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SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变导致小鼠髓系异常增殖 被引量:5
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作者 张薇 杨金莲 +5 位作者 胡中倩 卢艳敏 储著朗 余科科 瞿成奎 汪思应 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期682-687,共6页
目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),... 目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),并统计外周血Mac-1和Gr-1阳性细胞率及骨髓细胞中红系(Ter119)、髓系(Mac-1、Gr-1)、T(CD3)、B(B220)淋巴细胞系的阳性细胞率,观察骨髓造血干/祖细胞的集落形成(CFU)能力,Western blotting检测外周血白细胞经白细胞介素3(IL-3)和5μg/L,刺激后磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达水平。结果:SHP-2^(D61G/+)突变16周龄组小鼠较WT组外周血白细胞数增多(P<0.05),脾明显增大,同时外周血白细胞的Mac-1和Gr-1阳性细胞率增加(P<0.05),骨髓细胞中Mac-1和Gr-1的阳性细胞率也增多,但红系、淋巴细胞系的变化不明显。同时骨髓中粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)较正常对照组明显增加,白细胞经IL-3刺激后Akt和ERK蛋白磷酸化水平升高。结论:SHP-2D61G突变可能通过MAPK及PI3K的活化而导致小鼠髓系异常增殖。 展开更多
关键词 shp-2酪氨酸磷酸酶 激活突变 小鼠 髓系增殖
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γ线诱发的白血病小鼠胸腺细胞SHP-2 mRNA变化的研究 被引量:3
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作者 黄定德 陈杞 +1 位作者 韩玲 蔡建明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1809-1811,共3页
目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2mRNA在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化情况 ,为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法 实验分为癌变组、未癌变组及对照组 ,应用PCR SSCP、DNA测序、... 目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2mRNA在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化情况 ,为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法 实验分为癌变组、未癌变组及对照组 ,应用PCR SSCP、DNA测序、荧光定量PCR法分别检测各组胸腺细胞SHP 2mRNA的突变及含量变化情况。结果 ①PCR SSCP示 9/14例癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的第 70 0~ 10 96bp间可能发生突变 ,但DNA测序结果不支持 ;②癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的含量与对照组及未癌变组比无明显变化。结论 在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中存在SHP 2的翻译异常 ,表现为翻译增强现象。 展开更多
关键词 辐射致癌 信号转导 shp-2 小鼠 白血病
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SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测 被引量:3
3
作者 胡中倩 汪心怡 +6 位作者 李菲菲 储著朗 邢小翠 李娟 查欣 瞿成奎 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第7期767-771,共5页
目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,... 目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。 展开更多
关键词 shp-2 蛋白酪氨酸磷酸酶 真核表达 突变
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硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响 被引量:5
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作者 姜立彩 罗建民 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1026-1029,共4页
