一种S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法 被引量：3

1

作者 谷劲松 谭晓军 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期521-525,共5页

通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依... 通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被SAHN酶水解生成腺嘌呤和S-核苷高半胱氨酸,后者进一步被SRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman’s试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析. 展开更多

关键词 s-腺苷-L-高半胱氨酸 s-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶 s-核糖基高半胱氨酸酶 s-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶 酶偶联分析

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S-腺苷酰L-甲硫氨酸 (SAM)对 HL-60细胞 DNA甲基化酶活力和甲基化水平的影响(英文) 被引量：6

2

作者 白坚石 马晴 +1 位作者 王萍 何忠效 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-159,共5页

以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力... 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 .说明细胞基因组甲基化水平升高并不是胞内 DNA甲基化酶催化能力改变的结果 ,而是由于 SAM进入细胞提供过量甲基造成的 . 展开更多

关键词 s-腺苷酰-L-甲硫氨酸 HL-60细胞 细胞分化 DNA甲基化酶 甲基化水平 酶活

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S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖的3-氨基-3-羧基丙基利用酶研究进展

3

作者 何家乐 董敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期56-70,共15页

S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SA... S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SAM自由基酶被广泛研究。UniProt数据库中保存了超过1800000条SAM依赖的甲基转移酶序列;SAM自由基酶也已经成为最大的酶家族之一,数目超过700000个。但利用SAM中3-氨基-3羧基丙基(3-amino-3-carboxypropyl,ACP)的酶却报道相对较少,本文对目前这一类酶的研究进行分类介绍,并对这一领域未来研究方向进行展望。 展开更多

关键词 s-腺苷-L-甲硫氨酸 3-氨基-3-羧基丙基 反应机制 甲基转移酶 非经典SAM自由基酶

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卤代甲基转移酶的发现与应用研究进展 被引量：1

4

作者 陈琦 张诗雨 +2 位作者 高春玉 郑高伟 许建和 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-3,共3页

近年来,甲基化反应在有机合成和生物合成领域中逐渐引起重视。通过甲基转移酶(MT)引入甲基基团,可以调控分子的生物活性和物理化学性质,为精准设计目标分子的结构和功能提供了新的途径。卤代甲基转移酶(HMT)是一类特殊的MT,它不仅可以... 近年来,甲基化反应在有机合成和生物合成领域中逐渐引起重视。通过甲基转移酶(MT)引入甲基基团,可以调控分子的生物活性和物理化学性质,为精准设计目标分子的结构和功能提供了新的途径。卤代甲基转移酶(HMT)是一类特殊的MT,它不仅可以催化产生各种卤代烃,还可以在碘甲烷等廉价非天然甲基供体的存在下实现昂贵辅因子S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的酶促原位再生。通过HMT的分子改造和同系酶的基因挖掘,可以高效地催化合成或再生SAM及其类似物,为甲基及其他烷基的转移提供更简单的路线。本文主要介绍了HMT的最新研究进展及其突破性工作:通过引入HMT-MT双酶级联反应,创建简单通用的SAM循环再生系统,提高了反应的原子经济性;挖掘到来源于硫嘌呤甲基转移酶家族的新酶(TPMT),很好地解决了甲基供体的环保问题;利用定向进化技术获得HMT优势突变体,能成功实现更长链烷基的转移。这些创新研究为高效生物烷基化提供了新策略,为绿色生物制造带来潜在的技术变革。 展开更多

关键词 卤代甲基转移酶 辅因子原位再生 s-腺苷甲硫氨酸 蛋白质工程 酶促级联反应

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烟酰胺-N-甲基转移酶在癌症发生发展中的作用研究进展

5

作者 张宁宁 马玲君 +4 位作者 康静依 娄烁 梁元晶 翁静 马伟 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第3期224-231,共8页

烟酰胺-N-甲基转移酶(nicotinamide N-methyltransferase, NNMT)利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将烟酰胺转变为1-甲基烟酰胺。NNMT在肝脏组织、脂肪组织和某些癌组织中高表达,并在神经退行性疾病、肥胖和糖尿病患者的特定细胞中也呈... 烟酰胺-N-甲基转移酶(nicotinamide N-methyltransferase, NNMT)利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将烟酰胺转变为1-甲基烟酰胺。NNMT在肝脏组织、脂肪组织和某些癌组织中高表达,并在神经退行性疾病、肥胖和糖尿病患者的特定细胞中也呈现表达增加的趋势,因而国内外对NNMT的关注度上升。本文概述了NNMT在癌细胞迁移和侵袭、耐药性、凋亡、自噬等方面的作用,并对相关上下游的分子通路进行综述。 展开更多

