豇豆重花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：14

1

作者 郭木金 廖富荣 +3 位作者 陈青 林石明 陈红运 沈建国 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期123-127,共5页

豇豆重花叶病毒(Cowpea severe mosaic virus,CPSMV)是我国进境植物检疫性有害生物,本研究根据CPSMV的外壳蛋白基因序列设计引物,以期建立CPSMV的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,... 豇豆重花叶病毒(Cowpea severe mosaic virus,CPSMV)是我国进境植物检疫性有害生物,本研究根据CPSMV的外壳蛋白基因序列设计引物,以期建立CPSMV的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。条件优化后,建立了CPSMV的RT-LAMP方法,该方法可将CPSMV与同属其他病毒准确区分,具有良好的特异性。灵敏度试验显示,RT-LAMP比普通RT-PCR灵敏度高10倍。说明本研究建立的RT-LAMP方法适用于CPSMV的快速、特异和灵敏的检测。 展开更多

关键词 豇豆重花叶病毒 反转录-环介导等温扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量：11

2

作者 师新川 温永俊 +6 位作者 王凤雪 胡嘉欣 杨博超 王炜 宋妮 程世鹏 武华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期31-34,共4页

本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性... 本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。 展开更多

关键词 牛副流感病毒3型 N基因 反转录-环介导等温扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒实时荧光RT-LAMP检测方法的建立 被引量：7

3

作者 陈兵 胡运发 +12 位作者 孙洁 陈书琨 刘建利 曾少灵 曹琛福 张彩虹 阮周曦 林庆燕 吕建强 杨俊兴 花群义 卢体康 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期11-14,共4页

新城疫是影响家禽养殖业的重大动物疫病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。借助热裂解法抽提病毒RNA,在筛选出最佳核酸染料Calcein的基础上,建立新城疫病毒(NDV)实时荧光反转录环介导等温扩增(rRT-LAMP)检测法,并对该法进行特... 新城疫是影响家禽养殖业的重大动物疫病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。借助热裂解法抽提病毒RNA,在筛选出最佳核酸染料Calcein的基础上,建立新城疫病毒(NDV)实时荧光反转录环介导等温扩增(rRT-LAMP)检测法,并对该法进行特异性、敏感性及准确性分析。试验结果显示,本试验所建立的NDV-rRT-LAMP方法可有效鉴别NDV,其敏感性可检测至50个基因拷贝,与国家标准实时荧光定量RT-PCR检测法一致;该法特异性强,与AIV、IBV等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应。小规模田间试验显示,该法用于NDV的普查监测,结果可靠。结果表明,建立的NDV-rRT-LAMP检测法可满足NDV现场快速分子检测需求。 展开更多

关键词 新城疫病毒 实时荧光反转录环介导等温扩增 现场检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：11

4

作者 李林 吴晓东 +3 位作者 包静月 李金明 王君玮 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2010年第4期32-34,41,共4页

利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63℃恒温下,1小时内实现目的核酸的大量扩增,由于在... 利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63℃恒温下,1小时内实现目的核酸的大量扩增,由于在检测前加入荧光指示试剂,检测结果可以直接用肉眼判断,避免了由于开盖检验带来的扩增产物污染导致的假阳性。该检测体系具有较高的特异性,只能特异性地检测目的病毒,与其他同属的病毒或类似病毒等无交叉反应;具有较高的检测灵敏度,比普通RT-PCR灵敏性高10倍,与荧光RT-PCR的灵敏度相当。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：6

5

作者 陈希文 汪谦 +6 位作者 尹苗 李莲 罗文涛 杨凤 郭爱伟 周杰珑 王雄清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1630-1636,共7页

为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP),针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝... 为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP),针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR GreenⅠ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。 展开更多

关键词 逆转录环介导等温扩增(rt-lamp) 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 快速检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪日本脑炎病毒NS3基因实时RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：4

6

作者 田纯见 林志雄 +4 位作者 罗长保 罗琼 鱼海琼 陈茹 曾碧健 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期34-39,共6页

建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法。根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒。与... 建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法。根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒。与常规SYBR GreenI适时荧光RT-PCR方法比较和Ct值分析,用不同稀释度病毒RNA,两者敏感性相似,适时RT-PCR在模板浓度低时结果更稳定。FIP和BIP纯度会影响反应效果,反应时间和模板浓度会影响电泳条带。一般63℃～65℃30min可出现结果,模板浓度低时要适当延长反应时间。以SYBR GreenI为指示剂,RT-LAMP在63℃～65℃循环扩增检测日本脑炎病毒,1.5min/循环,30个循环,Ct值为21.5。提示RT-LAMP方法用于日本脑炎诊断、鉴别,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本脑炎的防控工作。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 环介导逆转录等温扩增 快速检测 荧光定量

