鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：10

1

作者 李庆阳 陈芳艳 +6 位作者 刘平 谢永福 冯金牛 况少祥 陈瑞爱 唐秀英 王林川 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第7期18-22,共5页

根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32... 根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 TAQMAN探针 荧光定量rt—pcr

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小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14

2

作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 高华峰 王金萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期65-71,共7页

为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测... 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示,所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV,产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPVITR的pMD18-T载体质粒为标准品,构建了二联标准曲线,N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达102和103拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 山羊痘病毒 二联实时荧光定量rt—pcr 探针

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PCR荧光探针法检测4种生殖道病原体的结果分析 被引量：8

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作者 刘意 冯霞 +4 位作者 李宇 魏虹娟 张立丽 何盼 娄金丽 《临床检验杂志》 CAS 2022年第2期126-128,共3页

目的探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率,评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道... 目的探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率,评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道分泌物1738例、血液标本227例,采用PCR荧光探针法进行解脲脲原体、淋球菌、沙眼衣原体、单纯性疱疹病毒-2型检测,并同时采用培养法检测解脲脲原体、淋球菌;胶体金法检测沙眼衣原体;ELISA法检测单纯性疱疹病毒-2抗体,对PCR荧光探针法及其他3种方法检测结果进行分析。结果478例PCR荧光探针法和培养法同时检测解脲脲原体中,PCR荧光探针法检测阳性率[38.7%(185/478)]略低于培养法检测阳性率[39.96%(191/478)],差异无统计学意义(P>0.05);654例PCR荧光探针法和胶体金法同时检测沙眼衣原体中,PCR荧光探针法检测阳性率[7.34%(48/654)]高于胶体金法检测阳性率[3.21%(21/654)],差异有统计学意义(P<0.001);379例PCR荧光探针法和培养法同时检测淋球菌中,PCR荧光探针法检测阳性率[9.50%(36/379)]略高于培养法检测阳性率[7.65%(29/379)],差异无统计学意义(P>0.05);227例PCR荧光探针法和ELISA法同时检测单纯性疱疹病毒-2型中,PCR荧光探针法检测阳性率[3.52%(8/227)]低于ELISA法检测阳性率[10.57%(24/227)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCR荧光探针法可提高衣原体、淋球菌检出率,可用于解脲脲原体特异性检测和单纯性疱疹病毒-2型现症感染检测。 展开更多

关键词 解脲脲原体 pcr荧光探针法 淋球菌 生殖道病原体

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鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 孔刚锐 吴志明 +7 位作者 闫若潜 赵明军 王东方 赵雪丽 闫志玲 程俊贞 陈慧娟 靳利粉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页

据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条... 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。 展开更多

关键词 高 低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重实时荧光定量rt—pcr TAQMAN MGB荧光探针 检测 应用

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实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌 被引量：12

5

作者 荣策 赵彤彤 +3 位作者 许龙岩 刘宇 那晗 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2012年第4期300-305,共6页

目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对... 目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。 展开更多

关键词 实时荧光pcr法 鼠伤寒沙门氏菌 TAQMAN探针 沙门氏菌属

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Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

6

作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期69-72,共4页

根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量pcr TaqMan探针法

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Taqman MGB探针快速定量检测VHSV方法的研究 被引量：6

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作者 许建明 张念之 +2 位作者 蒋一男 张利峰 夏春 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期208-213,共6页

为建立准确实时地定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV),在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对,随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了绝对定量(AQ)检测VHSV的实时荧光RT-PCR法(AQ-RT-PC... 为建立准确实时地定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV),在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对,随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了绝对定量(AQ)检测VHSV的实时荧光RT-PCR法(AQ-RT-PCR方法),并与世界动物卫生组织(OIE)推荐的普通RT-PCR法进行了比较。此荧光RT-PCR法特异性好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。检测线性范围为10^(10)～10~2拷贝/反应,灵法度达10~2拷贝/反应。此检测灵敏度比OIE推举的RT-PCR法高出5个数量级,比嵌套RT-PCR高出1个数量级。此法是出入境检疫VHSV的有效方法。 展开更多

关键词 病毒性出血性败血症病毒(VHSV) TAQMAN MGB探针 荧光rt—pcr法 定量检测

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烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建 被引量：3

8

作者 吴彦辉 蒲团卫 +4 位作者 张生杰 牛龙龙 白静科 李成军 李建华 《安徽农业科学》 CAS 2023年第12期171-175,共5页

[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结... [目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×10^(1) copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R^(2))为0.9933,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。 展开更多

