沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

1

作者 于汶源 赵鹏 +6 位作者 邵禹 徐勇 徐进 谢磊 于承浩 何秋萍 陈正岗 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期723-734,共12页

目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,... 目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。 展开更多

关键词 唾液腺腺样囊性癌 ras同源物家族成员c Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 上皮-间充质转化 miR-138-5p

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普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白在肿瘤中的研究进展 被引量：1

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作者 赵士博 马汉俊 +2 位作者 吴忠港 凌博 叶广彬 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期863-867,共5页

普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白(PHLDA1)又称TDAG51,其异常表达与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。本文对PHLDA1的基因结构、生物学特性及其在乳腺癌、胃癌、肝癌、黑色素瘤和骨肉瘤等多种恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以期... 普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白(PHLDA1)又称TDAG51,其异常表达与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。本文对PHLDA1的基因结构、生物学特性及其在乳腺癌、胃癌、肝癌、黑色素瘤和骨肉瘤等多种恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以期更全面综合地了解PHLDA1基因及其对肿瘤诊断治疗的临床意义。 展开更多

关键词 普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白 生物特性 肿瘤 研究进展

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四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化 被引量：5

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作者 李凡 张学林 +2 位作者 冯静茹 郝洁 周蕾 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期29-37,共9页

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV... 目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。 展开更多

关键词 四君子汤含药血清 人卵巢癌细胞 ras同源基因家族成员A ras相关的c3肉毒素底物1 细胞分裂周期蛋白42 上皮间质化

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敲降同源异型盒C8对7因子诱导的体细胞重编程的抑制作用

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作者 黄依 方仕才 +3 位作者 王波 明金 李陈 裴端卿 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期426-433,共8页

为探究7因子(Jdp2-Jhdm1b-Mkk6-Glis1-Nanog-Esrrb-Sall4)诱导的体细胞重编程机制,通过正向与反向遗传学方法、定量分析重编程关键分子事件及同时敲降同源异型盒C8(homeobox C8, Hoxc8)和SMAD家族成员6(SMAD family member 6, Smad6)等... 为探究7因子(Jdp2-Jhdm1b-Mkk6-Glis1-Nanog-Esrrb-Sall4)诱导的体细胞重编程机制,通过正向与反向遗传学方法、定量分析重编程关键分子事件及同时敲降同源异型盒C8(homeobox C8, Hoxc8)和SMAD家族成员6(SMAD family member 6, Smad6)等方式解析Hoxc8在细胞多能性网络重建过程中的相关作用。结果表明:敲降Hoxc8可显著抑制7因子诱导的体细胞重编程,但过表达Hoxc8对其无影响。敲降Hoxc8既不影响重编程中多能性标记基因的上调与体细胞标记基因的下调,也不影响间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition, MET)标记基因与细胞增殖标记基因的表达。同时敲降Hoxc8与Smad6可使单独敲降Hoxc8导致的重编程效率降低情况得到恢复。综上所述,Hoxc8在7因子诱导的体细胞重编程中具有重要作用,为进一步揭示Hoxc8调控细胞命运转变的机制提供了参考。 展开更多

关键词 体细胞重编程 诱导多能干细胞 同源异型盒c8 SMAD家族成员6

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水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响 被引量：3

5

作者 那丽莎 曲娜 +1 位作者 于雪 栗昭生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1640-1645,共6页

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HR... 目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。 展开更多

关键词 水蛭素 脑梗死 炎症 ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶信号通路 细胞凋亡

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miR-200c调控RhoA基因表达介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制的研究 被引量：2

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作者 马腾 刘丽波 +2 位作者 蔺扬 马珺 薛一雪 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1057-1062,共6页

目的研究miR-200c调控Ras基因家族成员A(RhoA)表达介导RMP7增加血肿瘤屏障(BTB)通透性的机制。方法应用real-time PCR检测RMP7作用BTB后人脑微血管内皮细(ECs)miR-200c的表达;应用miR-200c模拟物和miR-200c抑制物分别转染GECs(ECs和U87... 目的研究miR-200c调控Ras基因家族成员A(RhoA)表达介导RMP7增加血肿瘤屏障(BTB)通透性的机制。方法应用real-time PCR检测RMP7作用BTB后人脑微血管内皮细(ECs)miR-200c的表达;应用miR-200c模拟物和miR-200c抑制物分别转染GECs(ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞),测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析BTB通透性;应用Western blotting检测RhoA的表达;应用免疫荧光方法观察GECs中RhoA表达和分布;应用双荧光素酶报告基因检测miR-200c转录后水平调控RhoA机制。结果 RMP7作用GECs后,使GECs内源性miR-200c表达显著降低;miR-200c模拟物和miR-200c抑制物成功转染到GECs中;miR-200c模拟物显著抑制RMP7诱导TEER值的降低、HRP的升高;miR-200c模拟物显著减少RhoA的表达,促使RhoA在GECs细胞质和细胞核分布减少;miR-200c模拟物转录后水平负性调控RhoA基因表达。miR-200c抑制物与miR-200c模拟物实验结果相反。结论 miR-200c转录后水平负性调控RhoA表达,介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制。 展开更多

