有丝分裂素,在一些肿瘤细胞生长和肿瘤血管新生中起重要作用。本研究的目的是探讨ET-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法采用细胞体外培养技术,四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]显色分光光度法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞周期。结果ET-1（1×10^-15-1×10^-9mol/L）具有促进SPC-A1细胞增殖作用,作用呈浓度依赖性,在1×10-11mol/L时作用呈饱和状态;ET-1（1×10^-10mol/L）促SPC-A1细胞增殖作用可被内皮素受体A（endothelin receptor A,ETA）拮抗剂BQ123（1×10^-7mol/L）阻断,但不受内皮素受体B（endothelin receptor B,ETB）拮抗剂BQ788（1×10^-7mol/L）影响;用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）（0.4mmol/L）去除细胞外钙离子及电压依赖型Ca2＋通道阻滞剂硝苯地平（nifedipine,1μmol/L）能抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖。ET-1（1×10^-10mol/L）对SPC-A1细胞周期没有显著影响。结论ET-1为促SPC-A1细胞生长因子,ET-1促肺腺癌细胞生长的作用主要通过SPC-A1细胞表面ETA受体实现,细胞外钙离子通过电压依赖型Ca^2＋通道内流在ET-1促肺腺癌细胞生长中起重要作用。 展开更多

关键词 内皮素-1 肺腺癌细胞 细胞增殖

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缺氧对肺腺癌细胞A549MMP-9、TIMP-1表达的影响

6

作者 徐丹 文富强 +3 位作者 汪涛 应斌武 王可 胡晓波 《实用医学杂志》 CAS 2008年第1期7-9,共3页

目的:研究缺氧条件下基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化规律。方法:人肺腺癌细胞A549常氧/缺氧培养,酶谱法测定培养基中MMP-9酶活性,免疫细胞化学、免疫印迹技术分别检测MMP-9及TIMP-1原位蛋白... 目的:研究缺氧条件下基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化规律。方法:人肺腺癌细胞A549常氧/缺氧培养,酶谱法测定培养基中MMP-9酶活性,免疫细胞化学、免疫印迹技术分别检测MMP-9及TIMP-1原位蛋白及分泌蛋白表达量。结果:MMP-9、TIMP-1的阳性染色颗粒主要呈胞浆着色。缺氧48h内,MMP-9酶活性、原位蛋白及分泌蛋白表达均无显著变化;随缺氧时间延长,TIMP-1原位蛋白及分泌蛋白表达均有升高趋势(P<0.05)。结论:缺氧24h内MMP-9表达不增加,可能与癌基因、激酶活化引发的细胞筛选有关;TIMP-1在缺氧状态下表达增多,可能与其多种功能相关。 展开更多

关键词 缺氧 明胶酶B 肺腺癌细胞 金属蛋白酶组织抑制因子-1

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呼吸道合胞病毒M_(2-1)基因转染人肺腺癌细胞(PAa)后的电镜观察

7

作者 陈杭薇 夏永宏 +2 位作者 邬光惠 尤兰华 张利群 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期519-522,共4页

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2 1基因致癌的超微形态学依据。方法:应用超薄切片电镜技术对比观察RSVM2 1基因转染前后人肺腺癌细胞(PAa)的超微结构改变。结果:转染后肺腺癌细胞(PAa M2 1)呈现低分化超微结构特征:细胞膜表面微绒毛减... 目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2 1基因致癌的超微形态学依据。方法:应用超薄切片电镜技术对比观察RSVM2 1基因转染前后人肺腺癌细胞(PAa)的超微结构改变。结果:转染后肺腺癌细胞(PAa M2 1)呈现低分化超微结构特征:细胞膜表面微绒毛减少或缺如;细胞核明显增大,核浆比例增大,多见畸形核和双核,并可见巨大或多个核仁。核膜不规则,呈锯齿状或佛手状,核质富含常染色质。癌细胞胞浆少,以游离核糖体为主,其他细胞器稀少。偶见癌细胞凋亡。未转染肺腺癌细胞(PAa)呈现高分化超微结构特征:细胞表面有许多微绒毛;胞浆内有较多发育完好的细胞器。结论:RSVM2 1基因的转染和表达可诱导和促进PAa细胞去分化,其变化的分子机理有待进一步探讨。 展开更多

