恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见病

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作者 赵龙飞 韩煜茹 +1 位作者 王万兴 蔡树东 《现代畜牧兽医》 2025年第2期27-30,共4页

试验旨在探究恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见3类疾病(病毒类、细菌类、寄生虫类)的应用效果。试验随机抽取3份虾苗样品,每份样品15~20头,采用RT-PCR法检测肝胰腺细小病毒(HPV)、对虾杆状病毒(BPV),恒温荧光法检测致急性肝胰腺... 试验旨在探究恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见3类疾病(病毒类、细菌类、寄生虫类)的应用效果。试验随机抽取3份虾苗样品,每份样品15~20头,采用RT-PCR法检测肝胰腺细小病毒(HPV)、对虾杆状病毒(BPV),恒温荧光法检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(AHPND))、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、黄头病毒(YHV)、虹彩病毒(DIVI)、哈维氏弧菌(HVS)、桃拉病毒(TSV)、虾肝肠胞虫(EHP)、白斑综合征病毒(WSSV)。结果显示,恒温荧光法检测Vp_(AHPND)、IHHNV、YHV、DIVI、TSV、HVS、WSSV、EHP等8种病原结果均为阴性,凝胶电泳试验中未出现HPV、BPV条带,表明虾苗未携带上述病原。研究表明,RT-PCR法与恒温荧光法可快速有效地检测南美白对虾虾苗病原携带情况。 展开更多

关键词 南美白对虾 恒温荧光法 rt-pcr法

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用RT-PCR法检测食品中诺沃克样病毒 被引量：9

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作者 陈广全 饶红 +2 位作者 张惠媛 付溥博 冯骞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期106-112,共7页

使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去... 使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去RTPCR抑制剂。此富集方法的回收率为135%。另外,对不同的RNA提取方法的灵敏度进行了比较,最终确认硅胶膜法为简便、快速、有效的RNA提取方法。并且,使用了Superscript反转录酶进行反转录,提高了检测的灵敏度。选用了289和290混合引物进行食品中NLVs的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLVs,扩增出1个319bp的特异性片段。通过以上条件的优化,建立了通过RTPCR检测贝类中NLVs的有效方法。该方法的NLVs最低检出限为10×103RT-PCR50/15g。对32件贝类样品进行了NLVs的检测,其中2份毛蚶中被检出NLVs。 展开更多

关键词 诺沃克样病毒 rt-pcr法 CHC 检出 抑制剂 食品 检测 贝类 RNA提取方法 引物

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用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因 被引量：30

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作者 高隆英 史秀杰 +1 位作者 刘荭 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期452-456,共5页

用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV... 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 展开更多

关键词 rt-pcr法 快速检测 鲤春病毒血症 病毒基因 鱼病

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竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达 被引量：4

4

作者 张晓杰 鲁纯平 +2 位作者 唐建华 顾善兰 禹虹 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期322-326,共5页

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ... 目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。 展开更多

关键词 竞争性rt-pcr法 定量检测 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因 表达 白血病

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RT-PCR法研究soni chedgehog基因及其受体patched在小鼠牙胚钟状晚期的表达 被引量：1

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作者 周彦秋 林久祥 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期137-139,共3页

目的 :判断sonichedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达。 方法 :用RT PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达。设计Shh及其受体Ptc的PCR引物 ;选取新生鼠第 1天 (P1)、第 3天 (P3)、第 7天 (... 目的 :判断sonichedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达。 方法 :用RT PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达。设计Shh及其受体Ptc的PCR引物 ;选取新生鼠第 1天 (P1)、第 3天 (P3)、第 7天 (P7)的牙胚为研究对象 ,提取总RNA。两步法进行RT PCR反应 ,10 g·L- 1 琼脂糖电泳观察。结果 :出生后第 1天、第 3天、第 7天小鼠牙胚RT PCR产物可见Shh、Ptc条带。结论 :Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期有表达。 展开更多