关键词 MIR-200c ras基因家族成员A RMP7 血肿瘤屏障 基因表达调控

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RNF8调控肝细胞癌增殖和迁移的作用及机制

7

作者 牛小行 蒋立柱 +1 位作者 罗胜勇 刘文斌 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第7期1305-1311,共7页

目的探讨RNF8对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移及促进上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用,明确RNF8对肝癌细胞的调控机制。方法采用免疫组织化学法检测人肝癌组织和癌旁组织中RNF8及RhoA中的表达;Western b... 目的探讨RNF8对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移及促进上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用,明确RNF8对肝癌细胞的调控机制。方法采用免疫组织化学法检测人肝癌组织和癌旁组织中RNF8及RhoA中的表达;Western blot法和RT-PCR法检测人正常肝细胞和肝癌细胞中RNF8及RhoA中的表达水平。在HepG2细胞中过表达RNF8和siRNA干扰下调RNF8的表达,细胞实验分组如下:对照组(Control,正常HepG2细胞)、RNF8过表达组、RNF8低表达组(siRNA RNF8)、RNF8过表达+Rhosin(20μmol·L^(-1),RhoA阻断剂)组。通过CCK-8法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;最后通过Western blot法和RT-PCR法检测RNF8、RhoA、PCNA、CyclinD1、N-cadherin、vimentin、Slug、E-cadherin蛋白和mRNA的表达水平。结果肝癌组织及肝癌细胞中RNF8及RhoA表达明显增加;RNF8敲低后肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT发生明显受到抑制,而过表达RNF8明显升高肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和促进EMT发生。RhoA随着RNF8的敲低和过表达呈现正相关,过表达RNF8同时给与RhoA阻断剂时明显逆转过表达RNF8升高肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和促进EMT的现象。结论RNF8可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力和促进EMT,并同时促进RhoA的表达,RNF8通过调控RhoA促进EMT发生促进肝细胞癌的进展。 展开更多

关键词 肝细胞癌 RNF8 ras同源物家族成员A 上皮间质转化 侵袭 Rhosin

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微小RNA-380-5p在宫颈癌组织及细胞中的表达及其通过下调RHOA抑制C33A细胞的增殖和迁移 被引量：6

8

作者 韩炜珍 姜鹍 +3 位作者 杨长群 颜琳 谭照平 熊国平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期85-89,共5页

目的:检测微小RNA-380-5p(mi R-380-5p)在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法:收集2016年12月至2017年7月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16例宫颈癌患者癌组织和对应的癌... 目的:检测微小RNA-380-5p(mi R-380-5p)在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法:收集2016年12月至2017年7月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16例宫颈癌患者癌组织和对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系HCC94、C33A、Hela、SiHa和人子宫颈上皮永生化细胞H8,用qPCR法检测miR-380-5p在癌及癌旁组织、4种宫颈癌细胞及H8细胞中的表达。用脂质体转染技术将miR-380-5p mimi(c实验组)和miR-NC(阴性对照组)瞬时转染C33A细胞,用qPCR法检测转染后细胞中miR-380-5p表达,CCK-8法和Transwell小室法分别检测转染细胞的增殖和迁移能力。用生物信息学软件TargetScan预测miR-380-5p的下游基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-380-5p对下游基因Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RHOA)的结合作用,qPCR法和Western blotting检测miR-380-5p下游基因RHOA的表达。结果:宫颈癌组织中miR-380-5p表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),宫颈癌细胞系中miR-380-5p表达水平均明显低于H8细胞(P<0.05),以C33A细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,转染miR-380-5p mimic能显著抑制C33A细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01),且下调RHOA、ROCK1、ROCK2、CDK2和N-cadherin蛋白的表达(均P<0.01)。生物信息学软件预测RHOA可能为miR-380-5p的调控基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-380-5p可与RHOA 3’-非编码区(UTR)特异性结合,miR-380-5p可明显下调RHOA基因的表达(P<0.01)。结论:miR-380-5p在宫颈癌组织及细胞系中低表达,过表达miR-380-5p可能通过下调RHOA及其下游蛋白的表达抑制宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移。 展开更多