关键词 转染 M2-1基因 人肺腺癌细胞 呼吸道合胞病毒 胞浆 RSV PA 细胞器 超微形态 超微结构特征

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过表达水通道蛋白1(AQP1)促进A549人肺腺癌细胞的增殖并抑制β联蛋白(β-catenin)磷酸化 被引量：2

8

作者 王会峰 董辉 +2 位作者 吴媛媛 乔立娇 金向明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期413-418,共6页

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因的过表达对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法构建和包装AQP1慢病毒过表达载体,感染A549细胞,实时荧光定量PCR检测AQP1 mRNA水平,Western blot法检测AQP1蛋白水平。在A549细胞过表达AQP1后,噻唑... 目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因的过表达对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法构建和包装AQP1慢病毒过表达载体,感染A549细胞,实时荧光定量PCR检测AQP1 mRNA水平,Western blot法检测AQP1蛋白水平。在A549细胞过表达AQP1后,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,并以Western blot法检测细胞β联蛋白(β-catenin)磷酸化水平。结果成功构建AQP1过表达慢病毒载体,病毒滴度为(2.87±0.54)×10~8 IU/mL;慢病毒载体感染A549细胞后,细胞AQP1 mRNA和蛋白水平显著增加;细胞增殖能力显著提高,细胞克隆形成数显著上升;β-catenin总蛋白水平增加,但β-catenin磷酸化显著降低。结论过表达AQP1促进A549细胞增殖并抑制β-catenin的磷酸化。 展开更多

关键词 水通道蛋白1(AQP1) 细胞增殖 A549人肺腺癌细胞

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重组人白细胞介素-4对人肺腺癌细胞SPC-A_1/TAX化疗增敏研究

9

作者 林安华 李羲 《中国肺癌杂志》 CAS 2005年第3期233-235,共3页

关键词 人肺腺癌细胞SPC-A1 白细胞介素-4 化疗增敏 细胞多药耐药性 TAX 重组人 rhIL-4 化疗药物 癌细胞分化 上升趋势 综合治疗 化疗失败 逆转方法 产生机制 肿瘤细胞 肺癌 死亡率 发病率 可替代 针对性 敏感性 MDR 严重 临床

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水通道蛋白在人肺腺癌细胞株中的表达和意义 被引量：8

10

作者 陈杰 白春学 +2 位作者 张敏 任振义 胡洁 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期199-201,共3页

目的　探讨水通道蛋白在人肺腺癌细胞株SPC A 1中的表达及其意义。方法　利用半定量逆转录PCR和免疫组织化学染色分析水通道蛋白 1、3、4、5在SPC A 1细胞中的表达。结果　免疫组化染色显示水通道蛋白 3和水通道蛋白 5在SPC A 1细胞膜... 目的　探讨水通道蛋白在人肺腺癌细胞株SPC A 1中的表达及其意义。方法　利用半定量逆转录PCR和免疫组织化学染色分析水通道蛋白 1、3、4、5在SPC A 1细胞中的表达。结果　免疫组化染色显示水通道蛋白 3和水通道蛋白 5在SPC A 1细胞膜上呈阳性染色 ,而水通道蛋白 1和水通道蛋白 4未见阳性染色。半定量逆转录PCR结果显示SPC A 1细胞水通道蛋白 3和水通道蛋白 5mRNA表达阳性 ,后者表达水平显著高于前者 (P <0 .0 1) ;水通道蛋白 1和水通道蛋白 4mRNA未见表达。结论　人肺腺癌细胞株SPC A 1中有水通道蛋白 3和水通道蛋白 5表达 。 展开更多

关键词 水通道蛋白 人肺腺癌细胞 spc-a-1细胞

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RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究 被引量：3

11

作者 王春梅 李钰 +3 位作者 高凌寒 刘芳莉 傅松滨 李璞 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第5期326-329,共4页

目的　探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法　采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转... 目的　探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法　采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果　RAB5A正义表达载体PcDNA3.1 RAB5A转染的AGZY83 a重建基底膜侵袭能力明显增强 ,统计学意义显著 (P <0 .0 0 0 5 ) ,细胞趋化性运动能力显著增高 (P <0 .0 0 0 5 ) ,对基底膜成分的粘附能力增大 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3 AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降 (P <0 .0 0 2 5 ) ,趋化性运动能力显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,对基底膜成分粘附能力降低 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83 a的变化。结论　RAB5A在肺腺癌侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 1RAB5A 人肺腺癌细胞系 肿瘤转移 反义RNA

