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Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用
被引量:
8
1
作者
吴程华
严玉霖
+2 位作者
高洪
谭锐
董骎
《上海畜牧兽医通讯》
2015年第1期9-11,共3页
近年来,大肠埃希菌一直是分子生物学和基因组学的重要研究对象。20世纪80年代以来,生物学家发展了一种新型分子生物学技术-基因敲除。大肠埃希菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是...
近年来,大肠埃希菌一直是分子生物学和基因组学的重要研究对象。20世纪80年代以来,生物学家发展了一种新型分子生物学技术-基因敲除。大肠埃希菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。本文简要综述了利用Red同源重组技术进行大肠埃希菌基因敲除的原理、策略及应用现状。
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关键词
大肠埃希菌
基因敲除
red同源重组技术
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职称材料
表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒构建及应用
2
作者
宋新宇
张茜
+3 位作者
贡鑫
戚亭
陈雨
车艳杰
《中国动物检疫》
CAS
2024年第9期122-128,共7页
为构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirusofturkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT...
为构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirusofturkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT053与HVT054位点处的95318~95319nt之间,获得了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组HVT(rHVT-H9-HA株),并对构建的毒株进行鉴定。结果显示,成功构建了含有HA基因的入门质粒pEntr-HA,通过Gateway克隆的LR反应将含有HA基因的表达盒转移到黏粒pFosC DEST的第53和54号基因之间形成pFosC HA;提取5个黏粒后,转染次代CEF细胞获得拯救重组病毒rHVT-H9-HA株。连续传代和动物试验结果表明,rHVT-H9-HA株毒价高,遗传稳定,可以克服母源抗体干扰,免疫持续期长,能够提供针对H9亚型禽流感的保护;同时也实现了一针防两病,效果明显优于灭活疫苗。本研究为H9亚型禽流感病毒重组HVT活载体疫苗的研制提供了技术支撑。
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关键词
重组
毒株rHVT-H9-HA
火鸡疱疹病毒
HA基因
red
/ET
同源
重组
技术
GatewayLR克隆
技术
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职称材料
大肠杆菌OmpC响应银胁迫初探及生物信息学分析
3
作者
沈舒楚
吴钰煌
+5 位作者
蔡丹
安皓月
伍中宝
王君
杜幼芹
邹黎黎
《中国测试》
北大核心
2025年第4期100-108,共9页
通过同源重组技术敲除大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)外膜孔蛋白C(outer membrane porin channel C,OmpC)编码基因ompC、OmpF编码基因ompF和PhoE编码基因phoE。连续监测ompC缺失株的生长及其对银离子的敏感性;运用生物信息学分析Omp...
通过同源重组技术敲除大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)外膜孔蛋白C(outer membrane porin channel C,OmpC)编码基因ompC、OmpF编码基因ompF和PhoE编码基因phoE。连续监测ompC缺失株的生长及其对银离子的敏感性;运用生物信息学分析OmpC的生物学特性。结果显示ompC、ompF和phoE缺失株构建成功,ompC、ompF和phoE缺失并不影响E.coli的生长代谢。相比于其他孔蛋白,OmpC蛋白缺失可显著提高E.coli抵御银离子胁迫的能力,与耐抗生素存在差异。生物信息学分析结果表示,OmpC的分子式为C1795H2676N482O577S4,由367个氨基酸组成,相对分子质量为40368.12,原子总数为5534,等电点为4.58;含有跨膜域,定位于细胞外膜中;二级结构中α-螺旋占比18.80%,β-折叠占比29.16%,β-转角占比6.81%,无规则卷曲占比45.23%;与银离子进行分子对接预测显示无对接位点。这为OmpC主要作为银离子入胞通道提供更多证据,可为解析E.coli应对银离子胁迫的机制奠定基础。
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关键词
大肠杆菌
λ
red同源重组技术
银离子
OMPC
生物信息学分析
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职称材料
relA基因敲除对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响
被引量:
5
4
作者
余春波
卢明
+3 位作者
邵雷
蒲甜
陈代杰
周薇
《上海交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1004-1010,1004,共7页
目的·观察严谨反应相关的(p)ppGpp合成酶基因(relA)对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响。方法·采用Red同源重组技术敲除鲍曼不动杆菌ATCC19606中relA基因;用结晶紫染色法观察鲍曼不动杆菌菌膜形成的情况;用群体分析法(...