关键词 烟酰胺N-甲基转移酶 s-腺苷甲硫氨酸 转移 耐药性 分子通路 癌症

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植物磷酸乙醇胺甲基转移酶的生物信息学分析 被引量：2

6

作者 冯斌 俞继华 +4 位作者 张宝 宋志磊 陈劲松 廖海 周嘉裕 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期499-504,共6页

运用生物信息学的方法,对已在Genbank数据库中注册的菠菜、甜菜、拟南芥、陆地棉和辽宁碱蓬等中磷酸胆碱合成的关键酶磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)的氨基酸序列进行分析。结果显示:植物PEAMT属于稳定蛋白质,含有较丰富的赖氨酸和亮氨酸... 运用生物信息学的方法,对已在Genbank数据库中注册的菠菜、甜菜、拟南芥、陆地棉和辽宁碱蓬等中磷酸胆碱合成的关键酶磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)的氨基酸序列进行分析。结果显示:植物PEAMT属于稳定蛋白质,含有较丰富的赖氨酸和亮氨酸;不同植物PEAMT的氨基酸序列具有较高的同源性,含有与SAM结合的保守结合域及Tyr-His氨基酸对;植物PEAMT属于胞质酶,不与膜结合;分子进化研究表明PEAMT可作为植物遗传分化和分子进化研究的重要依据;氨基酸序列中不存在信号肽;分子中不存在跨膜结构域,可能受蛋白激酶C的磷酸化;无规则卷曲是多肽链中的主要结构元件;蛋白质保守区域包含两个AdoMet-MTase区域,属于典型的SAM依赖性甲基转移酶功能结构域。本研究还初步构建了菠菜PEAMT的三维模型,能够认识植物中PEAMT的特异性及催化分子机制,并为通过分子改造创造出具有更强抗逆效能的PEAMT提供理论参考。 展开更多

关键词 磷酸乙醇胺甲基转移酶 生物信息学 磷酸胆碱 s-腺苷甲硫氨酸

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鼠李糖甲基化相关基因的组合表达调控丁烯基多杀菌素的合成

7

作者 苏畅 郭超 +4 位作者 李新颖 陈霞 庞建 王超 张根林 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第16期43-50,共8页

绿色生物杀虫剂丁烯基多杀菌素具有广谱高效的杀虫活性,在农作物生产、粮食贮藏等方面有着极大的应用前景,高生产性能菌株的选育是实现工业化生产的关键所在。在丁烯基多杀菌素生物合成过程中S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)... 绿色生物杀虫剂丁烯基多杀菌素具有广谱高效的杀虫活性,在农作物生产、粮食贮藏等方面有着极大的应用前景,高生产性能菌株的选育是实现工业化生产的关键所在。在丁烯基多杀菌素生物合成过程中S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)作为甲基供体,在3种不同的O-甲基转移酶作用下对鼠李糖基团进行甲基化修饰,O-甲基转移酶及SAM供给充足,对丁烯基多杀菌素的合成极为重要。该研究通过外源添加SAM发酵实验、内源SAM合酶挖掘与活性表征、metK和O-甲基转移酶基因协同表达来探究鼠李糖甲基化及相关基因对丁烯基多杀菌素合成的影响。结果表明,metK和O-甲基转移酶基因的组合过表达工程菌株发酵验证获得3株高产工程菌株I-1、I-2和H-1,产量分别提高3.17、2.21、1.43倍。菌株I-1中busI和metK 1的过表达调控促进了菌株的生长代谢和底物的消耗,从而更高效合成丁烯基多杀菌素。该研究阐明了鼠李糖甲基化相关基因对丁烯基多杀菌素合成的影响,为基因工程改造须糖多孢菌促进目标产物合成提供了参考。 展开更多

关键词 须糖多孢菌 丁烯基多杀菌素 粮食贮藏 虫害防治 O-甲基转移酶 s-腺苷甲硫氨酸

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水稻强弱势粒间甲基化差异比较（摘要）

8

作者 刘燕霞 彭廷 +4 位作者 杜彦修 张静 李俊周 孙红正 赵全志 《中国稻米》 2013年第4期152-152,共1页

弱势粒糖淀粉合成酶活性低，内源激素不平衡，相关基因表达量低，是造成弱势粒灌浆差的重要原因。DNA甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下将s-腺苷甲硫氨酸的甲基转移到DNA分子胞嘧啶上，是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式，对基因表... 弱势粒糖淀粉合成酶活性低，内源激素不平衡，相关基因表达量低，是造成弱势粒灌浆差的重要原因。DNA甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下将s-腺苷甲硫氨酸的甲基转移到DNA分子胞嘧啶上，是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式，对基因表达具有重要的调节作用。 展开更多