关键词 微小RNA-380-5p 宫颈癌ras同源基因家族成员A 增殖 迁移

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PCDH10减少多发性骨髓瘤细胞逃避表阿霉素杀伤 被引量：1

9

作者 袁海汀 陈建斌 +1 位作者 许永会 杨泽松 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期388-392,共5页

目的:探讨原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的影响及机制。方法:采用脂质体法将PCDH10基因转染入人MM细胞株RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blot法检测PCDH10基因和蛋白的表达... 目的:探讨原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的影响及机制。方法:采用脂质体法将PCDH10基因转染入人MM细胞株RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blot法检测PCDH10基因和蛋白的表达;CCK-8法检测表阿霉素对RPMI8226细胞的增殖抑制作用,求得半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50);Transwell法检测表阿霉素和PCDH10对RPMI8226细胞迁移的影响;流式细胞术检测CXC族趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)蛋白表达;Western blot方法检测Ras同源家族成员A(ras homolog gene family member A,Rho A)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达情况。结果:PCDH10基因成功转染入RPMI8226细胞,并成功表达;PCDH10转染组表阿霉素IC50为(0.87±0.07)μg/ml,明显低于空质粒转染组(1.27±0.02)μg/ml(F=77.93,P=0.000);PCDH10减少表阿霉素所致的细胞迁移(F=34.943,P=0.000)并抑制CXCR4(F=117.269,P=0.000)、Rho A(F=1 818.250,P=0.000)和MMP-9(F=523.764,P=0.000)蛋白表达。结论:PCDH10一方面可增强MM细胞对表阿霉素的敏感性,另一方面可通过抑制CXCR4、Rho A、MMP-9蛋白的表达来减少MM细胞逃避表阿霉素的杀伤,从而增强了表阿霉素的抗骨髓瘤效应。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 PcDH10基因 表阿霉素 cXc族趋化因子受体4 ras同源家族成员A 基质金属蛋白酶9

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CircSLC6A6调节miR-125a-5p/PUM2轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响 被引量：1

10

作者 王福萍 柴守辉 徐行丽 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期528-534,共7页

目的:探讨环状溶质载体家族6成员6(CircSLC6A6)调节微小RNA分子miR-125a-5p/pumilio同源物2(PUM2)轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测体外培养的人子宫内膜上皮细胞... 目的:探讨环状溶质载体家族6成员6(CircSLC6A6)调节微小RNA分子miR-125a-5p/pumilio同源物2(PUM2)轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测体外培养的人子宫内膜上皮细胞与人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、KLE、Ishikawa中CircSLC6A6、miR-125a-5p与PUM2的表达。将体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-A随机分为5组:对照组、CircSLC6A6敲低组(转染CircSLC6A6 siRNA质粒)、miR-125a-5p抑制组(转染miR-125a-5p抑制剂)、阴性对照组(转染空载质粒和miR-125a-5p抑制阴性对照)、共转染(转染CircSLC6A6 siRNA质粒+miR-125a-5p抑制剂)组。以CCK-8法及细胞克隆实验、Hoechst 33258染色及流式细胞实验、以划痕实验及Transwell实验检测各组HEC-1-A细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;以qRT-PCR实验检测各组HEC-1-A细胞miRv125a-5p及PUM2 mRNA表达;以免疫印迹实验检测各组HEC-1-A细胞凋亡蛋白(caspase-9、Bax)、上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测HEC-1-A细胞中CircSLC6A6对miR-125a-5p和miR-125a-5p对PUM2的靶向调控作用。结果:(1)与人子宫内膜上皮细胞相比,人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、Ishikawa、KLE中CircSLC6A6 mRNA、PUM2 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-125a-5p mRNA表达显著降低(P<0.05)。(2)与对照组相比,CircSLC6A6敲低组细胞呈现典型凋亡形态改变,细胞活力、相对细胞集落数、细胞迁移距离、侵袭细胞数、细胞PUM2 mRNA及Vimentin蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、细胞miR-125a-5p及caspase-9、Bax、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);miR-125a-5p抑制组细胞各指标变化趋势与CircSLC6A6敲低组相反;阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与CircSLC6A6敲低组相比,共转染组细胞的细胞核凋亡形态改变得到改善,各指标变化趋势与其相反,且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)在HEC-1-A细胞中CircSLC6A6可靶向下调miR-125a-5p的表达,而miR-125a-5p可靶向下调PUM2的表达。结论:CircSLC6A6通过靶向下调miR-125a-5p而上调PUM2,可能促使子宫内膜癌进展,敲低CircSLC6A6通过促进miR-125a-5p分泌而降低PUM2表达,可能抑制子宫内膜癌细胞增殖、集落形成和上皮间质转化,并促进其凋亡。 展开更多