目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方... 目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方法检测硼替佐米处理淋巴瘤细胞株前后SHP-2基因的mRNA表达水平。结果:硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖性。在5-100 nmol/L硼替佐米处理后,Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2 mRNA的表达水平上调。结论:硼替佐米明显抑制Jurkat细胞株和Raji细胞株增殖,诱导其凋亡,上调细胞株SHP-2 mRNA的表达水平,表明SHP-2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡的调控。 展开更多
关键词 硼替佐米 细胞凋亡 shp-2基因 淋巴瘤
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SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进组织白细胞浸润和器官损伤 被引量:3
5
作者 胡中倩 汪心怡 +6 位作者 储著朗 郑贤芳 陈吉 余科科 李菲菲 瞿成奎 汪思应 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第12期10-13,93,共5页
目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度... 目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白I的水平。结果 SHP-2D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白I水平亦显著增高(P<0.01)。结论 SHP-2D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。 展开更多
关键词 shp-2酪氨酸磷酸酶 激活突变 细胞因子分泌 白细胞浸润 多器官损伤
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SHP-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 魏林珍 奉容花 王海琳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第2期190-195,共6页
目的应用RNA干扰技术构建SHP-2基因重组慢病毒载体,研究SHP-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法靶向构建SHP-2的shRNA序列慢病毒载体,将其转染至人宫颈癌Hela细胞以沉默SHP-2基因,用Real-time PCR(RT-PCR)测定Hela细... 目的应用RNA干扰技术构建SHP-2基因重组慢病毒载体,研究SHP-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法靶向构建SHP-2的shRNA序列慢病毒载体,将其转染至人宫颈癌Hela细胞以沉默SHP-2基因,用Real-time PCR(RT-PCR)测定Hela细胞SHP-2 mRNA,应用Western blot法测定SHP-2蛋白表达,CCK8法测定SHP-2基因沉默联合苦参碱对Hela细胞增殖的影响。结果设计并成功构建3组SHP-2基因的干扰序列(SHP-2 shRNA1、SHP-2 shRNA2和SHP-2 shRNA3)以及对照序列(NS),RT-PCR检测结果表明SHP-2 shRNA2慢病毒载体干扰效率最佳。筛选稳定细胞后荧光显微镜观察感染效率较高,Western blot结果显示细胞中SHP-2蛋白表达明显被抑制。CCK8提示细胞的生长增殖能力明显受限,且随着时间延长,联合组(SHP-2 shRNA2+苦参碱)增殖最慢,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建出SHP-2基因的shRNA慢病毒干扰系统,SHP-2基因沉默联合苦参碱可影响宫颈癌细胞增殖。 展开更多
关键词 shp-2 慢病毒载体 宫颈癌细胞 增殖
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Gab2在SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变所致小鼠髓系异常增殖中的作用 被引量:1
7
作者 陈吉 汪心怡 +4 位作者 陈卓 李菲菲 郑红 瞿成奎 汪思应 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1003-1008,共6页