关键词 rt-pcr法 研究 sonichedgehog基因 受体 PATCHED 小鼠 牙胚钟状 晚期 表达

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RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达 被引量：1

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作者 姜耀东 郑少斌 王战会 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期99-101,共3页

目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾... 目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。 展开更多

关键词 rt-pcr法 检测 肾癌 MN/CAⅨ 基因表达 聚合酶链反应 碳酸酐酶Ⅸ

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用RT-PCR法对猪瘟病毒检测的研究 被引量：11

7

作者 乔军 陈创夫 +1 位作者 高丰 贾桂珍 《塔里木农垦大学学报》 2001年第4期25-27,共3页

用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取病料细胞总RNA并进行反转录 ,再以此产物为模板对CSFV可疑病料进行了PCR扩增。结果用CSFV特异性引物扩增能得到与设计片段大小相同的产物 (2 72bp) ,并且不扩增猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的核酸 ;... 用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取病料细胞总RNA并进行反转录 ,再以此产物为模板对CSFV可疑病料进行了PCR扩增。结果用CSFV特异性引物扩增能得到与设计片段大小相同的产物 (2 72bp) ,并且不扩增猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的核酸 ;其敏感性要高于猪瘟荧光抗体染色法、猪瘟强弱毒酶标单克隆抗体染色法和电镜负染法 ,为临床上猪瘟的诊断提供了一个快速、有效的诊断方法。 展开更多

关键词 rt-pcr法 猪瘟病毒 检测 诊断 异硫氰酸胍-酚-仿一步抽提法

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RT-PCR法检测肺癌患者区域性淋巴结微转移的临床病理相关性分析

8

作者 葛明建 王梅 +1 位作者 李良彬 张玉洪 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第3期164-166,共3页

目的　分析RT PCR法检测区域性淋巴结中肺癌微转移的临床病理相关性。方法　区域性淋巴结共 2 61枚 ,取自 40例接受手术治疗的原发性肺癌患者 ,将每枚淋巴结均分为两等份 ,分别进行病理学检测和细胞骨架角蛋白 19(CK1 9)基因的表达分析... 目的　分析RT PCR法检测区域性淋巴结中肺癌微转移的临床病理相关性。方法　区域性淋巴结共 2 61枚 ,取自 40例接受手术治疗的原发性肺癌患者 ,将每枚淋巴结均分为两等份 ,分别进行病理学检测和细胞骨架角蛋白 19(CK1 9)基因的表达分析。结果　 18例患者同时被病理检查和RT PCR法证实存在淋巴结转移 ;另 2 2例病理学检查未检测到淋巴结转移 ,但RT PCR法检测到其中 6例存在淋巴结肺癌微转移。40例患者中 ,RT PCR法显示淋巴结转移与肿瘤大小、癌肿侵犯血管、肿瘤分化等级和肿瘤的P TNM分期有密切关系 (P <0 .0 5 )。 2 2例病理检查未发现淋巴结转移的患者中 ,淋巴结微转移与肿瘤大小和肿瘤的P TNM分期有密切关系 (P <0 .0 5 )。普通病理检查则显示淋巴结转移与否与患者的各临床病理指标之间无明显关系。结论　RT PCR法在检测淋巴结转移方面较普通病理检查优越 ,它能准确地检测到存在于淋巴结中的肿瘤微小转移灶 。 展开更多

关键词 rt-pcr法 肺癌 淋巴结转移 肺肿瘤 诊断 聚合酶链反应

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RT-PCR法检测软组织肿瘤石蜡包埋组织中小片段mRNA

9

作者 魏永昆 孙孟红 +1 位作者 王坚 朱雄增 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期430-431,共2页

关键词 rt-pcr法 检测 软组织肿瘤 石蜡包埋组织 小片段 MRNA

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RT-PCR法快速鉴别新城疫强弱毒株的试验 被引量：4

10

作者 俞宁 岳华 《四川畜牧兽医》 2005年第5期25-26,28,共3页

通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快... 通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便的特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。 展开更多

