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人β-COP-shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测
被引量：
1
1
作者
马卫列
丁航
+2 位作者
李观强
肖娟
张志珍
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015年第2期136-140,共5页
目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒...
目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒重组载体。将重组载体和包装质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度。用慢病毒感染THP-1细胞,定量PCR和Western blot检测干扰载体对β-COP基因的干扰效果。结果测序证实,β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒载体,转染HEK 293T细胞,经包装得到4种慢病毒,病毒滴度为1×109TU/m L。定量PCR分析显示,4种β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1细胞中β-COP基因mRNA表达量分别为0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,较对照(1.000±0.000)明显升高(P<0.01);其抑制率分别为16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot结果表明,4种干扰载体均可抑制β-COP蛋白表达,其中β-COP-shRNA 3的沉默效率为76.4%。结论成功构建了人β-COP-shRNA干扰载体,证实了干扰载体对靶基因有较好的沉默效果。
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关键词
人β-COP
shrna干扰
载体
脂质代谢
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职称材料
沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究
被引量：
1
2
作者
毛莹莹
冯琳
+4 位作者
于楠楠
陈冬勤
刘芳美
任晨曦
金美华
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019年第5期91-97,共7页
旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡...
旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L^-15-FU处理下,shPrx Ⅱ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrx Ⅱ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。
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关键词
HEPG2细胞系
Prx
Ⅱ
慢病毒载体
5-氟尿嘧啶
shrna干扰
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职称材料
沉默VEGF对胃癌细胞侵袭的影响
3
作者
曹一鑫
李小琴
顾汉刚
《中国卫生产业》
2011年第09Z期55-56,共2页
目的用RNA干扰技术抑制VEGF基因表达,探讨RNA干扰对胃癌细胞的侵袭的影响。方法设计合成VEGF shRNA,体外脂质体介导转染胃癌细胞株BGC-823,EL1SA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力变化。结果 VEGF shRN...
目的用RNA干扰技术抑制VEGF基因表达,探讨RNA干扰对胃癌细胞的侵袭的影响。方法设计合成VEGF shRNA,体外脂质体介导转染胃癌细胞株BGC-823,EL1SA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力变化。结果 VEGF shRNA明显下调VEGF基因的表达,VEGF表达下调后,胃癌细胞体外侵袭能力显著降低。结论VEGF shRNA显著抑制了VEGF的表达和胃癌细胞侵袭。
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关键词
小分子
干扰
RNA(
shrna
)
VEGF
胃癌
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职称材料
题名
人β-COP-shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测
被引量：
1
1
作者
马卫列
丁航
李观强
肖娟
张志珍
机构
广东医学院生物化学与分子生物学教研室
深圳市龙岗区人民医院检验科
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015年第2期136-140,共5页
基金
国家自然科学基金(81170267)
广东省自然科学基金(S2011010002984)
东莞市高等院校科研机构科技计划项目(2012108102037)
文摘
目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒重组载体。将重组载体和包装质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度。用慢病毒感染THP-1细胞,定量PCR和Western blot检测干扰载体对β-COP基因的干扰效果。结果测序证实,β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒载体,转染HEK 293T细胞,经包装得到4种慢病毒,病毒滴度为1×109TU/m L。定量PCR分析显示,4种β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1细胞中β-COP基因mRNA表达量分别为0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,较对照(1.000±0.000)明显升高(P<0.01);其抑制率分别为16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot结果表明,4种干扰载体均可抑制β-COP蛋白表达,其中β-COP-shRNA 3的沉默效率为76.4%。结论成功构建了人β-COP-shRNA干扰载体,证实了干扰载体对靶基因有较好的沉默效果。
关键词
人β-COP
shrna干扰
载体
脂质代谢
Keywords
Human β-COP
Short hairpin RNA interference vector
Lipid metabolism
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究
被引量：
1
2
作者
毛莹莹
冯琳
于楠楠
陈冬勤
刘芳美
任晨曦
金美华
机构
黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院
出处
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019年第5期91-97,共7页
基金
黑龙江八一农垦大学大学生创新创业训练计划项目(XC2018055)
文摘
旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L^-15-FU处理下,shPrx Ⅱ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrx Ⅱ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。
关键词
HEPG2细胞系
Prx
Ⅱ
慢病毒载体
5-氟尿嘧啶
shrna干扰
Keywords
HepG2 cell line
Prx Ⅱ
lentivirus
5-FU
shrna
interference
分类号
Q28 [生物学—细胞生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
沉默VEGF对胃癌细胞侵袭的影响
3
作者
曹一鑫
李小琴
顾汉刚
机构
江苏大学附属医院肿瘤科
出处
《中国卫生产业》
2011年第09Z期55-56,共2页
文摘
目的用RNA干扰技术抑制VEGF基因表达,探讨RNA干扰对胃癌细胞的侵袭的影响。方法设计合成VEGF shRNA,体外脂质体介导转染胃癌细胞株BGC-823,EL1SA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力变化。结果 VEGF shRNA明显下调VEGF基因的表达,VEGF表达下调后,胃癌细胞体外侵袭能力显著降低。结论VEGF shRNA显著抑制了VEGF的表达和胃癌细胞侵袭。
关键词
小分子
干扰
RNA(
shrna
)
VEGF
胃癌
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人β-COP-shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测
马卫列
丁航
李观强
肖娟
张志珍
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究
毛莹莹
冯琳
于楠楠
陈冬勤
刘芳美
任晨曦
金美华
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
沉默VEGF对胃癌细胞侵袭的影响
曹一鑫
李小琴
顾汉刚
《中国卫生产业》
2011
0
在线阅读
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职称材料
已选择
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参考文献
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