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题名丹参F3′5′H基因克隆及其序列分析
被引量：2
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作者
严黎
刘琬菁
杨成民
张建红
陈泓宇
罗红梅
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机构
中国医学科学院/北京协和医学院药用植物研究所
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出处
《世界中医药》
CAS
2020年第5期689-695,701,共8页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31570302,81973422)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2016-I2M-3-016)。
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文摘
目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。
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关键词
丹参
类黄酮-3′
5′-羟基化酶
基因克隆
表达分析
生物信息学分析
snp位点分析
丹参花色
转基因毛状根
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Keywords
S.miltiorrhiza
Flavonoids-3′,5′-hydroxylase
Gene clone
Expression analysis
Bioinformatics analysis
snp locus analysis
Flower color of S.miltiorrhiza
Transgenic hairy roots
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分类号
R284
[医药卫生—中药学]
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题名双单杂交技术选育长根菇高品质抗病新菌株
被引量：8
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作者
于浩
葛志豪
徐丽丽
郭立忠
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机构
山东省应用真菌重点实验室/青岛农业大学生命科学学院
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出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期2621-2628,共8页
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基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0400201)
山东省现代农业产业技术体系食用菌创新团队建设项目(SDAIT-11-011-02)
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文摘
【目的】利用双单杂交育种技术选育长根菇新菌株,并建立双单杂交后代的快速准确鉴定方法,以获得活性成分含量高、抗病性强的长根菇优质菌株。【方法】利用双单杂交技术进行长根菇杂交育种,通过拮抗试验、细胞核染色观察和SNP位点分析对双单杂交后代进行鉴别,以液体深层发酵和比色法测定杂合菌株的小奥德蘑酮产量,并通过对峙培养鉴定杂合菌株的木霉抗性。【结果】通过对长根菇亲本菌株OuE进行单孢分离,获得14株单核菌丝后代,编号依次为OuE01~OuE14。将获得的单核菌丝后代与亲本双核体菌株OuC进行双单杂交,经拮抗试验和SNP位点分析共筛选获得14株双单杂交后代。经过与两个亲本菌株(OuC和OuE)比较发现,杂交后代OuCE02、OuCE08和OuCE12的菌丝平均生长速度分别为16.00、16.10和15.30 mm/d,均显著高于两个亲本菌株(P<0.05);杂交后代OuCE03、OuCE05、OuCE08和OuCE10的菌丝发酵液小奥德蘑酮含量较亲本菌株OuC分别提高6.07%、47.66%、4.67%和15.42%;杂交后代OuCE01和OuCE08显示出较亲本菌株更强的木霉抗性。其中,杂交后代OuCE08在菌丝生长速度、小奥德蘑酮产量和木霉抗性方面均优于两个亲本菌株。【结论】双单杂交是一种快速有效获得食用菌新菌株的遗传育种方法,通过该方法筛选出一株高产小奥德蘑酮、高抗木霉的长根菇新菌株OuCE08。长根菇双单杂交后代快速、准确的检测鉴定可先采用拮抗试验作为初筛手段,再利用SNP位点分析进行复筛。
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关键词
长根菇
双单杂交
小奥德蘑酮
木霉抗病性
snp位点分析
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Keywords
Oudemansiella raphanipes
dikaryon-monokaryon mating
oudenone
Trichoderma resistance
snp loci analysis
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分类号
S646.19
[农业科学—蔬菜学]
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