突变k-ras基因重组腺病毒的构建 被引量：7

1

作者 赵峰 周清华 +2 位作者 覃扬 孙芝琳 孙泽芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期14-17,共4页

目的　利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法　用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV... 目的　利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法　用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV中 ,形成转移质粒pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val) ,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因重组质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacⅠ酶切后用脂质体转染 2 93细胞 ,包装成重组体腺病毒Ad k ras1 2 (Val)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用穿梭质粒pAdTrack CMV中带有GFP报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果　利用CaCl2 法由pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val)和pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,可获得 2 5%左右的阳性重组体细菌克隆。PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因 ,滴度为 1 .2× 1 0 1 2 pfu/ml。结论　细菌内同源重组法构建腺病毒相比于传统的细胞内同源重组法 ,具有成功率高、方法简便、快捷、实验周期短的优点 。 展开更多

关键词 腺病毒 突变ras基因 同源重组 肿瘤免疫治疗

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四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化 被引量：5

2

作者 李凡 张学林 +2 位作者 冯静茹 郝洁 周蕾 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期29-37,共9页

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV... 目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。 展开更多

关键词 四君子汤含药血清 人卵巢癌细胞 ras同源基因家族成员a ras相关的C3肉毒素底物1 细胞分裂周期蛋白42 上皮间质化

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水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响 被引量：2

3

作者 那丽莎 曲娜 +1 位作者 于雪 栗昭生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1640-1645,共6页

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HR... 目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。 展开更多

关键词 水蛭素 脑梗死 炎症 ras同源基因家族成员a/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶信号通路 细胞凋亡

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麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用 被引量：1

4

作者 徐明星 李子银 姜红梅 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期2180-2187,共8页

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walke... 目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。 展开更多

关键词 胃癌 麦冬皂苷B ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1信号通路 增殖 凋亡

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一种基于高内涵成像分析技术的快速检测RhoA蛋白激活的方法

5

作者 周亚男 曲颖 +2 位作者 王劭文 孙毅 苏瑞斌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期839-845,共7页

目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10... 目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10^(-11),10^(-10),10^(-9),10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5)和10^(-4)mol·L^(-1)RhoA激动剂诺考达唑孵育3,10和30 min;CHO细胞分别使用相同浓度诺考达唑、溶血磷脂酸(LPA)和钙肽素孵育3,10和30 min。孵育结束用3.7%甲醛溶液进行固定后,使用烟酸己可碱(hoechst)和罗丹明标记鬼笔环肽,室温避光染色,利用HCIS拍照并对图像进行分析和统计,以平均荧光强度(MFI)的变化评估药物对RhoA蛋白的激活。结果 与溶剂对照组相比,处理Hek293细胞3 min后诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)组MFI显著升高(P<0.01),处理30 min后10^(-10)~10^(-4)mol·L^(-1)组MFI升高(P<0.01),表明RhoA蛋白被激活。在CHO细胞上,与溶剂对照组相比,诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)处理10和30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);LPA 10^(-11)~10^(-4)mol·L^(-1)处理3 min和10^(-11),10^(-8)~10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)~10^(-9),10^(-7),10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);钙肽素10^(-11)~10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)和10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01),均表明RhoA蛋白被有效激活。结论 成功建立了快速检测RhoA蛋白激活的方法,可实现高通量、快速、高效、便捷地对RhoA蛋白的激活进行检测。 展开更多

关键词 ras同源基因家族成员a 蛋白检测 高内涵成像分析 荧光染色 高通量

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夹脊电针刺激通过PKA/RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤 被引量：3

6

作者 周孝敏 鱼丽萍 +1 位作者 李卓伦 丁天红 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期295-302,共8页

目的:探究电针(EA)夹脊穴对脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能及蛋白激酶A(PKA)/Ras同源基因家族成员A(RhoA)通路表达的影响,并从PKA/RhoA通路初步探讨其机制。方法:将36只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、SCI模型组(SCI)、电针干预组(S... 目的:探究电针(EA)夹脊穴对脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能及蛋白激酶A(PKA)/Ras同源基因家族成员A(RhoA)通路表达的影响,并从PKA/RhoA通路初步探讨其机制。方法:将36只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、SCI模型组(SCI)、电针干预组(SCI+EA)。运用钳夹法建立SCI模型,SCI+EA组电针干预T_(9)和T_(11)两对夹脊穴。利用脊髓功能评分(BBB量表)检测大鼠的后肢运动功能,HE染色观察脊髓组织形态学改变,同时运用免疫荧光染色、Western Blot及real time RT-PCR检测脊髓组织中蛋白激酶A(PKA)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)及生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达。结果:SCI模型大鼠后肢运动功能发生严重障碍,脊髓组织结构紊乱,伴较多出血点,而电针刺激后SCI大鼠脊髓组织结构较完整,出血点减少,后肢运动功能也得到明显改善。此外,夹脊电针刺激可显著提高SCI大鼠脊髓组织中PKA mRNA表达,(P<0.05)。同时,夹脊电针刺激后SCI大鼠脊髓组织中PKA、GAP-43蛋白以及磷酸化蛋白p-RhoA(ser188)表达均显著升高(P<0.05)。结论:夹脊电针能改善SCI大鼠后肢运动功能,减轻脊髓组织的病理学损伤;可能是通过调节PKA/RhoA信号通路实现的。 展开更多

