烟草环斑病毒DB-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量：11

1

作者 郑耘 杨伟东 +4 位作者 陈枝楠 李明福 章桂明 余道坚 张永江 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期117-120,共4页

本研究首次应用直接结合反转录实时荧光PCR技术(direct binding reverse transcription realtime PCR,DB-RT-Re-altime PCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了PCR管吸附病毒外壳蛋白、病毒核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,... 本研究首次应用直接结合反转录实时荧光PCR技术(direct binding reverse transcription realtime PCR,DB-RT-Re-altime PCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了PCR管吸附病毒外壳蛋白、病毒核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,从而使病毒检测在特异性、灵敏度、稳定性等技术指标上比传统的DAS-ELISA方法都有所提高,解决了烟草环斑病毒检测工作中由于隐症、干扰物质存在而影响检测结果的问题,为病毒检测提供了一个快速、简便有效的检测方法。 展开更多

关键词 烟草环斑病毒 反转录pcr 检测

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一步法RT-PCR检测烟草环斑病毒试剂盒的研制与应用 被引量：5

2

作者 张永江 李明福 +1 位作者 黄冲 相宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第10期2072-2073,共2页

根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明... 根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明,该试剂盒在常温、4℃和-20℃下可分别保存2d、7d和60d;灵敏度是DAS-ELISA的100倍;质量控制试验结果一致,具有较高的重复性。 展开更多

关键词 一步法rt—pcr 烟草环斑病毒 检测 试剂盒

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黄瓜上烟草花叶病毒的RT-PCR检测 被引量：5

3

作者 王惠哲 李淑菊 +1 位作者 庞金安 霍振荣 《天津农业科学》 CAS 2004年第2期11-13,共3页

根据烟草花叶病毒TMV的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板进行cDNA合成和PCR扩增,对2002年采集的75份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的425bp大小一致的目标片段而健康组织无此... 根据烟草花叶病毒TMV的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板进行cDNA合成和PCR扩增,对2002年采集的75份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的425bp大小一致的目标片段而健康组织无此扩增产物;29份材料检测到TMV,检出率达38.67%。 展开更多

关键词 黄瓜 烟草花叶病毒 rt—pcr检测 扩增产物

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应用分子生物学方法快速检测烟草环斑病毒 被引量：1

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作者 吴兴海 陈长法 +2 位作者 张云霞 邵秀铃 刘爱华 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第3期66-68,共3页

根据烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus)CP基因序列,设计并合成了特异性RT-PCR扩增引物,对烟草环斑病毒和非烟草环斑病毒的感病植物组织样本进行了PCR扩增反应。结果,烟草环斑病毒的感病植物组织样本的PCR产物均出现1 760 bp的特异... 根据烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus)CP基因序列,设计并合成了特异性RT-PCR扩增引物,对烟草环斑病毒和非烟草环斑病毒的感病植物组织样本进行了PCR扩增反应。结果,烟草环斑病毒的感病植物组织样本的PCR产物均出现1 760 bp的特异性扩增条带,而非感病植株组织样本均未出现扩增条带,证明该合成引物具有烟草环斑病毒鉴定特异性。将提取的烟草环斑病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果可检出烟草环斑病毒RNA模板最低浓度为234 pg/μl。研究表明,分子生物学测定具有特异性强、灵敏度高、快速准确的特点,可应用于烟草环斑病毒检疫的快速检测。 展开更多

关键词 分子生物学 rt—pcr烟草环斑病毒 检疫检测

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进境大豆种子中烟草环斑病毒的快速检测 被引量：5

5

作者 闻伟刚 崔俊霞 盛蕾 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期748-751,共4页

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是进境大豆种子必须检疫的项目,属于我国禁止入境的二类检疫性有害生物,本文建立了大豆种子中TRSV的快速检测方法。采用Trizol试剂直接提取大豆种子总RNA,通过RT-PCR扩增得到359 bp特异性产... 烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是进境大豆种子必须检疫的项目,属于我国禁止入境的二类检疫性有害生物,本文建立了大豆种子中TRSV的快速检测方法。采用Trizol试剂直接提取大豆种子总RNA,通过RT-PCR扩增得到359 bp特异性产物。该产物经半巢式PCR进一步验证得到206 bp特异性片段,经测序及同源性比较表明,片段序列与GenBank中登录的TRSV外壳蛋白基因部分序列存在92%～96%的同源性,而未见与其它基因序列存在同源性。同时,大豆种子样品经DAS-ELISA复核检测结果显示TRSV阳性反应。因此,判定该批进境大豆种子携带TRSV。 展开更多