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘蔗线条花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量：3

7

作者 李战彪 谢慧婷 +2 位作者 崔丽贤 蔡健和 秦碧霞 《广东农业科学》 CAS 2020年第4期92-98,共7页

【目的】建立甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)的RT-LAMP检测方法,为SCSMV的检测提供技术支持。【方法】根据甘蔗线条花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计特异引物,优化RT-LAMP的反应条件,对比分析RT-LAMP的检测... 【目的】建立甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)的RT-LAMP检测方法,为SCSMV的检测提供技术支持。【方法】根据甘蔗线条花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计特异引物,优化RT-LAMP的反应条件,对比分析RT-LAMP的检测灵敏度和特异性;并在RT-LAMP反应产物中加入SYBR GREEN I进行可视化检测,方便快速判定结果。【结果】成功建立了一种用于检测SCSMV的RT-LAMP方法,可在60~63℃下60 min完成对SCSMV的检测,且具有较高的灵敏度,比传统RT-PCR高100倍,最低检测RNA浓度为167.9×10-5 ng。此外,该方法具有较高的特异性,可特异检测SCSMV。【结论】建立了一种灵敏、简便、快速的SCSMV RT-LAMP检测方法并用于田间甘蔗样品的检测。 展开更多

关键词 甘蔗 甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 环介导等温扩增(rt-lamp) 外壳蛋白基因 田间检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量：4

8

作者 王韦华 刘桂梅 +1 位作者 吴奇强 郭抗抗 《中国动物检疫》 CAS 2019年第7期68-75,共8页

为建立猪瘟病毒(CSFV)可视化逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法,从GenBank下载不同基因亚型CSFV分离株全基因序列,通过引物设计,RT-LAMP反应体系优化,建立了检测CSFV的RT-LAMP方法。该方法特异性和敏感性好,对CSFVcDNA最... 为建立猪瘟病毒(CSFV)可视化逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法,从GenBank下载不同基因亚型CSFV分离株全基因序列,通过引物设计,RT-LAMP反应体系优化,建立了检测CSFV的RT-LAMP方法。该方法特异性和敏感性好,对CSFVcDNA最低检测限量为1.0×10^-7ng/μL,不能检测到非目标病毒核酸。对临床送检的100份疑似CSFV感染样品进行检测,检出13份CSFV阳性,其中10份和RT-PCR检测结果一致,另外3份的RT-PCR检测结果呈阴性,同时对比发现RT-LAMP方法的敏感性比常规RT-PCR方法高100倍。本研究为CSFV检测提供了可供选择的方法。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 RT-PCR 反转录-环介导等温扩增 临床样品检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

水环境中诺如病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用 被引量：2

9

作者 罗鸿斌 《安徽农业科学》 CAS 2017年第15期57-59,84,共4页

[目的]基于诺如病毒(NV)基因保守区,设计一套RT-LAMP简并引物,建立能简便、特异、灵敏检测水环境样品中NV的一步法RT-LAMP技术。[方法]通过试验,优化反应温度(64℃)、反应时间(40 min)、Mg2+浓度(2 mmol/L)等参数,建立反应体系。[结果]... [目的]基于诺如病毒(NV)基因保守区,设计一套RT-LAMP简并引物,建立能简便、特异、灵敏检测水环境样品中NV的一步法RT-LAMP技术。[方法]通过试验,优化反应温度(64℃)、反应时间(40 min)、Mg2+浓度(2 mmol/L)等参数,建立反应体系。[结果]该方法只需1台水浴锅在1 h内即可完成检测,可直接用肉眼观察结果,检测灵敏度比普通RT-PCR高100倍;简并引物的设计增强了特异性,可检测多个血清型的NV。[结论]在样品检测中,RT-LAMP技术的灵敏度达97.7%,高于RT-PCR的90.7%,更适用于野外样品和简陋实验室的快捷检测。 展开更多

关键词 诺如病毒 逆转录 环介导等温扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

荧光环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)技术在病毒性出血性败血症(VHS)诊断中的应用 被引量：9