关键词 脊髓损伤 夹脊穴 电针 蛋白激酶A ras同源基因家庭成员a 大鼠

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Aβ诱导的认知障碍大鼠海马RGMa和RhoA表达的研究 被引量：1

7

作者 尹红蕾 秦新月 +3 位作者 罗家明 王敬 殷成 陈黎燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第z1期41-43,47,共4页

目的:探讨Aβ诱导的认知障碍大鼠海马内反义导向分子(Repulsiveguidancemolecule,RGMa)及Ras基因同源物A(RashomologousA,RhoA)表达情况。方法:20只SD大鼠被随机分为认知障碍模型组(10只),生理盐水对照组(10只),建立Aβ1-40致认知障碍... 目的:探讨Aβ诱导的认知障碍大鼠海马内反义导向分子(Repulsiveguidancemolecule,RGMa)及Ras基因同源物A(RashomologousA,RhoA)表达情况。方法:20只SD大鼠被随机分为认知障碍模型组(10只),生理盐水对照组(10只),建立Aβ1-40致认知障碍大鼠模型,Morris水迷宫检测大鼠认知功能,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RGMa和RhoAmRNA的表达,免疫组织化学方法检测RGMa蛋白的表达。结果:与对照组相比较,模型组大鼠显示学习、记忆能力明显下降(P<0.01),海马RGMamRNA表达下调(P<0.05),RGMa蛋白表达也降低(P<0.05),而RhoAmRNA表达显著增高(P<0.01)。结论:Morris水迷宫检测显示大鼠认知功能障碍,RGMa表达降低及RhoAmRNA表达上调可能参与了Aβ1-40致认知功能障碍大鼠海马神经元变性病理过程。 展开更多

关键词 反义导向分子 ras基因同源物A Β-淀粉样蛋白 认知障碍 海马神经元

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微小RNA-380-5p在宫颈癌组织及细胞中的表达及其通过下调RHOA抑制C33A细胞的增殖和迁移 被引量：6

8

作者 韩炜珍 姜鹍 +3 位作者 杨长群 颜琳 谭照平 熊国平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期85-89,共5页

目的:检测微小RNA-380-5p(mi R-380-5p)在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法:收集2016年12月至2017年7月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16例宫颈癌患者癌组织和对应的癌... 目的:检测微小RNA-380-5p(mi R-380-5p)在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法:收集2016年12月至2017年7月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16例宫颈癌患者癌组织和对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系HCC94、C33A、Hela、SiHa和人子宫颈上皮永生化细胞H8,用qPCR法检测miR-380-5p在癌及癌旁组织、4种宫颈癌细胞及H8细胞中的表达。用脂质体转染技术将miR-380-5p mimi(c实验组)和miR-NC(阴性对照组)瞬时转染C33A细胞,用qPCR法检测转染后细胞中miR-380-5p表达,CCK-8法和Transwell小室法分别检测转染细胞的增殖和迁移能力。用生物信息学软件TargetScan预测miR-380-5p的下游基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-380-5p对下游基因Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RHOA)的结合作用,qPCR法和Western blotting检测miR-380-5p下游基因RHOA的表达。结果:宫颈癌组织中miR-380-5p表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),宫颈癌细胞系中miR-380-5p表达水平均明显低于H8细胞(P<0.05),以C33A细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,转染miR-380-5p mimic能显著抑制C33A细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01),且下调RHOA、ROCK1、ROCK2、CDK2和N-cadherin蛋白的表达(均P<0.01)。生物信息学软件预测RHOA可能为miR-380-5p的调控基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-380-5p可与RHOA 3’-非编码区(UTR)特异性结合,miR-380-5p可明显下调RHOA基因的表达(P<0.01)。结论:miR-380-5p在宫颈癌组织及细胞系中低表达,过表达miR-380-5p可能通过下调RHOA及其下游蛋白的表达抑制宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移。 展开更多

关键词 微小RNA-380-5p 宫颈癌ras同源基因家族成员a 增殖 迁移

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PCDH10减少多发性骨髓瘤细胞逃避表阿霉素杀伤 被引量：1

9

作者 袁海汀 陈建斌 +1 位作者 许永会 杨泽松 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期388-392,共5页