目的:观察SHP-2信号通路中关键接头蛋白Gab2对SHP-2激活突变引发的小鼠髓系异常增殖是否具有调控作用。方法:用Gab2-/-和SHP-2D61G/+模型小鼠建立4种基因型(SHP-2+/+、Gab2-/-、SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/+/Gab2-/-)小鼠,解剖分析其脾大小... 目的:观察SHP-2信号通路中关键接头蛋白Gab2对SHP-2激活突变引发的小鼠髓系异常增殖是否具有调控作用。方法:用Gab2-/-和SHP-2D61G/+模型小鼠建立4种基因型(SHP-2+/+、Gab2-/-、SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/+/Gab2-/-)小鼠,解剖分析其脾大小,外周血白细胞计数,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系细胞表面标志分子Mac-1和Gr-1并计数Mac-1和Gr-1阳性髓系细胞比例,骨髓造血干/祖细胞集落形成实验检测小鼠造血干细胞或祖细胞对细胞因子反应性,Western blotting和免疫沉淀实验检测骨髓来源肥大细胞经IL-3刺激后磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)的活化水平,以及Gab2与SHP-2蛋白的结合情况。结果:敲除Gab2后显著减轻SHP-2激活突变导致的小鼠髓系增殖表型,主要表现在:脾指数减小,外周血白细胞减少,小鼠髓系来源的Mac-1和Gr-1阳性细胞比例降低。与SHP-2D61G/+小鼠相比,经IL-3刺激后,骨髓细胞的集落形成能力显著降低;骨髓来源肥大细胞内p-ERK和p-Akt表达明显下调,SHP-2D61G/+/Gab2-/-小鼠肥大细胞内无Gab2与SHP-2结合。结论:敲除Gab2可以明显减轻SHP-2D61G/+激活突变导致的小鼠髓系异常增殖,这种减轻作用可能与SHP-2无法与Gab2结合而导致下游信号途径ERK和Akt活化减弱有关。 展开更多
关键词 shp-2酪氨酸磷酸酶 基因激活突变 Gab2 髓系增殖性疾病
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γ射线诱发的白血病小鼠骨髓细胞中SHP-2 mRNA及蛋白表达的变化
8
作者 黄定德 陈杞 +1 位作者 韩玲 蔡建明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第15期1560-1562,共3页
目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 dom ain-contain ing tyrosine phosphatase 2,SHP-2)mRNA表达、蛋白表达及其功能在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的变化情况,为进一步从细胞信号转导途径入手,研究辐射致癌的分子机... 目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 dom ain-contain ing tyrosine phosphatase 2,SHP-2)mRNA表达、蛋白表达及其功能在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的变化情况,为进一步从细胞信号转导途径入手,研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法实验分为白血病组、辐射未癌变组及对照组,应用荧光定量PCR法、W est-ern b lot法及生物化学方法分别检测各组骨髓有核细胞中SHP-2 mRNA、蛋白表达量及其酶活性的变化情况。结果白血病组、辐射未癌变组及对照组SHP-2 mRNA含量分别为(5.08±2.87)、(4.59±2.36)、(3.54±1.02);SHP-2的蛋白表达水平(以密度定量的光密度表示)分别为(0.956±0.125)、(0.892±0.236)、(0.712±0.368);SHP-2的酶催化活性(以吸光度表示)分别为(0.156±0.069)、(0.118±0.065)及(0.098±0.048)。各组间差异无显著性。结论在γ射线诱发的白血病小鼠骨髓细胞中,SHP-2 mRNA含量、蛋白表达量及其功能无明显变化。 展开更多
关键词 辐射致癌 信号转导 shp-2 BALB/C小鼠 白血病
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SOX7通过靶向调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移
9
作者 武雪亮 王立坤 +5 位作者 马洪庆 李少东 梁艳 惠志龙 韩磊 薛军 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1237-1243,共7页
目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤... 目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤生长情况。通过脂质体法将人结直肠癌细胞系SW480细胞转染后,将细胞分为6组,分别为SOX7 NC组、SOX7 mimic组、SOX7 NC+H_(2)O_(2)组、SOX7 mimic+H_(2)O_(2)组、SOX7 NC+PHPS1组、SOX7 mimic+PHPS1组。通过Western blot实验检测各组SW480细胞SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路相关蛋白的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测SW480细胞的侵袭迁移能力,通过CCK-8检测SW480细胞的增殖。结果小鼠体内实验显示:SOX7 mimic组肿瘤体积明显小于SOX7 NC组(P<0.01),经过PHPS1干预的肿瘤体积明显增大,SOX7 mimic+PHPS1组肿瘤体积和SOX7 NC+PHPS1组的差异无统计学意义。