关键词 大豆 烟草环斑病毒 快速检测 rt—pcr 半巢式pcr

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双重一步法RT-PCR检测2种主要兰花病毒 被引量：6

6

作者 柳爱春 赵芸 +1 位作者 刘超 张乐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12960-12961,13009,共3页

[目的]研究建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)双重一步法RT-PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT-PCR对比试验。[结果]结果在... [目的]研究建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)双重一步法RT-PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT-PCR对比试验。[结果]结果在健康蜘蛛兰被人工接种病毒后第10天和第21天用一步法RT-PCR方法分别获得CymMV和ORSV与预期相符的约764和946 bp扩增产物条带;且双重一步法RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,出现两条与单一RT-PCR产物相对应的清晰条带,获得较理想的检出效果;扩增产物的核酸序列经BLAST分析,同源性均在85%以上,证实了检测结果的准确性。[结论]该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,适合于两种主要兰花病毒的同时快速检测。 展开更多

关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 双重一步法rt—pcr

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同步检测为害非洲菊3种病毒的多重RT-PCR方法研究 被引量：3

7

作者 张丽莉 杨翠云 +2 位作者 于翠 袁文辉 马青 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期20-24,共5页

以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 m... 以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 mg的带毒叶片中检测到混合病毒;同时对单一病毒RT-PCR的灵敏度检测表明:最低可以从RNA含量分别为1 mg、10μg和100ng的带毒材料中检测到TSWV、TRV和TMV。 展开更多

关键词 番茄斑萎病毒 烟草脆裂病毒 烟草花叶病毒 多重rt—pcr 非洲菊

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李属坏死环斑病毒怀柔分离物(PNRSV-HR)外壳蛋白基因片断的克隆与序列分析 被引量：7

8

作者 黄冲 李明福 张永江 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第B08期105-108,共4页

应用RT-PCR方法检测了采自北京市怀柔区的樱桃叶片,将此PCR扩增产物连接到pMD18-T载体上,通过转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,克隆了含有目的片段的重组质粒,并进行序列测定和分析。序列分析结果表明,认为该分离物外壳蛋白基因片断与李属... 应用RT-PCR方法检测了采自北京市怀柔区的樱桃叶片,将此PCR扩增产物连接到pMD18-T载体上,通过转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,克隆了含有目的片段的重组质粒,并进行序列测定和分析。序列分析结果表明,认为该分离物外壳蛋白基因片断与李属坏死环斑病毒的NRSiz8株系的同源性最高,为98%,与德国分离物Ring17的同源性达99%;通过进化关系分析,认为该分离物属于引起温和症状的group,认为该分离物的第5,62,81和126位氨基酸也与CH9血清型引起温和症状的保守的替换相同。 展开更多

关键词 李属坏死环斑病毒(PNRSV) rt—pcr 克隆 序列分析

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齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒分子检测研究 被引量：5

9

作者 闻伟刚 谭钟 +1 位作者 崔俊霞 陈先锋 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期65-69,共5页

齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4种方法进行了检测研究与比较。结果表明:普通RT-PCR与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式RT-PCR检测灵敏度要比普通RT-PCR与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获RT-PCR检测灵敏度介于普通RT-PCR和巢式RT-PCR之间。采用巢式RT-PCR方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100%的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。 展开更多

关键词 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 巢式rt—pcr 免疫捕获rt-pcr 检测灵敏度

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李属坏死环斑病毒(PNRSV)新疆巴旦木分离物外壳蛋白基因(CP)片断的克隆与序列分析 被引量：4

10

作者 殷智婷 韩剑 +3 位作者 周国辉 张祥林 罗明 潘亚南 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-746,共7页

【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)R... 【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)RT-PCR扩增,对预期430 bp大小的4个扩增产物进行克隆、测序和序列分析。【结果】结果表明,PNRSV新疆巴旦木分离物CP基因的核苷酸和氨基酸序列与世界各地已报道的分离物具有较高的同源性,分别为80.0%～97.2%和80.1%～94.1%,其中与阿根廷分离物AY217的同源性最高;而与同属03亚组的苹果花叶病毒(ApMV)同源性较低,仅为52.9%～55.4%和45.6%～48.6%。新疆PNRSV各分离物之间CP基因高度同源。序列比对与系统发生树的分析显示,PNRSV新疆巴旦木分离物的株系属于GroupⅠ组。【结论】确定了PNRSV为侵染新疆巴旦木果树的病原病毒。这是PNRSV在新疆发现的首次报道。 展开更多