10

作者 安元龙 吴斌 +1 位作者 林长军 肇慧君 《中国动物检疫》 CAS 2012年第12期23-25,38,共4页

运用GenieII实时荧光等温扩增检测系统,以LAMP法荧光检测为基础,建立了对病毒性出血性败血症病毒进行荧光实时反转录环介导等温扩增检测方法。根据对VHSV病毒N基因序列的分析,针对病毒的高保守区域的6个特异性序列,设计了3对特异性引物... 运用GenieII实时荧光等温扩增检测系统,以LAMP法荧光检测为基础,建立了对病毒性出血性败血症病毒进行荧光实时反转录环介导等温扩增检测方法。根据对VHSV病毒N基因序列的分析,针对病毒的高保守区域的6个特异性序列,设计了3对特异性引物,同时加入dsDNA混合染料,对核酸扩增过程进行实时荧光监控。该方法的特异性良好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。敏感度高,检测限为20fgRNA模板。实验结果表明该方法是一种操作简单、快速高效、高特异性高灵敏度的病毒检测方法。 展开更多

关键词 病毒性出血性败血症病毒 荧光逆转录LAMP法 诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

H7亚型和N9亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：14

11

作者 罗思思 谢芝勋 +4 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 黄娇玲 曾婷婷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1176-1183,共8页

应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种H7亚型和N9亚型禽流感病毒(AIV)可视化快速检测方法。根据GenBank中H7亚型和N9亚型AIV HA和NA基因序列,在其保守区域设计筛选出H7亚型和N9亚型AIV的特异性LAMP引物各一套,优化反应条件,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种H7亚型和N9亚型禽流感病毒(AIV)可视化快速检测方法。根据GenBank中H7亚型和N9亚型AIV HA和NA基因序列,在其保守区域设计筛选出H7亚型和N9亚型AIV的特异性LAMP引物各一套,优化反应条件,建立能检测H7亚型和N9亚型AIV RT-LAMP方法,并进行特异性和敏感性检验。结果显示,该法用实时浊度仪63℃反应1h,能特异性地检测H7亚型和N9亚型AIV,而对其他15个H亚型和8个N亚型的AIV和禽类呼吸道病原体均无扩增,最低能检出10拷贝·μL-1目的基因。所建立的H7亚型和N9亚型RT-LAMP方法特异性强、敏感性高,结果可视化,操作简便、快速,为H7、N9和H7N9亚型AIV的有效防控提供技术支撑,具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 H7亚型禽流感病毒 N9亚型禽流感病毒 反转录环介导等温扩增 可视化检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

实时荧光技术在鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法中的应用 被引量：12

12

作者 董嘉文 孙敏华 +3 位作者 李林林 袁建丰 胡奇林 张建峰 《广东农业科学》 CAS 2015年第1期109-112,F0003,共5页

由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies... 由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增DTMUV的RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增。该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 逆转录环介导等温扩增 实时荧光技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于iap基因的RT-LAMP技术检测肉类食品中单核细胞增生李斯特菌的效果评价

13

作者 陈东 杨逍 宋达峰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期81-87,共7页

作者旨在探讨逆转录环介导等温扩增(reverse transcription–loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术在检测单核细胞增生李斯特菌感染的肉类食品中的效果评价。根据RT-LAMP原理,以iap基因为靶基因设计引物,检测肉制品中... 作者旨在探讨逆转录环介导等温扩增(reverse transcription–loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术在检测单核细胞增生李斯特菌感染的肉类食品中的效果评价。根据RT-LAMP原理,以iap基因为靶基因设计引物,检测肉制品中的单核细胞增生李斯特菌,并将该方法的特异性、灵敏度、死菌活菌鉴别效果与国标进行对比。实验获得的RT-LAMP体系最佳参数为63℃扩增60 min,反应体系中引物的最佳浓度为外引物0.4μmol/L和内引物0.8μmol/L,以及MgSO_(4)2.0 mmol/L、甜菜碱1.0 mol/L、dNTPs 2.0 mmol/L、AMV逆转录酶10 U/μL、Bst DNA聚合酶320 U/mL。该实验的灵敏度为每管7.3×10^(1)CFU,是LAMP的2倍。特异性实验显示该方法仅检测单增李斯特菌的靶基因,无假阳性。用RT-LAMP和中国国家标准GB 4789.30—2016检测市售肉样品(n=100)中单核细胞增生李斯特菌的能力相似,且RT-LAMP仅对活菌有扩增作用。死菌活菌鉴别实验显示该法可以排除肉样中死菌的干扰。经与国标方法做对比,可知RT-LAMP可作为一种有效的检测手段。 展开更多

