Cdk5抑制剂Roscovitine对糖尿病大鼠肾功能及nestin表达的影响 被引量：7

1

作者 张悦 周毅 +1 位作者 张怡 刘巍 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1177-1178,共2页

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常见的微血管并发症之一。研究显示，足细胞损伤在糖尿病肾病的进展中发挥了重要作用。

关键词 糖尿病 糖尿病肾病 足细胞 roscovitine 细胞周期素依赖性蛋白激酶5 NESTIN

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Roscovitine通过影响核因子κB活化抑制大鼠颈动脉内膜损伤导致的炎性增生 被引量：7

2

作者 赵京山 孙佳欢 +3 位作者 于琨 刘玉 王超 李爱英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期233-238,共6页

目的:探讨roscovitine通过影响核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化抑制大鼠颈动脉内膜损伤导致炎性增生的作用及其分子机制。方法:随机将SD大鼠分成对照组、模型组和治疗组3组,每组20只。模型组采用胰蛋白酶消化法制作颈动脉内... 目的:探讨roscovitine通过影响核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化抑制大鼠颈动脉内膜损伤导致炎性增生的作用及其分子机制。方法:随机将SD大鼠分成对照组、模型组和治疗组3组,每组20只。模型组采用胰蛋白酶消化法制作颈动脉内膜损伤模型;对照组采用假手术用生理盐水代替胰蛋白酶消化步骤,其他同模型组操作;治疗组在分离的颈动脉血管外壁均匀涂抹终浓度为2 g/L roscovitine缓释凝胶0.5 mL,其他同模型组。各组大鼠术后常规饲养4周后取材备检。采用HE染色观察各组形态学变化,采用Western blot法检测IκB的表达变化和磷酸化降解,检测NF-κB的表达变化、磷酸化激活以及其下游环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的表达变化。结果:Roscovitine通过抑制胰蛋白酶损伤诱导的IκB-α磷酸化降解,阻断NF-κB-p65的磷酸化活化,进而下调COX-2表达,抑制VCAM-1、TNF-α和IL-6的表达,从而发挥抑制损伤血管内膜增生的作用。结论:Roscovitine通过影响NF-κB活化抑制大鼠颈动脉内膜损伤导致的炎性增生。 展开更多

关键词 roscovitine 核因子ΚB 颈动脉内膜 炎性增生

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玻璃体腔注射roscovitine对大鼠视网膜中Cdk5/p25活性和tau蛋白磷酸化的抑制作用 被引量：3

3

作者 张金金 盛迅伦 +3 位作者 任英华 容维宁 李慧平 刘雅妮 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期5-9,共5页

背景 视网膜色素变性（RP）与阿尔茨海默病有着共同的发病机制,细胞周期依赖性蛋白激酶（Cdk5）活性及其激活剂参与中枢神经系统的退行性病变.Cdk5抑制剂roscovitine可以抑制Cdk5/p25通路的活性,从而抑制细胞凋亡,但其对RP的影响尚不清... 背景 视网膜色素变性（RP）与阿尔茨海默病有着共同的发病机制,细胞周期依赖性蛋白激酶（Cdk5）活性及其激活剂参与中枢神经系统的退行性病变.Cdk5抑制剂roscovitine可以抑制Cdk5/p25通路的活性,从而抑制细胞凋亡,但其对RP的影响尚不清楚. 目的 探讨玻璃体腔注射roscovitine对RCS大鼠视网膜组织中p35、p25和tau蛋白表达的影响.方法 12只RCS大鼠于出生后17d右眼玻璃体腔注射4 μlroscovitine作为实验眼,左眼未进行任何干预作为对照眼.分别于注射后8d（出生后25 d）和18d（出生后35 d）用过量麻醉法各处死6只大鼠并分离视网膜,Western blot法检测RCS大鼠视网膜组织中Cdk5、p35、p25蛋白的相对表达水平和tau蛋白磷酸化水平,采用分光光度仪（光谱法）测定大鼠视网膜组织340 nm处的吸光度（A）值,定量分析大鼠视网膜中Cdk5/p25激酶活性,采用配对t检验比较实验眼和对照眼的检测结果.结果 玻璃体腔注射后8d和18d,大鼠实验眼视网膜组织中p35蛋白的相对表达水平分别为1.186±0.019和1.069±0.019,明显低于对照眼的1.364±0.016和1.214±0.008,差异均有统计学意义（t=-6.294、-6.477,均P＜0.05）;大鼠实验眼视网膜组织中p25蛋白的相对表达水平分别为0.312±0.009和0.269±0.018,明显低于对照眼的0.595±0.013和0.473±0.011,差异均有统计学意义（t=-36.508、-11.879,均P＜0.05）;实验眼与对照眼间大鼠视网膜中Cdk5蛋白的相对表达水平差异均无统计学意义（t=0.213、-0.540,均P＞0.05）;实验眼大鼠视网膜组织中tau蛋白磷酸化水平均低于对照眼,差异均有统计学意义（t=-9.854、-6.744,均P＜0.05）.玻璃体腔注射后8d和18d,比色定量测定法测得大鼠实验眼视网膜中Cdk5/p25活性分别为（0.003 8±0.000 14）mol/（s·mg）和（0.00201±0.000 11）mol/（s·mg）,明显低于对照眼的（0.005 47±0.000 27） mol/（s·mg）和（0.003 35±0.000 15） mol/（s·mg）,差异均有统计学意义（t=-9.152,P=0.000;t=-9.248,P=0.000）. 结论 玻璃体腔注射roscovitine可以在一定程度上抑制RCS大鼠视网膜组织中Cdk5/p25激酶活性及tau蛋白磷酸化水平. 展开更多