目的:探讨原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的影响及机制。方法:采用脂质体法将PCDH10基因转染入人MM细胞株RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blot法检测PCDH10基因和蛋白的表达... 目的:探讨原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的影响及机制。方法:采用脂质体法将PCDH10基因转染入人MM细胞株RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blot法检测PCDH10基因和蛋白的表达;CCK-8法检测表阿霉素对RPMI8226细胞的增殖抑制作用,求得半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50);Transwell法检测表阿霉素和PCDH10对RPMI8226细胞迁移的影响;流式细胞术检测CXC族趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)蛋白表达;Western blot方法检测Ras同源家族成员A(ras homolog gene family member A,Rho A)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达情况。结果:PCDH10基因成功转染入RPMI8226细胞,并成功表达;PCDH10转染组表阿霉素IC50为(0.87±0.07)μg/ml,明显低于空质粒转染组(1.27±0.02)μg/ml(F=77.93,P=0.000);PCDH10减少表阿霉素所致的细胞迁移(F=34.943,P=0.000)并抑制CXCR4(F=117.269,P=0.000)、Rho A(F=1 818.250,P=0.000)和MMP-9(F=523.764,P=0.000)蛋白表达。结论:PCDH10一方面可增强MM细胞对表阿霉素的敏感性,另一方面可通过抑制CXCR4、Rho A、MMP-9蛋白的表达来减少MM细胞逃避表阿霉素的杀伤,从而增强了表阿霉素的抗骨髓瘤效应。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 PCDH10基因 表阿霉素 CXC族趋化因子受体4 ras同源家族成员a 基质金属蛋白酶9

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丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响 被引量：2

10

作者 赵怡然 付洪涛 赵楠楠 《世界中医药》 CAS 2020年第22期3401-3405,共5页

目的:探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法:将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注... 目的:探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法:将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注射等体积生理盐水5.0 mg/(kg·d),丹参素低、中、高剂量组分别于妊娠第12天起尾静脉注射等体积不同浓度丹参素溶液,低剂量组10μg/(kg·d),中剂量组20μg/(kg·d),高剂量组30μg/(kg·d),于自然分娩后6 h内测定胎鼠体质量,麻醉处死后行脑组织HE染色,选择RT-PCR、Western blot法对RhoA、ROCKⅡmRNA及蛋白表达进行测定,流式细胞术检测脑神经细胞凋亡率。结果:IUGR组胎鼠体质量明显低于正常组,IUGR+丹参素高剂量组胎鼠体质量高于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。IUGR组RhoA、ROCKⅡmRNA、蛋白表达及脑神经细胞凋亡率均高于正常组,而IUGR+丹参素高剂量组低于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。结论:丹参素可调控Rho/ROCK信号通路并抑制其活性,以促进IUGR胎鼠脑神经细胞增殖,改善其生长发育。 展开更多

关键词 丹参素 宫内生长受限 神经干细胞 ras同源基因A Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶Ⅱ

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黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠血管内皮NO通路影响的研究 被引量：6

11

作者 高艺文 张楠 +2 位作者 吕婵梅 杨宣梅 岳桂华 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第3期248-253,共6页

目的:研究黄连解毒汤(HLJD)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮保护作用及该药物的作用机制。方法:40只6周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组(SHR组)、阳性组(卡托普利组)、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组每组10只,空白组10只(正常WK... 目的:研究黄连解毒汤(HLJD)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮保护作用及该药物的作用机制。方法:40只6周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组(SHR组)、阳性组(卡托普利组)、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组每组10只,空白组10只(正常WKY大鼠),灌胃6周并用无创尾套法测量其尾动脉收缩压及舒张压;酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧物歧化酶(SOD)、血管紧张素II(AngII)、钙调素(CaM)含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹技术(Western blot)测定胸主动脉中Ras同源基因家族成员A(RhoA)、环鸟苷酸依赖性蛋白激酶(cGK)、肌球蛋白结合亚单位(MYPT1)mRNA与蛋白表达情况。结果:给药6周后,与模型组相比,黄连解毒汤各剂量组和阳性组均能显著地降低大鼠的血压。与空白组比较,模型组动物血清中AngII与SOD水平显著升高(P<0.01),NO与CaM水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,阳性组和黄连解毒汤各组中的AngII与SOD水平降低(P<0.01或P<0.05),NO与CaM水平提高(P<0.01或P<0.05)。黄连解毒汤能够降低高血压大鼠胸主动脉RhoA、MYPT1的表达(P<0.05),并能提高高血压大鼠胸主动脉cGK的表达(P<0.05)。结论:黄连解毒汤能降低高血压大鼠的血压,调节血管内皮舒缩因子的分泌,并可影响cGK,RhoA,MYPT1等因子的表达,而这些因子的表达与NO的活性密切相关。 展开更多

关键词 黄连解毒汤 幼龄自发性高血压大鼠 环鸟苷酸依赖性蛋白激酶 ras同源基因家族成员a 肌球蛋白结合亚单位

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