体外实验发现:SOX7 mimic抑制了SW480细胞Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达(P<0.01),促进了p-SHP-2蛋白表达(P<0.01);加入H_(2)O_(2)和SHP-2抑制剂后SOX7 mimic组和SOX7 NC组的Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT的蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义,SHP-2、p-SHP-2蛋白的表达水平降低,但差异无统计学意义;细胞划痕、Transwell侵袭迁移实验和CCK-8实验结果表明SOX7通过氧化应激和SHP-2通路抑制了SW480细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01)。结论SOX7可通过靶向SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 结直肠癌 SOX7 ROS shp-2 WNT/Β-CATENIN 增殖 侵袭 迁移
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PHPS1通过调控口腔鳞状细胞癌内ROS/SHP-2/AMPK活性促进PD-L1丝氨酸磷酸化进而加速肿瘤凋亡
10
作者 张晋弘 刘昕 刘健 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2469-2476,共8页
目的探讨PHPS1通过对口腔鳞状细胞癌细胞ROS/酪氨酸磷酸酶SHP-2/AMPK活性进而促进PD-L1丝氨酸磷酸化进而加速肿瘤凋亡的机制研究,分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对于低氧环境下肿瘤内血管生成的影响。方法6~8周龄健康裸鼠16只,皮下移植... 目的探讨PHPS1通过对口腔鳞状细胞癌细胞ROS/酪氨酸磷酸酶SHP-2/AMPK活性进而促进PD-L1丝氨酸磷酸化进而加速肿瘤凋亡的机制研究,分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对于低氧环境下肿瘤内血管生成的影响。方法6~8周龄健康裸鼠16只,皮下移植瘤模型分为Control组和PHPS1组,8只/组,培育14 d后观察肿瘤的生长情况,并将其切片进行HE染色固定并拍照。将人口腔鳞状细胞癌Ca9-22细胞系培养后分为Control组、PHPS1组、Control+Compound C组(Compound C为AMPK抑制剂)、PHPS1+Compound C组在1%低氧环境下培养,通过Western blotting对细胞内SHP-2、AMPK、HIF-1α、PD-L1、caspase-8、caspase-3和BAX含量进行检测。结果裸鼠成瘤与血管新生实验结果显示PHPS1抑制了裸鼠体内肿瘤生长和血管新生(P<0.05)。Western blotting分析显示PHPS1降低了SHP-2、HIF-1α、PD-L1、ERK2、STAT3和VEGF的表达,同时增加了AMPK的表达(P<0.05)。加入AMPK抑制剂后,PHPS1对HIF-1α和PD-L1的抑制作用减弱(P<0.05)。此外,PHPS1促进了caspase-3、caspase-8、PD-L1 S195磷酸化和Bax蛋白的表达,这些效应在加入AMPK抑制剂后也有所减弱(P<0.05)。HE染色结果表明PHPS1组肿瘤血管生成数量减少(P<0.01)。结论在缺氧环境下可以通过调节SHP-2/AMPK活性进而促进PD-L1丝氨酸磷酸化进而加速肿瘤凋亡。 展开更多
关键词 shp-2 AMPK 口腔鳞状细胞癌 PD-L1
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用
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作者 王凤玫 刘厚奇 +3 位作者 刘善荣 汤淑萍 杨玲 冯根生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1582-1583,共2页
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 shp-2 乳腺癌 癌细胞移动 癌细胞粘附
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小分子化合物对磷酸酶SHP-2的调控作用
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作者 徐强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期33-33,共1页
磷酸酶SHP-2对于细胞因子受体信号具有调控作用,其调控的失常已被报道参与了多种疾病的发生发展过程.我们的研究发现了一些小分子化合物具有促进或抑制SHP-2的活性,并探讨了其分子机制,借助小分子化合物的作用发现了SHP-2的一些新功能.... 磷酸酶SHP-2对于细胞因子受体信号具有调控作用,其调控的失常已被报道参与了多种疾病的发生发展过程.我们的研究发现了一些小分子化合物具有促进或抑制SHP-2的活性,并探讨了其分子机制,借助小分子化合物的作用发现了SHP-2的一些新功能.关于抑制SHP-2,我们发现SHP-2抑制剂NSC-87877几乎完全抑制小鼠实验性脑脊髓炎(EAE)的发生,减少CD4+和CD8+ T细胞的中枢浸润,但不影响各种T细胞的增殖、分化及细胞因子产生等,增加CD8+ T细胞上的趋化因子受体CXCR7的表达,预先移植2D2转基因小鼠的T细胞后再诱发EAE,NSC-87877则不再抑制EAE的发生,提示NSC-87877系抑制先锋T细胞向中枢迁移.