目的·观察严谨反应相关的(p)ppGpp合成酶基因(relA)对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响。方法·采用Red同源重组技术敲除鲍曼不动杆菌ATCC19606中relA基因;用结晶紫染色法观察鲍曼不动杆菌菌膜形成的情况;用群体分析法(population analysis profiles,PAP)检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌产生异质性耐药菌落数的变化并计算异质性耐药率;用杀菌曲线检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌持留菌形成情况。结果·成功敲除鲍曼不动杆菌中relA基因,获得relA基因敲除株ATCC19606-ΔrelA,鲍曼不动杆菌的菌膜形成量明显下降,多黏菌素作用下异质性耐药菌落数及持留菌形成量均显著性降低。结论·细菌严谨反应中(p)ppGpp合成酶relA基因可能是影响鲍曼不动杆菌对多黏菌素产生异质性耐药的重要因素。
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关键词
鲍曼不动杆菌
relA基因
多黏菌素
red同源重组技术
异质性耐药
持留性
菌膜
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职称材料
题名
Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用
被引量:
8
1
作者
吴程华
严玉霖
高洪
谭锐
董骎
机构
云南农业大学动物科学技术学院
出处
《上海畜牧兽医通讯》
2015年第1期9-11,共3页
基金
国家自然科学基金(项目批准号:31260594)
云南省现代农业生猪产业技术体系建设(云财农〔2009〕171号)
云南省高校科技创新团队支持计划资助(云教科〔2011〕14号)
文摘
近年来,大肠埃希菌一直是分子生物学和基因组学的重要研究对象。20世纪80年代以来,生物学家发展了一种新型分子生物学技术-基因敲除。大肠埃希菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。本文简要综述了利用Red同源重组技术进行大肠埃希菌基因敲除的原理、策略及应用现状。
关键词
大肠埃希菌
基因敲除
red同源重组技术
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒构建及应用
2
作者
宋新宇
张茜
贡鑫
戚亭
陈雨
车艳杰
机构
天津瑞普生物技术股份有限公司
出处
《中国动物检疫》
CAS
2024年第9期122-128,共7页
文摘
为构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirusofturkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT053与HVT054位点处的95318~95319nt之间,获得了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组HVT(rHVT-H9-HA株),并对构建的毒株进行鉴定。结果显示,成功构建了含有HA基因的入门质粒pEntr-HA,通过Gateway克隆的LR反应将含有HA基因的表达盒转移到黏粒pFosC DEST的第53和54号基因之间形成pFosC HA;提取5个黏粒后,转染次代CEF细胞获得拯救重组病毒rHVT-H9-HA株。连续传代和动物试验结果表明,rHVT-H9-HA株毒价高,遗传稳定,可以克服母源抗体干扰,免疫持续期长,能够提供针对H9亚型禽流感的保护;同时也实现了一针防两病,效果明显优于灭活疫苗。本研究为H9亚型禽流感病毒重组HVT活载体疫苗的研制提供了技术支撑。
关键词
重组
毒株rHVT-H9-HA
火鸡疱疹病毒
HA基因
red
/ET
同源
重组
技术
GatewayLR克隆
技术
Keywords
recombinant rHVT-H9-HA strain
HVT
HA gene
red
/ET homologous recombination technology
Gateway LR cloning system
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
大肠杆菌OmpC响应银胁迫初探及生物信息学分析
3
作者
沈舒楚
吴钰煌
蔡丹
安皓月
伍中宝
王君
杜幼芹
邹黎黎
机构
三峡大学基础医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室
三峡大学基础医学院感染与炎症损伤研究所
三峡大学第一临床医学院
出处
《中国测试》
北大核心
2025年第4期100-108,共9页
基金
湖北省自然科学基金项目(2024AFD145,2025AFD256)。
文摘