关键词 巴旦木 李属坏死环斑病毒(PNRSV) 双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS—ELISA) rt—pcr CP基因

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番木瓜的PRSV接种及其组培苗的RT-PCR检测 被引量：1

11

作者 孙玉娟 张雨良 +3 位作者 黄启星 王红星 龚殿 刘志昕 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期132-134,5,共3页

随着番木瓜环斑病毒病的加重,对番木瓜进行PRSV病毒接种,是有效防治PRSV和番木瓜抗PRSV重要措施之一。根据GenBank上已有的PRSV-CP基因序列,设计1对特异引物PRSVCP3/PRSVCP4,同时根据EF183499、HQ424465和美国夏威夷PRSV-CP序列设计保... 随着番木瓜环斑病毒病的加重,对番木瓜进行PRSV病毒接种,是有效防治PRSV和番木瓜抗PRSV重要措施之一。根据GenBank上已有的PRSV-CP基因序列,设计1对特异引物PRSVCP3/PRSVCP4,同时根据EF183499、HQ424465和美国夏威夷PRSV-CP序列设计保守区特异性引物PRSVCP1/PRSVCP2,并对接种后的番木瓜组培苗进行RT-PCR检测。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 接种 rt—pcr

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五峰马里兰烟草花叶病及病毒检测

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作者 张曙光 孙红绪 王彦芬 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第16期3809-3811,共3页

为了摸清五峰马里兰烟草花叶病毒病的发生情况,采用田间调查和实验室RT-PCR技术进行了TMV、CMV和PVY的感染情况检测。结果表明,在五峰马里兰烟区发生的烟草花叶病常表现为TMV、CMV与PVY的复合感染,复合感染率为50%。其中,以TMV感染为主... 为了摸清五峰马里兰烟草花叶病毒病的发生情况,采用田间调查和实验室RT-PCR技术进行了TMV、CMV和PVY的感染情况检测。结果表明,在五峰马里兰烟区发生的烟草花叶病常表现为TMV、CMV与PVY的复合感染,复合感染率为50%。其中,以TMV感染为主,检出率为100%;其次是CMV感染,检出率为50%;然后是PVY感染,检出率为40%。 展开更多

关键词 五峰马里兰烟区 烟草花叶病 病毒检测 rt—pcr

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广东兰花两种主要病毒的检测 被引量：9

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作者 吴竹妍 黎园 +4 位作者 何晓盈 童诗涵 孙辉 向梅梅 饶雪琴 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期14-16,F0002,共4页

采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对44个兰花病样分别检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV),结果显示,有59.1%的兰花检出CyMV,36.4%的兰花检出ORSV,22.7%的兰花复合... 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对44个兰花病样分别检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV),结果显示,有59.1%的兰花检出CyMV,36.4%的兰花检出ORSV,22.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV。采用一步逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对24个兰花病样进行检测,结果有83.3%的兰花检出CyMV,75%的兰花检出ORSV,66.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV,可见RT-PCR检测灵敏度高于ELISA。 展开更多

关键词 兰花 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 DAS—ELISA 一步法rt—pcr 检测

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微茎尖培养脱除樱桃2种病毒试验 被引量：1

14

作者 袁小环 李青 张开春 《中国果树》 北大核心 2005年第1期40-40,42,共2页

关键词 环斑病毒 茎尖培养 苹果 樱桃 叶斑病 PNRSV 果实畸形 坏死 rt—pcr技术 降低

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云南番木瓜花叶病病原鉴定 被引量：4

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作者 孙健 李凡 +3 位作者 王钰丽 王海宁 王崇德 陈海如 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期838-841,共4页

西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木... 西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木瓜材料进行RT-PCR检测,获得的扩增产物和引物设计大小相符;利用双生病毒特异性引物没有检测到双生病毒。确定引起云南番木瓜花叶病的病原为番木瓜环斑病毒。 展开更多

关键词 番木瓜花叶病 番木瓜环斑病毒 rt—pcr 病原鉴定

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