关于激活SHP-2,我们发现从真菌Trichotheciumroseum的发酵产物中分离得到的新环肽tricho-midesA可促进活化T细胞中SHP-2的磷酸化、改善小鼠接触性皮炎,其作用可被SHP-2的特异性抑制剂PHPS1或在T细胞上条件性敲除SHP-2所阻断;而从植物内生真菌Fusariumsp.IFB-121中分离得到的新脑苷脂Fusaruside也能诱导SHP-2的磷酸化,并选择性地抑制STAT1的磷酸化,从而阻断其下游的Th1细胞相关的炎症信号,改善炎症性肠病;有趣的是,Fusaruside激活的pY-SHP-2对STAT1的抑制作用并非通过磷酸酶样作用使p-STAT1脱磷酸,而是与非磷酸化的STAT1结合将其扣押在胞浆,从而阻止其被IFN-γ受体招募并磷酸化,导致其不能入核,SHP2这一崭新的非磷酸酶样作用对于SHP-2的新功能及其调节剂的发现意义重要.此外,我们还借助其它一些化合物发现了SHP-2的一些新的相互作用蛋白及其介导的新功能.这些研究结果揭示了SHP-2在调控免疫应答方面的一些新功能,对于认识相关疾病的机理及其治疗具有指导意义. 展开更多
关键词 小分子化合物 shp-2 调控作用 磷酸酶 活化T细胞 特异性抑制剂 植物内生真菌 转基因小鼠
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在Ⅰ型代谢型谷氨酸受体诱发痛觉超敏中的作用 被引量:7
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作者 薛曼 杨云惠 +2 位作者 索占伟 杨娴 胡晓东 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期171-174,共4页
目的探讨Ⅰ型代谢型谷氨酸受体(mGluRs)的痛觉调制作用与蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src homology-2 domain-containing phosphatase-2)的关系。方法以免疫共沉淀法,研究小鼠脊髓背角SHP-2与Ⅰ型mGluRs之间的相互作用;通过测定缩足阈值,观察... 目的探讨Ⅰ型代谢型谷氨酸受体(mGluRs)的痛觉调制作用与蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src homology-2 domain-containing phosphatase-2)的关系。方法以免疫共沉淀法,研究小鼠脊髓背角SHP-2与Ⅰ型mGluRs之间的相互作用;通过测定缩足阈值,观察SHP-2抑制剂NSC-87877或SHP-2的无活性突变体SHP-2(C459S)对Ⅰ型mGluRs激动剂DHPG(50 nmol)诱发的痛觉超敏的影响。结果抗m GluR5的特异性抗体,能够从脊髓背角中免疫共沉淀SHP-2,而抗mGluR1的特异性抗体则无法沉淀出SHP-2;以NSC-87877(6 nmol)或SHP-2(C459S)抑制SHP-2的活性,可有效缓解DHPG诱发的痛觉超敏。结论 SHP-2与mGluR5存在分子间的相互结合,SHP-2的激活可能参与Ⅰ型mGluRs的痛觉调制过程。 展开更多
关键词 mGluR1/5 shp-2 磷酸酶 脊髓背角 DHPG NSC-87877
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SHP-2对人胃癌细胞克隆增殖的影响 被引量:7
14
作者 汪钊 张丽景 +3 位作者 侯媛媛 徐长庆 田野 张力 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期106-109,共4页
目的研究SHP-2对人胃癌细胞SGC-7901细胞克隆增殖的影响。方法采用重组腺病毒Ad-GFP(GFP)、Ad-GFP-SHP-2(WT)转染SGC-7901细胞;采用蛋白印迹技术(Western blot)检测SHP-2蛋白的表达;同时进行集落形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成能力... 目的研究SHP-2对人胃癌细胞SGC-7901细胞克隆增殖的影响。方法采用重组腺病毒Ad-GFP(GFP)、Ad-GFP-SHP-2(WT)转染SGC-7901细胞;采用蛋白印迹技术(Western blot)检测SHP-2蛋白的表达;同时进行集落形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成能力。另外,观察SHP-2抑制剂NSC-87877作用后,对SGC-7901集落形成的影响。结果当胃癌细胞感染复数为150时,转染成功的细胞数占总细胞数的0.9。WT组SHP-2蛋白过表达。WT组的平板克隆数明显高于SGC-7901亲本细胞组(Control 1)和GFP组,P<0.05。SHP-2抑制剂组(NSC-87877)的平板克隆数及软琼脂克隆数分别明显低于SGC-7901亲本细胞组(Control2),P<0.05。结论 SHP-2对SGC-7901细胞克隆增殖有明显促进作用。 展开更多
关键词 shp-2 SGC-7901细胞 细胞增殖 NSC-87877 平板克隆 软琼脂克隆
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SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用 被引量:3