通过同源重组技术敲除大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)外膜孔蛋白C(outer membrane porin channel C,OmpC)编码基因ompC、OmpF编码基因ompF和PhoE编码基因phoE。连续监测ompC缺失株的生长及其对银离子的敏感性;运用生物信息学分析OmpC的生物学特性。结果显示ompC、ompF和phoE缺失株构建成功,ompC、ompF和phoE缺失并不影响E.coli的生长代谢。相比于其他孔蛋白,OmpC蛋白缺失可显著提高E.coli抵御银离子胁迫的能力,与耐抗生素存在差异。生物信息学分析结果表示,OmpC的分子式为C1795H2676N482O577S4,由367个氨基酸组成,相对分子质量为40368.12,原子总数为5534,等电点为4.58;含有跨膜域,定位于细胞外膜中;二级结构中α-螺旋占比18.80%,β-折叠占比29.16%,β-转角占比6.81%,无规则卷曲占比45.23%;与银离子进行分子对接预测显示无对接位点。这为OmpC主要作为银离子入胞通道提供更多证据,可为解析E.coli应对银离子胁迫的机制奠定基础。
关键词
大肠杆菌
λ
red同源重组技术
银离子
OMPC
生物信息学分析
Keywords
Escherichia coli
λ
red
homologous recombination technology
silver ions
OmpC
bioinformatics analysis
分类号
TB9 [机械工程—测试计量技术及仪器]
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
relA基因敲除对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响
被引量:
5
4
作者
余春波
卢明
邵雷
蒲甜
陈代杰
周薇
机构
上海交通大学医学院附属第九人民医院
中国医药工业研究总院/上海医药工业研究院
上海健康医学院协同科研中心
上海交通大学药学院
上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院
出处
《上海交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1004-1010,1004,共7页
基金
上海市教育委员会高峰高原学科建设计划(20152523)~~
文摘
目的·观察严谨反应相关的(p)ppGpp合成酶基因(relA)对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响。方法·采用Red同源重组技术敲除鲍曼不动杆菌ATCC19606中relA基因;用结晶紫染色法观察鲍曼不动杆菌菌膜形成的情况;用群体分析法(population analysis profiles,PAP)检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌产生异质性耐药菌落数的变化并计算异质性耐药率;用杀菌曲线检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌持留菌形成情况。结果·成功敲除鲍曼不动杆菌中relA基因,获得relA基因敲除株ATCC19606-ΔrelA,鲍曼不动杆菌的菌膜形成量明显下降,多黏菌素作用下异质性耐药菌落数及持留菌形成量均显著性降低。结论·细菌严谨反应中(p)ppGpp合成酶relA基因可能是影响鲍曼不动杆菌对多黏菌素产生异质性耐药的重要因素。
关键词
鲍曼不动杆菌
relA基因
多黏菌素
red同源重组技术
异质性耐药
持留性
菌膜
Keywords
Acinetobacter baumannii
relA gene
colistin
red
homologous recombination technology
heteroresistance
persistence
biofilm
分类号
R915 [医药卫生—微生物与生化药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用
吴程华
严玉霖
高洪
谭锐
董骎
《上海畜牧兽医通讯》
2015
8
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下载PDF
职称材料
2
表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒构建及应用
宋新宇
张茜
贡鑫
戚亭
陈雨
车艳杰
《中国动物检疫》
CAS
2024
0
在线阅读
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职称材料
3
大肠杆菌OmpC响应银胁迫初探及生物信息学分析
沈舒楚
吴钰煌
蔡丹
安皓月
伍中宝
王君
杜幼芹
邹黎黎
《中国测试》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
4
relA基因敲除对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响
余春波
卢明
邵雷
蒲甜
陈代杰
周薇
《上海交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
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职称材料
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