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OrfA与E2F5的互作关系及其对肺腺癌细胞增殖的影响

12

作者 穆璐 张潇筠 +3 位作者 韩宝泉 陈昱光 张智英 徐坤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第12期11-17,27,共8页

【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A... 【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A375恶性黑色素瘤细胞、SMMC-7721肝癌细胞和SPC-A-1肺腺癌细胞中E2F5的表达量;通过酵母双杂交和免疫共沉淀试验,验证OrfA与E2F5的互作关系;采用CCK-8试剂盒和PI单染色法,检测过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖的影响;采用RT-qPCR,检测过表达orfA基因对SMAD4和caspase-3基因表达的影响。【结果】成功构建了orfA与E2F5基因过表达载体pLenti-EF1α-orfA和pLenti-EF1α-E2F5;在5种细胞系中,以SPC-A-1细胞E2F5蛋白表达量最高;酵母双杂交和免疫共沉淀试验结果均证明,OrfA与E2F5可以直接相互作用;过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖具有显著促进作用,同时能够增强SMAD4基因的表达,抑制caspase-3基因的表达。【结论】WDSV OrfA与E2F5有相互作用,且能促进SPC-A-1肺腺癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 逆转录病毒周期蛋白(OrfA) E2F5转录因子 spc-a-1肺腺癌细胞 细胞增殖

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白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系 被引量：2

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作者 朱剑武 夏蕾 +6 位作者 杨剑 罗维 李娟 周芊 曾林立 王东 杨镇洲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期2567-2570,共4页

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著... 目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25～50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。 展开更多

关键词 白藜芦醇 胰岛素样生长因子-1 胰岛素样生长因子-1受体 人肺腺癌细胞A549

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曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制

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作者 李玲玲 江冠民 杜军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期752-757,共6页

【目的】研究曲古抑菌素A(TSA)抑制γ干扰素(IFN-γ)诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的分子机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和... 【目的】研究曲古抑菌素A(TSA)抑制γ干扰素(IFN-γ)诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的分子机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点(GAS)、干扰素刺激应答元件(ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。【结果】TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明:TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。 展开更多

关键词 TSA 人肺腺癌细胞A549 IDO STAT1

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GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞耐药的机制研究 被引量：3

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作者 郑涛 李华 +1 位作者 张黎 张献全 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期927-933,共7页

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blo... 目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P <0. 01或P <0. 05)。使用GANT61处理A549/DDP细胞,当其浓度分别≥20μmol/L、≥10μmol/L时,分别培养24 h和72 h,与对照组相比肿瘤细胞增殖活性下降(P<0. 01),且呈现剂量依赖性。GANT61可通过下调c-myc、cyclin D1表达(P<0. 01),阻滞细胞周期于G1期(P<0. 01)。GANT61能够明显诱导A549/DDP细胞发生凋亡(P<0. 05),其分子机制可能与促进caspase-3的剪切活化相关(P<0. 05)。GANT61联合顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P<0. 01)。结论:Gli1在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。 展开更多

关键词 GANT61 GLI1 人肺腺癌细胞 顺铂耐药

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晚期糖基化终末产物受体及胞内信号分子在肺腺癌细胞中的表达及功能 被引量：5

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作者 何美伦 徐爱晖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期242-246,共5页

目的探讨在肺腺癌细胞株A549中,晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及其胞内信号分子DIAPH1的表达及对细胞迁移及凋亡能力的影响。方法 (1)以肺腺癌细胞株A549及正常人支气管上皮细胞株BEAS-2B为研究对象,利用qRT-PCR、Western blot检测RAGE... 目的探讨在肺腺癌细胞株A549中,晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及其胞内信号分子DIAPH1的表达及对细胞迁移及凋亡能力的影响。方法 (1)以肺腺癌细胞株A549及正常人支气管上皮细胞株BEAS-2B为研究对象,利用qRT-PCR、Western blot检测RAGE及DIAPH1在二者中的表达;(2)以10、100μg/ml RAGE配体CML-AGE及1、10、100μg/ml RAGE配体S100B处理A549细胞,划痕实验检测其对细胞迁移能力的影响;(3)以25、50、100μg/ml RAGE配体CML-AGE处理A549细胞,qRT-PCR法检测凋亡相关基因BCL-2和BAX的表达情况。结果 (1) qRT-PCR、Western blot检测结果显示A549细胞中RAGE及DIAPH1表达较BEAS-2B细胞明显下调(P <0. 001);(2) 10、100μg/ml RAGE配体CML-AGE及1、10、100μg/ml RAGE配体S100B处理对A549细胞的迁移能力皆有明显抑制作用,且作用呈浓度依赖性(P <0. 01),差异有统计学意义;(3)以25、50、100μg/ml RAGE配体CML-AGE处理A549细胞后,抗凋亡基因BCL-2表达下调,促凋亡基因BAX表达上调,其作用呈浓度依赖性(P <0. 05),差异有统计学意义。结论 RAGE及DIAPH1在肺腺癌细胞株A549中的表达低于正常人支气管上皮细胞BEAS-2B。RAGE配体在一定程度上可以抑制A549细胞的迁移,促进其凋亡,有望成为肺腺癌治疗新的靶点。 展开更多

