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小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备: 1; 作者薛潘董阳超 +7 位作者武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期447-454,共8页; 目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 展开更多; 关键词寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：5: 2; 作者罗飞李宇琴 +3 位作者周洁南文龙陆明哲陈义平《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期83-86,共4页; 本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游。构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3... 展开更多; 关键词伪狂犬病病毒 gD糖蛋白主要抗原表位原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达被引量：5: 3; 作者郑佳琳江飙郭霄峰《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期403-407,共5页; 目的探讨提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原核细胞中表达的水平和与抗体的反应水平。方法以RVHEP-Flury株的全长质粒为模板,采用PCR方法扩增获得去除信号肽基因的GP(G1)、GP的膜外区基因(G2)。选取膜外区基因中抗原表位... 展开更多; 关键词狂犬病病毒:糖蛋白基因基因修饰原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：2: 4; 作者罗飞陈义平 +5 位作者陆明哲彭大新周洁李宇琴徐宝娟南文龙《中国动物检疫》 CAS 2009年第12期27-28,36,共3页; 参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在... 展开更多; 关键词猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB 主要抗原表位原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化: 5; 作者鞠美芳殷相平柳纪省《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期932-937,共6页; 目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回... 展开更多; 关键词狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化: 6; 作者鞠美芳殷相平柳纪省《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期114-119,共6页; 旨在有效检测狂犬病毒抗原及抗体。以狂犬病病毒aG株为模板,反转录扩增糖蛋白膜外区基因,并进行序列测定。将目的片段与表达载体pET-32a(+)分别双酶切、胶回收后相连并转化至Rosseta(DE3)菌株。选取阳性克隆经IPTG诱导表达后,进行SDS-P... 展开更多; 关键词狂犬病病毒糖蛋白膜外区原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备: 1; 作者薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰; 机构延安大学医学院空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期447-454,共8页; 基金空军军医大学军事医学珠峰工程人才计划(zfrclyf) 陕西省重点研发计划(2021ZDLSF01-05)。; 文摘目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。; 关键词寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体; Keywords Zika virus(ZIKV) envelope protein extracellular domain(Eecto) prokaryotic expression monoclonal antibody; 分类号 S718.85 [农业科学—林学] Q939.47 [生物学—微生物学] S852.43 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：5: 2; 作者罗飞李宇琴周洁南文龙陆明哲陈义平; 机构中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室扬州大学兽医学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期83-86,共4页; 基金 "十一五"国家科技支撑项目(2006BAD6A13); 文摘本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游。构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45.2ku,主要以包涵体形式存在。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该纯化蛋白能与猪伪狂犬病病毒抗体阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原反应性,可以作为猪血清伪狂犬病病毒抗体诊断用抗原。; 关键词伪狂犬病病毒 gD糖蛋白主要抗原表位原核表达; Keywords pseudorabies virus envelope glycoprotein gD major epitope domain prokaryotic expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达被引量：5: 3; 作者郑佳琳江飙郭霄峰; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期403-407,共5页; 基金国家自然科学基金(30671565) 教育部长江学者和创新团队发展计划(IRT0723); 文摘目的探讨提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原核细胞中表达的水平和与抗体的反应水平。方法以RVHEP-Flury株的全长质粒为模板,采用PCR方法扩增获得去除信号肽基因的GP(G1)、GP的膜外区基因(G2)。选取膜外区基因中抗原表位富集区基因,对氨基酸密码子进行修饰并合成其序列(G3)。分别将G1、G2及G3基因亚克隆到表达载体pET32a(+),构建融合表达质粒pET32a-G1、pET32a-G2及pET32a-G3,转化表达宿主菌BL21,并利用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE,Western-blotting和薄层扫描分析,比较重组蛋白的表达量。结果 G3基因的表达量比G1、G2基因明显提高。结论通过密码子优化,能显著提高G基因在原核细胞中的表达水平。; 关键词狂犬病病毒:糖蛋白基因基因修饰原核表达; Keywords rabies virus glycoprotein gene gene modification prokaryotic expression; 分类号 R373.9 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：2: 4; 作者罗飞陈义平陆明哲彭大新周洁李宇琴徐宝娟南文龙; 机构中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究室扬州大学兽医学院; 出处《中国动物检疫》 CAS 2009年第12期27-28,36,共3页; 基金 "十一五"国家科技支撑项目(2006BAD6A13); 文摘参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量约为42.4KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析表明,表达量约占菌体蛋白的60.5%。利用His亲和层析方法得到了纯化的表达产物。Western blotting结果显示,重组蛋白能与阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原反应原性,可以作为检测用抗原。; 关键词猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB 主要抗原表位原核表达; Keywords pseudorabies virus envelope glycoprotein gB major epitope domain prokaryotic expression; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化: 5; 作者鞠美芳殷相平柳纪省; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期932-937,共6页; 基金兰州市生物医药专项(2011-1-61)~~; 文摘目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回收后连接并转化至Rosetta(DE3)菌株。挑选阳性重组表达菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。同时对最佳表达条件进行了研究,重组菌在30℃、IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值。结果狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区通过密码子优化后能够在大肠杆菌中成功表达,表达产物具有良好的反应原性。结论该项研究为后续检测狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的研发建立基础。; 关键词狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化原核表达; Keywords rabies virus glycoprotein extracellular domain codon optimization prokaryotic expression; 分类号 R373.9 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化: 6; 作者鞠美芳殷相平柳纪省; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期114-119,共6页; 基金兰州市生物医药专项(2011-1-61); 文摘旨在有效检测狂犬病毒抗原及抗体。以狂犬病病毒aG株为模板,反转录扩增糖蛋白膜外区基因,并进行序列测定。将目的片段与表达载体pET-32a(+)分别双酶切、胶回收后相连并转化至Rosseta(DE3)菌株。选取阳性克隆经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting及质谱鉴定。结果显示,在大肠杆菌中成功表达了糖蛋白膜外区。本研究为建立检测狂犬病毒抗原及抗体的ELISA诊断方法奠定了基础。; 关键词狂犬病病毒糖蛋白膜外区原核表达; Keywords rabies virus glycoprotein extracellular domain prokaryotic expression; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备	薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达	罗飞李宇琴周洁南文龙陆明哲陈义平	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2011	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达	郑佳琳江飙郭霄峰	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达	罗飞陈义平陆明哲彭大新周洁李宇琴徐宝娟南文龙	《中国动物检疫》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化	鞠美芳殷相平柳纪省	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化	鞠美芳殷相平柳纪省	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料