关键词 环状溶质载体家族6成员6 miR-125a-5p/pumilio同源物2轴 子宫内膜癌 增殖 凋亡 上皮间质转化

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一种基于高内涵成像分析技术的快速检测RhoA蛋白激活的方法

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作者 周亚男 曲颖 +2 位作者 王劭文 孙毅 苏瑞斌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期839-845,共7页

目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10... 目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10^(-11),10^(-10),10^(-9),10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5)和10^(-4)mol·L^(-1)RhoA激动剂诺考达唑孵育3,10和30 min;CHO细胞分别使用相同浓度诺考达唑、溶血磷脂酸(LPA)和钙肽素孵育3,10和30 min。孵育结束用3.7%甲醛溶液进行固定后,使用烟酸己可碱(hoechst)和罗丹明标记鬼笔环肽,室温避光染色,利用HCIS拍照并对图像进行分析和统计,以平均荧光强度(MFI)的变化评估药物对RhoA蛋白的激活。结果 与溶剂对照组相比,处理Hek293细胞3 min后诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)组MFI显著升高(P<0.01),处理30 min后10^(-10)~10^(-4)mol·L^(-1)组MFI升高(P<0.01),表明RhoA蛋白被激活。在CHO细胞上,与溶剂对照组相比,诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)处理10和30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);LPA 10^(-11)~10^(-4)mol·L^(-1)处理3 min和10^(-11),10^(-8)~10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)~10^(-9),10^(-7),10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);钙肽素10^(-11)~10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)和10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01),均表明RhoA蛋白被有效激活。结论 成功建立了快速检测RhoA蛋白激活的方法,可实现高通量、快速、高效、便捷地对RhoA蛋白的激活进行检测。 展开更多

关键词 ras同源基因家族成员A 蛋白检测 高内涵成像分析 荧光染色 高通量

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黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠血管内皮NO通路影响的研究 被引量：6

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作者 高艺文 张楠 +2 位作者 吕婵梅 杨宣梅 岳桂华 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第3期248-253,共6页

目的:研究黄连解毒汤(HLJD)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮保护作用及该药物的作用机制。方法:40只6周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组(SHR组)、阳性组(卡托普利组)、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组每组10只,空白组10只(正常WK... 目的:研究黄连解毒汤(HLJD)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮保护作用及该药物的作用机制。方法:40只6周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组(SHR组)、阳性组(卡托普利组)、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组每组10只,空白组10只(正常WKY大鼠),灌胃6周并用无创尾套法测量其尾动脉收缩压及舒张压;酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧物歧化酶(SOD)、血管紧张素II(AngII)、钙调素(CaM)含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹技术(Western blot)测定胸主动脉中Ras同源基因家族成员A(RhoA)、环鸟苷酸依赖性蛋白激酶(cGK)、肌球蛋白结合亚单位(MYPT1)mRNA与蛋白表达情况。结果:给药6周后,与模型组相比,黄连解毒汤各剂量组和阳性组均能显著地降低大鼠的血压。与空白组比较,模型组动物血清中AngII与SOD水平显著升高(P<0.01),NO与CaM水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,阳性组和黄连解毒汤各组中的AngII与SOD水平降低(P<0.01或P<0.05),NO与CaM水平提高(P<0.01或P<0.05)。黄连解毒汤能够降低高血压大鼠胸主动脉RhoA、MYPT1的表达(P<0.05),并能提高高血压大鼠胸主动脉cGK的表达(P<0.05)。结论:黄连解毒汤能降低高血压大鼠的血压,调节血管内皮舒缩因子的分泌,并可影响cGK,RhoA,MYPT1等因子的表达,而这些因子的表达与NO的活性密切相关。 展开更多

关键词 黄连解毒汤 幼龄自发性高血压大鼠 环鸟苷酸依赖性蛋白激酶 ras同源基因家族成员A 肌球蛋白结合亚单位

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