关键词 晚期糖基化终末产物受体 DIAPH1 肺腺癌细胞 细胞迁移 细胞凋亡

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五味活血化瘀中药对SPC-A-1细胞凋亡影响的研究 被引量：22

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作者 朱晏伟 高虹 +1 位作者 姜维洁 陈捷 《中医药学刊》 2004年第7期1268-1269,共2页

目的 :观察活血化瘀中药对癌细胞生长和凋亡的影响。方法 :运用药物血清学方法 ,采用MTT法 ,观察露蜂房、赤芍、铁树叶、石见穿、泽兰叶 5味常用活血化瘀抗癌中药对SPC -A -1肺腺癌细胞株生长的抑制率 ,并采用流式细胞术对SPC -A -1肺... 目的 :观察活血化瘀中药对癌细胞生长和凋亡的影响。方法 :运用药物血清学方法 ,采用MTT法 ,观察露蜂房、赤芍、铁树叶、石见穿、泽兰叶 5味常用活血化瘀抗癌中药对SPC -A -1肺腺癌细胞株生长的抑制率 ,并采用流式细胞术对SPC -A -1肺腺癌细胞株进行Annexin -V凋亡检测 ,探讨 5味活血化瘀中药在肿瘤生长、凋亡中的作用。结果 :MTT法示铁树叶对SPC -A -1细胞培养早期RI达 2 6% ,其余 4味中药晚期RI分别达 3 1.9%、3 7.2 6%、3 2 .12 %、40 .8%。其余 4味则显示出作用时间越长抑制作用越明显的特点。Annexin -V凋亡检测 :5味药物的LR分别为 8.5 3 %、8.3 6%、13 .2 2 %、7.87%、9.73 % ;UR分别为69.47%、70 .72 %、67.62 %、75 .5 9%、66.72 %。结论 :5味活血化瘀对SPC -A -1人肺腺癌细胞均有一定的抑制和促凋亡作用 ,除铁树叶有一定促细胞早期凋亡的作用外 ,其余 4味均主要促进癌细胞的晚期凋亡。 展开更多

关键词 中药 活血化瘀 SPC—A-1肺腺癌细胞 凋亡

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胰岛素样生长因子1受体α链单克隆抗体对SPCA-1和A549细胞增殖的影响

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作者 余宗阳 杜建 +1 位作者 欧阳学农 姚丽青 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第6期451-454,共4页

背景与目的肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。传统的化疗和放疗由于缺乏特异性,取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用。因此,寻找和选择肺癌细胞特异的分子靶点,开发和研究新的、针对该靶点的分子... 背景与目的肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。传统的化疗和放疗由于缺乏特异性,取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用。因此,寻找和选择肺癌细胞特异的分子靶点,开发和研究新的、针对该靶点的分子靶向治疗药物,成为目前肿瘤学术界和广大患者所关注的焦点。本研究拟探讨胰岛素样生长因子1受体α链(IGF1-αR)单克隆抗体对人肺腺癌细胞SPCA-1和A549细胞增殖的影响。方法应用杂交瘤技术制备IGF1-αR单克隆抗体,经ProteinG柱纯化分离单克隆抗体;MTT法、Ki67检测细胞的增殖情况。结果SPCA-1、A549肺腺癌细胞株在培养条件下于24h后开始进入对数增长期,细胞倍增速度快;IGF1-αR单克隆抗体干预后,SPCA-1、A549两组细胞均生长缓慢,与相应空白对照组比较,均具有显著性差异(P<0.05),同时Ki67表达也显著下降,但两组之间差异不显著。结论制备的IGF1-αR单克隆抗体对IGF1-αR高表达的SPCA-1、A549肺腺癌细胞亚群增殖具有明显抑制作用。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1受体 单克隆抗体 肺腺癌细胞株 靶向治疗