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作者 司云凤 祝晓春 +7 位作者 孙东升 齐琦 王果元 金成艳 王丽娜 徐长庆 田野 张力 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1086-1089,共4页
目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用... 目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶shp-2 三氧化二砷 细胞凋亡 ERK JNK HEK293T细胞 细胞信号转导
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鸡Shp-Shp-2基因的克隆表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 谢菁 李拓凡 +6 位作者 姜琰敏 吕璐 陆琦 谢泉 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2018年第20期57-60,共4页
Shp-2被认为与细胞生长调控及肿瘤发生密切相关。为探究鸡Shp-2在禽类疾病中所起作用,研究对鸡源Shp-2基因进行了克隆、表达及多克隆抗体制备。利用同源重组技术,将Shp-2分别插入pGEX-6P-1原核表达载体以及pcDNA3.1真核表达载体中,并获... Shp-2被认为与细胞生长调控及肿瘤发生密切相关。为探究鸡Shp-2在禽类疾病中所起作用,研究对鸡源Shp-2基因进行了克隆、表达及多克隆抗体制备。利用同源重组技术,将Shp-2分别插入pGEX-6P-1原核表达载体以及pcDNA3.1真核表达载体中,并获得可溶性GST-Shp-2原核融合表达产物。将纯化的GST-Shp-2蛋白免疫小鼠制备了抗GST-Shp-2多克隆抗体。间接免疫荧光试验以及Western blot分析证明制备的多克隆抗体不仅能与外源性高表达的Shp-2反应,而且也能很好地识别人、鸡及小鼠的内源性Shp-2蛋白。Shp-2表达载体的构建、表达产物及获得的小鼠多克隆抗体,为进一步研究鸡Shp-2生物学功能及其在禽类疾病中所起的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 shp-2 克隆 多克隆抗体
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SHP-2及其调节破骨细胞形成作用的研究进展 被引量:1
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作者 林鹏 姜欢 胡敏 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第9期990-993,共4页
SHP-2是一种在生物体内普遍存在的具有去磷酸化作用的蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTPs),参与多种细胞信号转导通路,其突变与多种恶性疾病有关。近年来学者发现SHP-2在破骨细胞(osteoclasts,OC)的可逆磷酸化中发挥... SHP-2是一种在生物体内普遍存在的具有去磷酸化作用的蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTPs),参与多种细胞信号转导通路,其突变与多种恶性疾病有关。近年来学者发现SHP-2在破骨细胞(osteoclasts,OC)的可逆磷酸化中发挥着重要的正向调节作用,是OC形成中的关键因子。文中就SHP-2的分子生物学特征、相关疾病以及SHP-2调节OC形成的作用作一综述。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 shp-2 破骨细胞 骨代谢
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用 被引量:3
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作者 王凤玫 刘厚奇 +3 位作者 刘善荣 汤淑萍 杨玲 冯根生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期523-527,共5页
探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2在乳腺癌细胞MCF 7的移动及粘附中的作用 .利用基因重组技术分别将野生型SHP 2与突变型SHP 2与绿色荧光蛋白GFP的基因片段构成重组质粒 (SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP) .脂质体转染法分别转入MCF 7中 ,表达... 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2在乳腺癌细胞MCF 7的移动及粘附中的作用 .利用基因重组技术分别将野生型SHP 2与突变型SHP 2与绿色荧光蛋白GFP的基因片段构成重组质粒 (SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP) .脂质体转染法分别转入MCF 7中 ,表达成功后筛选并建立SHP 2 GFP和SHP 2C >S GFP细胞株 .荧光显微镜观察细胞移动情况 ,免疫印迹法检测粘附分子E 钙粘蛋白和金属蛋白酶MMP 1及MMP 9的表达 .实验后建立SHP 2 GFP及SHP 2C >S GFP细胞株 ,同时观察到SHP 2C >S GFP细胞的形态发生明显改变 :从梭形状态变成圆形状态 .荧光显微镜发现 ,MCF 7细胞和SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP转染的细胞在 3h、6h、9h的移动情况分别是MCF 7为 10 %、2 3%、5 4% ,SHP 2 GFP为 15 %、4 9%、98% ,SHP 2C >S GFP为 4 %、11%、30 % .免疫印迹结果表明 ,SHP 2C >S GFP细胞的E 钙粘蛋白表达比SHP 2 GFP细胞明显升高 (P <0 0 5 ) .MMP 1及MMP 9的表达量在SHP 2 GFP细胞中有所增强 (P <0 0 5 ) .实验表明 ,SHP 2可能通过调节粘附分子和基质金属磷酸酶而在细胞移动。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 乳腺癌 细胞移动 癌细胞粘附 E-钙粘蛋白
