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Rv3435c重组耻垢分枝杆菌感染小鼠RAW264.7巨噬细胞的转录组分析
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作者 刘昕玥 李丹妮 +5 位作者 宗颖 时坤 李健明 刁乃超 曾范利 杜锐 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4657-4672,共16页
前期研究发现,异源表达Rv3435c基因的耻垢分枝杆菌显著抑制巨噬细胞的炎症表达,为了探究Rv3435c基因在该过程行使的功能,使用二代测序分析Rv3435c重组耻垢分枝杆菌感染RAW264.7细胞的转录组差异。结果显示:通过RT-qPCR检测6、12、24、4... 前期研究发现,异源表达Rv3435c基因的耻垢分枝杆菌显著抑制巨噬细胞的炎症表达,为了探究Rv3435c基因在该过程行使的功能,使用二代测序分析Rv3435c重组耻垢分枝杆菌感染RAW264.7细胞的转录组差异。结果显示:通过RT-qPCR检测6、12、24、48 h的IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平,选择表达量最高的12 h作为转录组测序时间点。将测序获得的原始数据进行数据质量分析及比对结果统计,确定数据质量良好,进行样本关系分析,提示Rv3435c显著改变了小鼠巨噬细胞的基因表达情况。将数据过滤比对共得到14077个差异基因,其中,有278个显著上调表达基因和118个显著下调表达基因。对差异基因进行GO注释,得到的差异基因主要富集在免疫系统过程、对外部刺激的反应、防御响应等方面。对差异基因进行KEGG通路富集分析,主要富集在环境信息处理、细胞过程、人类疾病、有机体系统几方面。通过蛋白互作分析筛选出核心基因10个,分别为IL-6、IL-1β、CCL2、Mmp9、Spp1、Itgam、Cdc20、Ccna2、Kif11、Ccnb2。对差异基因进行荧光定量PCR试验,验证转录组结果可信,根据筛选出的DEGs和RT-qPCR结果,推测SPP1是Rv3435c行使功能的潜在靶点,并通过RT-qPCR、ELISA、Western blot验证结果。本文为结核分枝杆菌Rv3435c基因的功能探索提供了重要的数据支持。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rv3435c基因 耻垢分枝杆菌 基因注释 转录组
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