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一种改良的间歇性低氧细胞模型方法 被引量：4

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作者 蔡晓红 洪芳芳 +6 位作者 陈利亚 梅红芳 林晶 王红霞 李秀翠 梁冬施 温正旺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期187-192,共6页

目的:研制细胞氧舱,建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型并进行验证。方法:定制细胞实验舱和空气模拟对照舱,根据氧分压-时间曲线设计间歇低氧模式。将人肺腺癌细胞A549随机分为正常对照(Con)组、间歇低氧6 h(6IH)组、间... 目的:研制细胞氧舱,建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型并进行验证。方法:定制细胞实验舱和空气模拟对照舱,根据氧分压-时间曲线设计间歇低氧模式。将人肺腺癌细胞A549随机分为正常对照(Con)组、间歇低氧6 h(6IH)组、间歇低氧9 h(9IH)组、空气模拟对照6 h(6AC)组、空气模拟对照9 h(9AC)组、持续低氧4 h(4SH)组、持续低氧6 h(6SH)组。暴露结束后光镜下观察细胞形态改变,real-time PCR、免疫组化法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白表达变化。结果:该模型间歇低氧模式为5%O_260 min-20%O_230 min,6个循环。与Con组比较,6AC、9AC组为原本细胞形态,6IH、9IH和6SH组部分细胞出现突起、变圆,胞质中出现较多黑色颗粒,细胞边界模糊,而4SH组未见明显异常。与6IH组比较,9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05);6IH和9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白分别高于4SH和6SH组(P<0.05);6AC、9AC组与Con组比较差异不显著。结论:5%O_260 min-20%O_230 min的间歇性低氧-复氧细胞模式能模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病理生理过程,是研究该疾病较理想的细胞模型。 展开更多

关键词 间歇性低氧 人肺腺癌细胞 缺氧诱导因子1Α

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平阳霉素胸膜固定术中PAI-1、t-PA和TGF-β_1的意义

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作者 王爱丽 徐爱晖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期288-288,共1页

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对人肺腺癌细胞A549和鳞癌细胞L78生长抑制、分化的影响。方法将两株细胞分为ATPR组、空白对照组及全反式维甲酸(ATRA)组。前组分别以0.01、0.1、1、5、10μmol/L的ATPR与肺腺癌细胞A549和... 目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对人肺腺癌细胞A549和鳞癌细胞L78生长抑制、分化的影响。方法将两株细胞分为ATPR组、空白对照组及全反式维甲酸(ATRA)组。前组分别以0.01、0.1、1、5、10μmol/L的ATPR与肺腺癌细胞A549和鳞癌细胞L78作用24、48、72、96 h。运用MTT法检测细胞吸光度并计算细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期。0.1、1、5μmol/L的ATPR与肺腺癌细胞A549和鳞癌细胞L78作用72 h,苏木精-伊红(HE)染色观察肺癌细胞形态变化。1μmol/L的ATPR作用肺癌细胞72 h后,RT-PCR法检测细胞核维甲酸α受体(RARα)、表皮生长因子受体(EGFR)表达的变化。结果 ATPR具有抑制A549、L78细胞生长的作用,生长抑制率有剂量和时间依赖关系。流式细胞仪分析结果显示A549、L78细胞被阻滞于G0-G1期。A549、L78细胞在ATPR的作用下,发生了细胞胞体变小、分裂状态的细胞数减少等形态学变化。通过对肺癌细胞的RT-PCR法检测,均发现EGFR和RARα的特异性条带。空白对照组L78细胞高表达EGFR;A549细胞低表达EGFR,EGFR的表达自24h开始逐渐下降并呈时间依赖性。空白对照组L78细胞和A549细胞低表达RARα,RARα mRNA表达逐渐增加,并呈时间依赖性。结论 MTT结果证实不同浓度的ATPR能够抑制细胞的增殖,随着浓度的增加细胞活力依赖性下降,即抑制率逐渐增加。流式细胞仪结果显示ATPR使细胞被阻滞于G0-G1期。从细胞形态学观察结果证实ATPR使肺癌细胞出现明显的分化征象。 展开更多

关键词 TGF-β1 肺腺癌细胞A549 PAI-1 胸膜固定术 平阳霉素 T-PA 流式细胞仪分析 RT-PCR法

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