关键词 逆转录环介导等温扩增 单核细胞增生李斯特氏菌 快速检测 肉类食品

在线阅读 下载PDF 职称材料

南美红辣椒脉斑驳病毒RT-LAMP检测体系的建立及优化

14

作者 张俊蕾 盖晓彤 +4 位作者 赵正婷 刘弟 陈敏 姜宁 刘雅婷 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期208-216,共9页

南美红辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是一种严重危害茄科作物的正单链RNA病毒,也是云南烟草上的主要病毒之一。本研究采用单一变量法,建立并优化检测ChiVMV的反转录环介导等温扩增(reverse transcription-loop-med... 南美红辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是一种严重危害茄科作物的正单链RNA病毒,也是云南烟草上的主要病毒之一。本研究采用单一变量法,建立并优化检测ChiVMV的反转录环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)体系。对RT-LAMP的反应时间、反应温度及体系中Mg 2+、dNTPs、甜菜碱浓度和内外引物浓度比进行优化,同时用RT-PCR对优化后的RT-LAMP检测体系进行灵敏度验证。结果表明,最佳引物组为CH-CP-3,在25μL反应体系中各组分最佳加入量为:缓冲液2.5μL,MgSO 4(100 mmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.5μL,FIP/BIP(10 mmol/L)2μL,F3/B3(10 mmol/L)0.5μL,LF/LB(10 mmol/L)1.5μL,甜菜碱(5 mmol/L)5μL,Bst 2.0 WarmStar DNA Polymerase(8000 U/mL)0.5μL,M-MLV酶(10000 U/mL)0.125μL,RNA(≥50.7 fg)1μL,DEPC H 2O补至25μL;最佳反应温度及时间为63℃50 min,优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR检测结果一致,且其灵敏度是RT-PCR的100倍。本研究建立的ChiVMV RT-LAMP检测方法具有快速、灵敏和操作简便等优点,为开发ChiVMV RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用提供了重要基础。 展开更多

关键词 南美红辣椒脉斑驳病毒 反转录环介导等温扩增 灵敏度 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒

15

作者 邓迎春 郭旭光 +3 位作者 牛会敏 任宝红 韩小改 郭瑞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期151-157,共7页

目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型... 目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。 展开更多

关键词 荧光逆转录-聚合酶链式反应 恒温荧光逆转录-重组酶介导等温扩增 GⅠ型诺如病毒 GⅡ型诺如病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

逆转录环介导等温扩增技术检测南芥菜花叶病毒 被引量：2

16

作者 郭立新 谭毅 +3 位作者 刘永丰 邓丛良 段维军 许邹亮 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期91-95,95,共5页

根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结... 根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结果显示,RT-LAMP方法快速、特异且灵敏,其灵敏度与普通RT-PCR法一致。 展开更多

关键词 南芥菜花叶病毒 逆转录环介导等温扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

大蒜X病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

17

作者 赵桐 李长红 +3 位作者 周前进 陈先锋 陈炯 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期1326-1331,共6页

采用逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种便捷、灵敏的大蒜X病毒(Garlic virus X,GarVX)的快速检测方法。根据GarVX ORF4序列的保守区设计6条特异性引物,分别识别该保守区的8个位点,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列... 采用逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种便捷、灵敏的大蒜X病毒(Garlic virus X,GarVX)的快速检测方法。根据GarVX ORF4序列的保守区设计6条特异性引物,分别识别该保守区的8个位点,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行扩增反应。通过条件优化,在65℃恒温条件下温浴60 min可成功检测GarVX。特异性检测结果表明,该方法可特异性检出GarVX,对大蒜A病毒(Garlic virus A,GarVA)、大蒜D病毒(Garlic virus D,GarVD)、大蒜E病毒(Garlic virus E,GarVE)等的检测均为阴性,且检测灵敏度高,最低检出限为5 pg·μL-1,是RT-PCR方法的10倍。试验结果表明,RT-LAMP检测方法可快速、特异、灵敏地检测GarVX,并适合现场快速检测。 展开更多

关键词 大蒜X病毒 ORF4 逆转录环介导等温扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

实时逆转录环介导等温扩增法快速检测GI型诺如病毒 被引量：7

18

作者 李辉 李雪梅 +7 位作者 刘沙 刘思宁 钟晓男 邹瑜 孙沛 杨婷 夏雯 李献刚 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第9期3739-3743,共5页