关键词 强弱毒株 rt-pcr法 新城疫 快速鉴别 反转录-聚合酶链式反应 流行病学调查 核苷酸序列 组织匀浆液 设计合成 序列差异 裂解位点 快速诊断 试验过程 诊断方法 鉴别诊断 NDV F基因 检测 适用 毒力 鸡胚 病鸡

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荧光RT-PCR法与病毒分离法检测NDV的研究

11

作者 田国宁 张金玲 +1 位作者 张丽萍 韩亮 《山东畜牧兽医》 2005年第6期5-6,共2页

分别用荧光RT-PCR检测方法和病毒分离方法对364份不同样品进行NDV对比检测试验,结果运用RT-PCR方法可在4h内从364份样品中检出NDV阳性28份,而病毒分离方法检出NDV阳性29份,但需时间至少为21d。两种方法阳性重复率为100%。与病毒分离方... 分别用荧光RT-PCR检测方法和病毒分离方法对364份不同样品进行NDV对比检测试验,结果运用RT-PCR方法可在4h内从364份样品中检出NDV阳性28份,而病毒分离方法检出NDV阳性29份,但需时间至少为21d。两种方法阳性重复率为100%。与病毒分离方法比较,荧光RT-PCR方法不仅可大大缩短检测时间,而且具有特异、敏感的特性。 展开更多

关键词 新城疫病毒 荧光rt-pcr法 病毒分离法 NDV 症状表现

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液相芯片和RT-PCR法在转移性肺癌EGFR突变检测中的比较 被引量：4

12

作者 陈刚 师怡 +2 位作者 何诚 王晓江 郑雄伟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期275-278,共4页

目的通过液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因突变的一致性,探讨适用于临床转移性肺癌患者EGFR基因的突变检测法。方法收集47例转移性肺癌患者锁骨上肿物细针穿刺吸取物,经反复离心后取沉淀细胞行石蜡包埋,常规HE染色和免疫组化Multimer染... 目的通过液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因突变的一致性,探讨适用于临床转移性肺癌患者EGFR基因的突变检测法。方法收集47例转移性肺癌患者锁骨上肿物细针穿刺吸取物,经反复离心后取沉淀细胞行石蜡包埋,常规HE染色和免疫组化Multimer染色,利用液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因19和21外显子的热点突变并进行分析。结果47例转移性肺癌患者中15例检测到EGFR基因突变,突变率为31.9%,其中6例为外显子19缺失突变,9例为外显子21点突变。两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变检测结果完全一致。结论锁骨上吸取肿物可作为转移性肺腺癌患者EGFR基因突变的检测标本,且突变类型主要为外显子21点突变。液相芯片法和RT-PCR法均可作为转移性肺癌患者EGFR基因突变的检测法。 展开更多

关键词 肺肿瘤 转移性 EGFR基因 液相芯片法 rt-pcr法 免疫组织化学

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涎腺类乳腺分泌性癌：对25例标准RT-PCR法未能检出ETV6-NTRK3融合基因病例的进一步分子分析：4例存在ETV6-X融合基因 被引量：21

13

作者 Skálová A Vanecek T +2 位作者 Simpson R H 胡舜 余英豪 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期591-591,共1页

ETV6基因异常在肿瘤病理学已有完整描述，据文献报道不同的上皮性肿瘤和血液系统恶性肿瘤可检出多种ETV6融合基因伴侣。在涎腺肿瘤病理中，ETV6-NTRK3易位被认为是乳腺分泌性癌的特异性改变，而在其他类型的涎腺肿瘤中均木见报道。

关键词 乳腺分泌性癌 涎腺肿瘤 融合基因 rt-pcr法 分子分析 基因病例 血液系统恶性肿瘤 肿瘤病理学

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涎腺类乳腺分泌性癌:采用标准RT-PCR法未能检出25例ETV6-NTRK3融合基因的进一步分子分型(4例存在ETV6-X融合基因) 被引量：13

