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布鲁氏菌Rev.1株接种不同条件制备TSA培养基验证试验
1
作者
吴梅花
狄栋栋
+2 位作者
赵丹彤
白白音宝力高
侯振宇
《现代畜牧科技》
2023年第12期32-34,共3页
布鲁氏菌病是严重威胁人类健康的动物源性人畜共患病之一,动物布鲁氏菌病防治以预防为主。目前国内布鲁氏菌病疫苗有S2、A19、M5等,国际上还有S19、Rev.1等株疫苗使用,其中以羊种M5株和Rev.1株稳定性最不好。TSA是胰蛋白胨大豆琼脂培养...
布鲁氏菌病是严重威胁人类健康的动物源性人畜共患病之一,动物布鲁氏菌病防治以预防为主。目前国内布鲁氏菌病疫苗有S2、A19、M5等,国际上还有S19、Rev.1等株疫苗使用,其中以羊种M5株和Rev.1株稳定性最不好。TSA是胰蛋白胨大豆琼脂培养基(也称胰酪大豆胨琼脂培养基),为商品化培养基,是布鲁氏菌Rev.1株适宜生长的培养基。选择不同琼脂浓度TSA培养基平板在不同条件(温度和时间)放置后接种布鲁氏菌Rev.1株,培养96 h后观察菌落生长情况并进行菌落结晶紫染色。通过对比分析发现,TSA培养基平板的湿度是影响变异检验结果准确性的重要因素,同时明确了布鲁氏菌Rev.1株所需TSA培养基的制备方法。
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关键词
布鲁氏菌
rev.1株
琼脂浓度
温度和时间
变异率
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职称材料
布鲁菌BAB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
杭天宇
赵洪哲
+4 位作者
宋前进
张静
姬智
温永俊
关平原
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第11期3641-3650,共10页
本研究以布鲁菌Rev.1株基因组为模板,扩增BAB基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),获得重组质粒pET-30a-BAB,对重组质粒进行原核表达,经Western blotting检测后,利用表达产物构建检测布鲁菌病的间接ELISA方法。结果表明,本试验...
本研究以布鲁菌Rev.1株基因组为模板,扩增BAB基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),获得重组质粒pET-30a-BAB,对重组质粒进行原核表达,经Western blotting检测后,利用表达产物构建检测布鲁菌病的间接ELISA方法。结果表明,本试验成功克隆并表达了BAB基因,纯化表达产物经SDS-PAGE分析显示,本研究获得较纯的重组BAB蛋白;Western blotting试验表明,表达蛋白可与布鲁菌羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;以重组BAB蛋白作为包被抗原,建立并优化了检测BAB抗体的间接ELISA方法。确定最佳包被条件:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀释度为1∶400;封闭液为3%猪源明胶;二抗稀释度为1∶6000;显色时间为10 min。应用建立方法对临床40份羊血清进行检测,计算得出临界值为0.607。即当待检血清的P/N≥1.5,且D450 nm≥0.607时,判定为阳性,当D450 nm≤0.561时,判定为阴性,当0.607<D450 nm<0.561时,判定为疑似值,需要进行复检。与虎红平板试验和试管凝集试验比较,阳性符合率为100%,阴性符合率为71.88%,总符合率为77.5%。
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关键词
布鲁菌病
rev.1株
BAB基因
原核表达
ELISA
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职称材料
题名
布鲁氏菌Rev.1株接种不同条件制备TSA培养基验证试验
1
作者
吴梅花
狄栋栋
赵丹彤
白白音宝力高
侯振宇
机构
金宇保灵生物药品有限公司
出处
《现代畜牧科技》
2023年第12期32-34,共3页
文摘
布鲁氏菌病是严重威胁人类健康的动物源性人畜共患病之一,动物布鲁氏菌病防治以预防为主。目前国内布鲁氏菌病疫苗有S2、A19、M5等,国际上还有S19、Rev.1等株疫苗使用,其中以羊种M5株和Rev.1株稳定性最不好。TSA是胰蛋白胨大豆琼脂培养基(也称胰酪大豆胨琼脂培养基),为商品化培养基,是布鲁氏菌Rev.1株适宜生长的培养基。选择不同琼脂浓度TSA培养基平板在不同条件(温度和时间)放置后接种布鲁氏菌Rev.1株,培养96 h后观察菌落生长情况并进行菌落结晶紫染色。通过对比分析发现,TSA培养基平板的湿度是影响变异检验结果准确性的重要因素,同时明确了布鲁氏菌Rev.1株所需TSA培养基的制备方法。
关键词
布鲁氏菌
rev.1株
琼脂浓度
温度和时间
变异率
Keywords
Brucella
rev.
1
agar concentration
temperature and time
variation rate
分类号
S855.12 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
布鲁菌BAB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
杭天宇
赵洪哲
宋前进
张静
姬智
温永俊
关平原
机构
内蒙古农业大学兽医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第11期3641-3650,共10页
基金
内蒙古自治区科技计划项目(201702165)。
文摘
本研究以布鲁菌Rev.1株基因组为模板,扩增BAB基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),获得重组质粒pET-30a-BAB,对重组质粒进行原核表达,经Western blotting检测后,利用表达产物构建检测布鲁菌病的间接ELISA方法。结果表明,本试验成功克隆并表达了BAB基因,纯化表达产物经SDS-PAGE分析显示,本研究获得较纯的重组BAB蛋白;Western blotting试验表明,表达蛋白可与布鲁菌羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;以重组BAB蛋白作为包被抗原,建立并优化了检测BAB抗体的间接ELISA方法。确定最佳包被条件:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀释度为1∶400;封闭液为3%猪源明胶;二抗稀释度为1∶6000;显色时间为10 min。应用建立方法对临床40份羊血清进行检测,计算得出临界值为0.607。即当待检血清的P/N≥1.5,且D450 nm≥0.607时,判定为阳性,当D450 nm≤0.561时,判定为阴性,当0.607<D450 nm<0.561时,判定为疑似值,需要进行复检。与虎红平板试验和试管凝集试验比较,阳性符合率为100%,阴性符合率为71.88%,总符合率为77.5%。
关键词
布鲁菌病
rev.1株
BAB基因
原核表达
ELISA
Keywords
brucellosis
strain
rev.
1
BAB gene
prokaryotic expression
ELISA
分类号
S885.3 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
布鲁氏菌Rev.1株接种不同条件制备TSA培养基验证试验
吴梅花
狄栋栋
赵丹彤
白白音宝力高
侯振宇
《现代畜牧科技》
2023
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
布鲁菌BAB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
杭天宇
赵洪哲
宋前进
张静
姬智
温永俊
关平原
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
4
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职称材料
已选择
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引证文献
统计分析
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