目的建立实时逆转录环介导等温扩增法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测GI型诺如病毒的分析方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、样品检测应用等,进行G... 目的建立实时逆转录环介导等温扩增法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测GI型诺如病毒的分析方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、样品检测应用等,进行GI型诺如病毒实时RT-LAPM法检测关键技术的研究。结果针对GI型诺如病毒特异性基因,通过设计筛选出最佳实时RT-LAMP引物组,并使用该组引物特异、灵敏、快速地检测到GI型诺如病毒。最佳检测温度为65℃,最小检测限为22.6拷贝/µL,且只对GI型诺如病毒靶基因特异,检测应用结果可靠。结论本研究建立了GI型诺如病毒的实时RT-LAMP检测方法,可用于GI型诺如病毒的样品检测。 展开更多

关键词 GI型诺如病毒 实时 逆转录环介导等温扩增法

在线阅读 下载PDF 职称材料

实时逆转录环介导等温扩增法快速检测甲型肝炎病毒 被引量：5

19

作者 李雪梅 李献刚 +6 位作者 刘思宁 刘沙 夏雯 杨婷 孙沛 隋华嵩 李辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第20期8273-8278,共6页

目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)实时逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、模拟... 目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)实时逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、模拟样品检测应用,进行甲型肝炎病毒实时RT-LAMP法检测体系建立。结果针对甲型肝炎病毒特异性基因,通过设计筛选出最佳实时RT-LAMP引物组,并使用该组引物特异、灵敏、快速地检测到甲型肝炎病毒。最佳检测温度为63℃,最小检测限为10拷贝/μL,且只对甲型肝炎病毒靶基因特异,检测应用结果可靠。结论实时RT-LAMP技术可以用于食品中甲型肝炎病毒的高效特异性检测,为食品中甲型肝炎病毒的检测工作提供更加有效的技术保障。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 实时 逆转录环介导等温扩增法 快速检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘薯羽状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒检测方法的建立

20

作者 陈涛 薛婷 +3 位作者 杨志坚 陈选阳 陈由强 陈建楠 《福建农业科技》 CAS 2023年第6期11-21,共11页

为了建立甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯矮化褪绿病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,提高检测灵敏度,实现结果的可视化。根据SPFMV外壳蛋白... 为了建立甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯矮化褪绿病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,提高检测灵敏度,实现结果的可视化。根据SPFMV外壳蛋白基因(CP)的核苷酸序列和SPCSV的热休克蛋白基因(Hsp 70)的核苷酸序列设计4条RT-LAMP特异性引物,采取单因素优化试验,对RT-LAMP反应体系中的多个因素包括时间、温度、BST聚合酶、Mg^(2+)、RNase抑制剂、dNTPs和Betaine浓度优化,恒温扩增60 min。经琼脂糖凝胶电泳分析,SYBR Green I可视化显色,结果表明:SPFMV的优化反应体系为:FIP/BIP 2μL、F3/B30.5μL、BST聚合酶1.0μL、dNTPs 0.6μL、MgSO 41.5μL、RNase抑制剂1.0μL、Betaine 7μL,62℃60 min。SPCSV的优化反应体系为:FIP/BIP 2μL、F3/B30.5μL、BST聚合酶1.0μL、dNTPs 0.6μL、MgSO 41.5μL、RNase抑制剂1.2μL、Betaine 7μL,64℃60 min。进一步利用SPFMV全基因组的4个片段(SPFMV-1、SPFMV-2、SPFMV-3、SPFMV-4)、SPCSV-Hsp 70和RGNNV进行特异性检验,分别建立了SPFMV和SPCSV的特异性RT-LAMP检测方法,扩增出了具有RT-LAMP的典型瀑布状条带,与凝胶电泳和SYBR Green I显色结果一致,SPFMV和SPCSV的灵敏度检测下限分别为:1×10^(-6)、1×10^(-3)ng·μL^(-1),该方法检测灵敏度高,实现了结果的可视化。对田间甘薯苗和离体组织培养甘薯苗进行检测验证,SPFMV-RT-LAMP检测方法成功率为100%,SPCSV-RT-LAMP检测方法的成功率为95%,表明研发的SPFMV和SPCSV的RT-LAMP检测方法适用于SPFMV和SPCSV的快速检测。 展开更多

关键词 甘薯 甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV) 甘薯矮化褪绿病毒(SPCSV) 环介导等温扩增技术(rt-lamp) 建立

在线阅读 下载PDF 职称材料