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基于MS2噬菌体的小反刍兽疫装甲RNA质控品的研制
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作者 刘丹 李慧彤 +8 位作者 张博源 高建帅 蒋卉 范学政 张广智 郜卫华 丁家波 熊涛 沈青春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期43-51,共9页
为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装... 为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装甲RNA质控品,并对其进行电子显微镜观察、定量、耐核酸酶检验、均匀性和稳定性检验,以评估其作为标准物质的可能性。结果显示,p ET-CPA-PPR经诱导表达和纯化后形成直径为23~28 nm、大小均一、已包封PPRV检测靶标基因N的装甲RNA颗粒,浓度为2.24×10^(9)copies/μL,可以有效抵抗核酸酶降解作用,均匀性良好且在(37±1)℃条件下可稳定保存至少30 d。结果表明,基于MS2噬菌体制备的PPRV装甲RNA拷贝数高,均匀性和稳定性良好,能够为PPRV核酸检测提供安全可靠的标准化参考物质。 展开更多
关键词 小反刍兽疫(PPR) MS2噬菌体 装甲RNA 病毒样颗粒
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