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听觉剥夺后大鼠听皮层神经元的形态学变化和SHP-2基因的表达 被引量:2
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作者 黄河银 刘砚星 +2 位作者 徐鸥 王玉杏 路虹 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期515-518,共4页
目的研究双侧耳蜗毁损后大鼠听皮层神经元细胞的形态学变化和蛋白酪氨酸磷酸酶2型(srchomology domain containing protein tygosine phosphatase type 2,SHP-2)基因的表达。方法选取SD大鼠48只,随机分为4个实验组(2周组、4周组、6周组... 目的研究双侧耳蜗毁损后大鼠听皮层神经元细胞的形态学变化和蛋白酪氨酸磷酸酶2型(srchomology domain containing protein tygosine phosphatase type 2,SHP-2)基因的表达。方法选取SD大鼠48只,随机分为4个实验组(2周组、4周组、6周组、8周组)和4个相应的对照组,每组6只。实验组动物行双侧耳蜗损毁术,通过HE染色和Nissl染色观察听皮层神经元细胞的形态学变化,用RT-PCR技术检测各组听皮层神经元细胞的SHP-2基因的表达,行相对定量分析。结果 HE染色和Nissl染色可见各实验组大鼠听皮层神经元细胞的凋亡形态随时间延长而加重,呈多样化表现;各对照组大鼠听皮层细胞形态正常。实验2、4、6、8周组SHP-2基因的RT-PCR相对表达量分别为1.1±0.28、1.5±0.04、2.5±0.08、11.0±0.06,随时间延长呈上升趋势,各实验组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论听觉剥夺可导致听皮层神经元细胞凋亡,凋亡的程度随时间延长逐渐加重;SHP-2基因可促进听皮层神经元细胞的增生,增生的程度也随时间延长而加重;在这两个相互拮抗的因素中,凋亡是最终的结果。 展开更多
关键词 听觉剥夺 听皮层 形态学 蛋白酪氨酸磷酸酶2
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HIF-1α及Shp-2在结直肠癌组织中的表达及临床意义
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作者 虞舒静 胡涵光 +1 位作者 葛维挺 郑树 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1077-1081,共5页
目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)和Shp-2(src homology protein tyrosine phosphatase-2)在结直肠癌组织中的表达,并分析这两种蛋白的表达情况与患者临床病理因素和预后之间的关系。方法:采用免... 目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)和Shp-2(src homology protein tyrosine phosphatase-2)在结直肠癌组织中的表达,并分析这两种蛋白的表达情况与患者临床病理因素和预后之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测HIF-1α和Shp-2在124例患者结直肠癌组织中的表达,统计学分析HIF-1α和Shp-2的表达与临床病理参数及预后的关系,并同时分析这两种蛋白表达的相关性。结果:HIF-1α和Shp-2在结直肠癌中的阳性表达率分别为54.0%(67/124)和23.4%(29/124),两者表达呈负相关(r=-0.293,P=0.001)。HIF-α的表达阳性率在手术中发现远处转移及术后出现复发转移的患者中较高,Shp-2的表达阳性率在肿瘤浸润程度较深及术后出现复发转移的患者中较低(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,HIF-1α表达阴性者预后好于表达阳性者(P=0.041),Shp-2表达阳性者预后好于表达阴性者(P=0.025);HIF-1α(-)Shp-2(+)组结直肠癌患者的预后显著优于HIF-1α(+)Shp-2(-)组(P=0.009)。结论:HIF-1α和Shp-2与结直肠癌患者预后及多个临床病理因素显著相关,提示这两种蛋白与结直肠癌的浸润转移密切相关,且可作为临床判断预后的标志物。 展开更多
关键词 结直肠癌 缺氧诱导因子-1Α shp-2
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