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绵羊INHBB、SMAD4和FGF18基因的双荧光素酶载体构建及其与miR-370-3p的靶向验证
被引量：
3
1
作者
李芝丰
储明星
孙伟
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第9期3109-3117,共9页
为研究绵羊输卵管功能相关的oar-miR-370-3p与抑制素亚基βB(inhibin subunit beta B,INHBB)、SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)和成纤维细胞生长因子18(fibroblast growth factor 18,FGF18)基因之间的靶向关系,本研究对多个...
为研究绵羊输卵管功能相关的oar-miR-370-3p与抑制素亚基βB(inhibin subunit beta B,INHBB)、SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)和成纤维细胞生长因子18(fibroblast growth factor 18,FGF18)基因之间的靶向关系,本研究对多个物种(绵羊、人、小鼠、大鼠、猕猴、豚鼠和兔)中miR-370-3p的序列进行了比对,利用RNAhybrid程序预测绵羊miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR可能存在的结合位点,随后分别构建INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型双荧光素酶载体,并将其与miR-370-3p mimics、mimics NC共转染至HEK293T细胞,检测双荧光素酶活性。结果表明,绵羊miR-370-3p序列与其他6个物种不同,但具有一定的保守性。RNAhybrid程序预测到oar-miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR存在结合位点。PCR扩增结果和测序结果表明,INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型载体构建成功。共转染INHBB、SMAD4和FGF18野生型载体和miR-370-3p mimics的双荧光素酶活性极显著或显著低于相应的对照组(P<0.01;P<0.05);而3种突变型载体和miR-370-3p mimics共转染的双荧光素酶活性均与相应的对照组无显著差异(P>0.05)。表明INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR区域均能与miR-370-3p结合并抑制双荧光素酶活性,验证了INHBB、SMAD4和FGF18基因均是miR-370-3p的靶基因,为进一步研究oar-miR-370-3p影响绵羊输卵管功能与绵羊繁殖力的分子机制提供依据。
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关键词
抑制素亚基βB
smad家族成员4
成纤维细胞生长因子18
miR-370-3p
双荧光素酶
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题名
绵羊INHBB、SMAD4和FGF18基因的双荧光素酶载体构建及其与miR-370-3p的靶向验证
被引量：
3
1
作者
李芝丰
储明星
孙伟
机构
扬州大学动物科学与技术学院
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第9期3109-3117,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31872333、31772580)
江苏省重点研发计划(现代农业)项目(BE2018354)
+3 种基金
中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ZDRW202106、ASTIP-IAS13)
国家肉羊产业技术体系专项(CARS-38)
江苏省农业重大新品种创制项目(PZCZ201739)
江苏省农业科技自主创新项目(CX(18)2003)。
文摘
为研究绵羊输卵管功能相关的oar-miR-370-3p与抑制素亚基βB(inhibin subunit beta B,INHBB)、SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)和成纤维细胞生长因子18(fibroblast growth factor 18,FGF18)基因之间的靶向关系,本研究对多个物种(绵羊、人、小鼠、大鼠、猕猴、豚鼠和兔)中miR-370-3p的序列进行了比对,利用RNAhybrid程序预测绵羊miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR可能存在的结合位点,随后分别构建INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型双荧光素酶载体,并将其与miR-370-3p mimics、mimics NC共转染至HEK293T细胞,检测双荧光素酶活性。结果表明,绵羊miR-370-3p序列与其他6个物种不同,但具有一定的保守性。RNAhybrid程序预测到oar-miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR存在结合位点。PCR扩增结果和测序结果表明,INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型载体构建成功。共转染INHBB、SMAD4和FGF18野生型载体和miR-370-3p mimics的双荧光素酶活性极显著或显著低于相应的对照组(P<0.01;P<0.05);而3种突变型载体和miR-370-3p mimics共转染的双荧光素酶活性均与相应的对照组无显著差异(P>0.05)。表明INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR区域均能与miR-370-3p结合并抑制双荧光素酶活性,验证了INHBB、SMAD4和FGF18基因均是miR-370-3p的靶基因,为进一步研究oar-miR-370-3p影响绵羊输卵管功能与绵羊繁殖力的分子机制提供依据。
关键词
抑制素亚基βB
smad家族成员4
成纤维细胞生长因子18
miR-370-3p
双荧光素酶
Keywords
INHBB
smad
4
FGF18
miR-370-3p
dual-luciferase
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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出处
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1
绵羊INHBB、SMAD4和FGF18基因的双荧光素酶载体构建及其与miR-370-3p的靶向验证
李芝丰
储明星
孙伟
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
3
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