14

作者 Skálová A Vanecek T +2 位作者 Simpson R H 胡舜 余英豪 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期286-286,共1页

ETV6基因异常在肿瘤病理学中已有完整描述。据文献报道，不同的上皮性肿瘤和血液系统恶性肿瘤可检出多种ETV6融合基因伴侣。在涎腺肿瘤病理中，ETV6-NTRK3易位被认为是类乳腺分泌性癌（MASC）的特异性改变，而在其他类型的涎腺肿瘤中均... ETV6基因异常在肿瘤病理学中已有完整描述。据文献报道，不同的上皮性肿瘤和血液系统恶性肿瘤可检出多种ETV6融合基因伴侣。在涎腺肿瘤病理中，ETV6-NTRK3易位被认为是类乳腺分泌性癌（MASC）的特异性改变，而在其他类型的涎腺肿瘤中均未见报道。 展开更多

关键词 乳腺分泌性癌 融合基因 涎腺肿瘤 rt-pcr法 分子分型 血液系统恶性肿瘤 肿瘤病理学 标准

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RT-PCR法检测MUC1 mRNA诊断肺癌纵隔淋巴结隐匿转移 被引量：8

15

作者 王洲 殷洪年 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第3期191-193,共3页

目的　探讨对常规病理检查漏诊的肺癌纵隔淋巴结转移病灶的诊断方法。方法　应用逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,检测pN0 1 期非小细胞肺癌患者 (NSCLC)纵隔淋巴结中MUC1基因mRNA的表达。结果　 5枚肺良性疾病的局部淋巴结无MUC1基因m... 目的　探讨对常规病理检查漏诊的肺癌纵隔淋巴结转移病灶的诊断方法。方法　应用逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,检测pN0 1 期非小细胞肺癌患者 (NSCLC)纵隔淋巴结中MUC1基因mRNA的表达。结果　 5枚肺良性疾病的局部淋巴结无MUC1基因mRNA表达 ,5枚经病理检查证实有淋巴结转移癌的NSCLC纵隔淋巴结中均检测到MUC1mRNA表达。实验组 19例患者的 78枚纵隔淋巴结中有 6枚检测到MUC1mRNA表达 ,从而诊断为纵隔淋巴结隐匿转移。结论　应用RT 展开更多

关键词 rt-pcr法 诊断 肺癌 纵隔淋巴结隐匿转移

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牛病毒性腹泻病毒一步法.RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：8

16

作者 于新友 李天芝 沈志强 《中国奶牛》 2015年第9期27-29,共3页

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′端非编码区基因保守序列设计引物,建立了检测BVDV一步法反转录-聚合酶链(RT-PCR)方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。结果表明,该方法对BVDV检测的灵敏度达到1pg RNA,特异性强、敏感性高,可用于牛病毒... 根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′端非编码区基因保守序列设计引物,建立了检测BVDV一步法反转录-聚合酶链(RT-PCR)方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。结果表明,该方法对BVDV检测的灵敏度达到1pg RNA,特异性强、敏感性高,可用于牛病毒性腹泻病的早期确诊和病毒鉴定。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 一步法rt-pcr法 检测

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禽流感病毒三种病原学检测方法的比较研究 被引量：1

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作者 陈弟诗 陈斌 +3 位作者 章健 邱明双 邓飞 王泽洲 《四川畜牧兽医》 2019年第4期27-30,共4页