关键词 DNA甲基化 弱势粒 s-腺苷甲硫氨酸 DNA甲基转移酶 基因表达量 摘要 水稻 表观遗传修饰

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DNA甲基化研究进展及在羊育种中的应用 被引量：1

9

作者 陈睿赜 张英杰 刘月琴 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第S1期78-81,共4页

1概述表观遗传是指在基因组序列不变的情况下,通过DNA和组蛋白的修饰等方式改变基因表达的现象,这种修饰以DNA甲基化最为常见。高等动植物中DNA甲基化主要是5-甲基胞嘧啶(5mC)。在DNA甲基转移酶(DNMT)的作用下,S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为... 1概述表观遗传是指在基因组序列不变的情况下,通过DNA和组蛋白的修饰等方式改变基因表达的现象,这种修饰以DNA甲基化最为常见。高等动植物中DNA甲基化主要是5-甲基胞嘧啶(5mC)。在DNA甲基转移酶(DNMT)的作用下,S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,将甲基添加在DNA分子中的碱基上。5mC一般出现在CpG的胞嘧啶上。CpG位点在哺乳动物基因组中所占比例可达5%~10%,其中约有70%为mCpG。CpG位点不是均匀分布,而是呈现局部聚集倾向,形成一些CpG岛,但是大部分CpG岛不易被甲基化,而散在的CpG双核苷酸则容易被甲基化。 展开更多

关键词 甲基供体 腺苷甲硫氨酸 基因表达 聚集倾向 胞嘧啶 印记基因 甲基转移酶 甲基化状态 均匀分布 双肌

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植物中SAM Mtases基因研究进展 被引量：4

10

作者 穆红梅 夏冰 +4 位作者 高俊平 张秀省 汪仁 彭峰 何树兰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1062-1066,共5页

SAM Mtases是从多种植物中分离到的一类S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因,该基因对植物体内木质素、类苯基丙烷、类黄酮类、生物碱和脂肪族化合物等许多次生代谢产物合成有直接的影响,并且在植物抗病、抗紫外线、杀虫、抗菌... SAM Mtases是从多种植物中分离到的一类S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因,该基因对植物体内木质素、类苯基丙烷、类黄酮类、生物碱和脂肪族化合物等许多次生代谢产物合成有直接的影响,并且在植物抗病、抗紫外线、杀虫、抗菌、植物激素生长和信号调节、植物共生、花粉管伸长和花粉生长等生理过程中起重要作用.该文总结了国内外已经克隆到的SAM Mtases同源基因的分离、分类及其功能,为进一步研究SAM Mtases基因在植物生理代谢调控中的地位及在植物抗性及药用成分育种上的应用提供参考. 展开更多

关键词 s-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因(SAM Mtases) 次生代谢 表达 功能 应用

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果蝇硫化氢合成相关基因在不同虫态的转录水平 被引量：3

11

作者 仲建锋 师晓琴 李国清 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期95-100,共6页

构建了23个物种的甲硫氨酸腺苷转移酶、甘氨酸N甲基转移酶、胱硫醚β合成酶和胱硫醚γ裂解酶的氨基酸序列的系统进化树,进化分析表明这4类蛋白均具有基本一致的系统进化关系,并且均被归为昆虫和哺乳动物两大类群。通过实时荧光定量PCR... 构建了23个物种的甲硫氨酸腺苷转移酶、甘氨酸N甲基转移酶、胱硫醚β合成酶和胱硫醚γ裂解酶的氨基酸序列的系统进化树,进化分析表明这4类蛋白均具有基本一致的系统进化关系,并且均被归为昆虫和哺乳动物两大类群。通过实时荧光定量PCR方法分析了黑腹果蝇不同发育阶段编码甲硫氨酸腺苷转移酶、甘氨酸N甲基转移酶、胱硫醚β合成酶和胱硫醚γ裂解酶的M(2)21AB、CG6188、CG1753和Eip55E基因的mRNA水平。结果显示:M(2)21AB基因mRNA水平在各发育阶段间无显著差异;CG6188基因mRNA的表达量在卵期较低,到了幼虫期显著升高,尤其在2龄幼虫期达到最高,而在蛹期和成虫期明显下降;CG1753基因mRNA的表达量在幼虫期明显上升,至蛹期达到最高水平,而在成虫期又显著降低;Eip55E基因mRNA水平在幼虫期、蛹期及成虫期均比卵期显著提高。以上结果表明,内源性H2S在黑腹果蝇中具有重要的生理学功能。 展开更多

关键词 甲硫氨酸腺苷转移酶 甘氨酸N甲基转移酶 胱硫醚Β合成酶 胱硫醚γ裂解酶 龄期

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