关键词 烟草花叶病毒 实时荧光定量pcr TaqMan探针法

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羊乳中动物源性成分的实时荧光PCR检测 被引量：2

9

作者 张艳茹 《食品安全导刊》 2020年第6期91-92,共2页

建立Taqman探针实时荧光PCR检测方法。选择牛、羊线粒体16SrRNA靶序列,设计合成引物和探针,鉴别羊乳制品中的羊乳成分。结果表明,该方法最低可检测掺入2.0%牛源性成分的羊奶制品,具有灵敏、快速、高效以及高通量等优势,可作为羊奶制品... 建立Taqman探针实时荧光PCR检测方法。选择牛、羊线粒体16SrRNA靶序列,设计合成引物和探针,鉴别羊乳制品中的羊乳成分。结果表明,该方法最低可检测掺入2.0%牛源性成分的羊奶制品,具有灵敏、快速、高效以及高通量等优势,可作为羊奶制品羊乳成分掺假鉴别手段之一。 展开更多

关键词 羊乳制品掺假 牛乳 实时荧光pcr Taqman探针法

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3种qPCR检测柑桔黄龙病的灵敏度研究 被引量：3

10

作者 赵培娅 卢占军 +4 位作者 黄爱军 高玉霞 丁鹏 刘映雪 Umbreen Shahzad 《中国南方果树》 北大核心 2016年第2期33-37,共5页

把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLB... 把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLBp探针法可以从稀释105倍的阳性叶片核酸样品(病菌拷贝数约为60个)中检测到病原菌,高于CQULAP探针法和SYBR Green染料法。将3种qPCR检测体系用于赣州安远县、寻乌县和赣县送检的60份田间样品检测,结果发现,HLBp探针法的阳性率为86.7%,CQULAP探针的阳性率为60.0%,SYBR Green染料法的阳性率为68.3%。 展开更多

关键词 柑桔黄龙病 TaqMan水解探针 SYBR Green染料法 实时荧光定量pcr 灵敏度

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不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值

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作者 孙艳丽 杨阳 郭秋杰 《四川生理科学杂志》 2023年第3期377-380,共4页

目的:比较PCR荧光探针法、乳胶法、培养法及ELISA法对生殖道分泌物中淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)、沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis,CT)及单纯性疱疹病毒2型(Herpes Simplex Virus ... 目的:比较PCR荧光探针法、乳胶法、培养法及ELISA法对生殖道分泌物中淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)、沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis,CT)及单纯性疱疹病毒2型(Herpes Simplex Virus type 2,HSV-2)的检出率,分析其结果差异和应用价值。方法:选取2021年1月至2022年5月我院性病门诊就诊的100例患者作为研究对象。采用PCR荧光探针法对NG、Uu、CT、HSV-2进行检测,同时采用培养法检测Uu、NG;胶体金法检测CT;ELISA法检测HSV-2,并将PCR荧光探针法与其他3种方法检测结果进行比较分析。结果:在NG、Uu、CT的检测结果中,PCR荧光探针法NG、Uu阳性率与培养法无明显差异(P>0.05),PCR荧光探针法CT结果阳性率明显高于胶体金法(P<0.05)。在检测HSV-2的结果中,PCR荧光探针法阳性率明显低于ELISA(P<0.05)。结论:与胶体金法、ELISA法相比,PCR荧光探针法可显著提高CT、HSV-2检出率,且与培养法NG、Uu的检出率相近,有助于临床实施早期诊断并及时治疗。 展开更多

关键词 pcr荧光探针法 淋病奈瑟菌 解脲脲原体 沙眼衣原体

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107例儿童手足口病临床及病原学分析 被引量：5

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作者 杨晓红 庄宇 +1 位作者 董小飞 温柏平 《浙江临床医学》 2009年第12期1283-1285,共3页

目的了解2009年手足口病流行期间患病儿童的病原类型，并探讨RT～PCR荧光探针法检测手足151病流行期间病毒的可行性。方法采用RT—PCR荧光探针法对107例手足口病患儿血标本进行检测。结果本组107例手足口病患儿以EV71病毒感染为主，占72... 目的了解2009年手足口病流行期间患病儿童的病原类型，并探讨RT～PCR荧光探针法检测手足151病流行期间病毒的可行性。方法采用RT—PCR荧光探针法对107例手足口病患儿血标本进行检测。结果本组107例手足口病患儿以EV71病毒感染为主，占72．9％，CA16占27．1％；好发于4岁以下儿童，占72．9％；应用RT—PCR荧光探针法检出率高，可早期、快速检测手足口病病原体。结论2009年5～6月间本院收治的手足口病患儿以EV71病毒感染为主；好发年龄1～4岁。应用RT—PCR荧光探针法特异性强，可早期、快速、准确的检测出病原体，达到早发现、早治疗、早控制的目的，是手足口病流行期间大批量标本检测的首选方法。 展开更多

关键词 手足口病 EV71 CA16 rt—pcr荧光探针法

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