为了分析比较不同的商品化检测方法在禽流感病毒快速诊断中的实用性,本试验运用禽流感高敏快速荧光免疫法、胶体金免疫层析纸条法和实时荧光RT-PCR三种方法同时对禽流感病毒H5、H7和H9三个亚型抗原各12个稀释度的样本进行检测。结果表明... 为了分析比较不同的商品化检测方法在禽流感病毒快速诊断中的实用性,本试验运用禽流感高敏快速荧光免疫法、胶体金免疫层析纸条法和实时荧光RT-PCR三种方法同时对禽流感病毒H5、H7和H9三个亚型抗原各12个稀释度的样本进行检测。结果表明,禽流感高敏快速荧光免疫法对三种亚型抗原的灵敏度较高,各亚型检出最低稀释度分别为H5:1∶2 560,H7:1∶1 280,H9:1∶640,该方法快捷简便,且设备便携,通过云平台处理数据,适用于现场即时检测(POCT)等;进口胶体金免疫层析纸条法对H5、H9亚型抗原的灵敏度高,对H7亚型抗原的灵敏度较低,且国内产品存在假阳性、准确性较低等缺点,但均操作简单,适用于基层初筛;实时荧光RT-PCR法对三种亚型抗原的灵敏度高,稀释度均可达1∶40 960以上,但耗时长,设备和技术要求相对较高,更适用于实验室确诊。 展开更多

关键词 禽流感病毒 高敏快速荧光免疫法 胶体金免疫层析纸条法 实时荧光rt-pcr法

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应用RT-PCR检测动物组织中病毒的点滴体会

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作者 李志荣 刘子芝 +1 位作者 高福奎 赵勇 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第4期31-31,共1页

关键词 乳鼠 体会 点滴 IHA法 rt-pcr检测 rt-pcr法 脊髓 动物组织 防疫工作 检疫

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miRNA qPCR检测方法研究进展及其应用 被引量：4

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作者 冯世鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期59-69,共11页

miRNA是目前国际研究的热点领域之一,而miRNA表达检测是miRNA研究的基础内容。针对miRNA序列短小的特点,开发出了多种检测方法,其中miRNA qPCR定量检测是应用最广泛的方法。就miRNA抽提,miRNA qPCR定量检测原理及miRNA qPCR定量检测流... miRNA是目前国际研究的热点领域之一,而miRNA表达检测是miRNA研究的基础内容。针对miRNA序列短小的特点,开发出了多种检测方法,其中miRNA qPCR定量检测是应用最广泛的方法。就miRNA抽提,miRNA qPCR定量检测原理及miRNA qPCR定量检测流程包括引物设计、反应体系设置、内参基因筛选等方面进行了深入探讨,并对miRNA定量检测研究方法的发展趋势进行了展望,以期为研究者进行miRNA qPCR定量检测提供参考。 展开更多

关键词 MIRNA STEM-LOOP rt-pcr poly(A)加尾法rt-pcr 延伸法rt-pcr 数字PCR

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RT一PCR法制备NGFcDNA 被引量：1

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作者 李贤慧 杨世杰 石育原 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第3期233-234,共2页

本研究直接以新生１８～２１天龄的小鼠脑的全ＲＮＡ（含ＮＧＦｍＲＮＡ）为底物，进行逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ一ＰＣＲ），制备出了神经生长因子（ＮＧＦ）的ｃＤＮＡ片段。用ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序分析表明，所制备的Ｎ... 本研究直接以新生１８～２１天龄的小鼠脑的全ＲＮＡ（含ＮＧＦｍＲＮＡ）为底物，进行逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ一ＰＣＲ），制备出了神经生长因子（ＮＧＦ）的ｃＤＮＡ片段。用ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序分析表明，所制备的ＮＧＦｃＤＮＡ片断为３６３ｂｐ，与编码成熟ＮＧＦ的ｍＲＮＡ碱基顺序相对应。直接利用全ＲＮＡ进行ＲＴ与ＰＣＲ一步联合反应，不仅简化了实验步骤，而且最大程度地减少了样品的需要量，减小了样品可能损失或破坏的机率，提高了反应效率。 展开更多

关键词 rt-pcr法 神经生长因子 CDNA 聚合酶链反应 制备

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