关键词 Cdk5/p25 抑制剂 roscovitine 凋亡 RCS大鼠 视网膜变性/遗传性

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Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制 被引量：2

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作者 何小军 龚建平 +4 位作者 沈阳 李培 陶德定 李小兰 肖徽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第5期464-469,共6页

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt-4和急性T细胞白... 目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt-4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞,用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt-4细胞18h(Jurkat细胞8h)、24h、24h,或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞,用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平。结果:Fas介导的细胞凋亡定位于G1期,Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。Roscovitine作用后G1期的cyclinD3和cyclinE表达升高,靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高,并下调CDK2Thr-160位点的磷酸化水平;Roscovitine和rhFasL共同作用后,CDK2Thr-160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱。Mimosine作用后cyclinD3的表达下降和CDK2Thr-160位点磷酸化水平明显下降,靶细胞被完全阻滞在G1期。Mi-mosine和rhFasL共同作用后cyclinD3、E、A和B1均有所下降,CDK2Thr-160位苏氨酸和CDK1Thr-161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱。结论:Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用,其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关。 展开更多

关键词 roscovitine 含羞草碱 Fas 白血病细胞 细胞凋亡 周期蛋白 周期蛋白依赖性激酶

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Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响 被引量：7

5

作者 王超 刘玉 +3 位作者 安然 赵京山 孙佳欢 李爱英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期376-381,共6页

目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15... 目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15、30μmol·L^(-1)组。MTT比色法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA);流式细胞仪检测细胞周期;荧光定量RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4、CDK5)、细胞周期抑制蛋白(p53、p21、p27)的表达。结果 Roscovitine能抑制VSMC增殖;抑制细胞周期从G_0/G_1期向S期转化。与TNF-α组比较,Roscovitine 5、10、15、30μmol·L^(-1)组能降低细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E蛋白表达,降低细胞周期蛋白依赖激酶CDK4、CDK5蛋白表达,升高细胞周期抑制蛋白p53、p21、p27蛋白表达(P<0.05)。结论 Roscovitine可抑制大鼠VSMC细胞周期进程及增殖活性。 展开更多

关键词 roscovitine 血管平滑肌细胞 增殖 细胞周期 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖性激酶 细胞周期抑制蛋白

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鞘内注射Roscovitine缓解大鼠慢性神经病理性疼痛 被引量：1

6

作者 杨磊 马正良 +2 位作者 史长喜 钟妤 顾小萍 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期335-337,共3页

目的在SD大鼠脊髓后根神经节慢性压迫(CCD)模型上观察鞘内注射Roscovitine的镇痛效果。方法用不锈钢棒(长4mm,直径0.7mm)持续性压迫脊髓背根神经节(DRG)建立慢性神经病理性疼痛模型。术后第7天鞘内注射溶解于DMSO10μl中的Roscovitine50... 目的在SD大鼠脊髓后根神经节慢性压迫(CCD)模型上观察鞘内注射Roscovitine的镇痛效果。方法用不锈钢棒(长4mm,直径0.7mm)持续性压迫脊髓背根神经节(DRG)建立慢性神经病理性疼痛模型。术后第7天鞘内注射溶解于DMSO10μl中的Roscovitine50μg(R组);同时设CCD术后第7天只给予鞘内注射二甲基亚砜(DMSO)10μl的CCD组(C组)和非CCD处理、并给予鞘内注射DMSO10μl的假手术组(S组)。三组均于CCD术前、术后第7天(给药前)及给药后2、24、72h检测机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL)。CCD术前及给药后72h用免疫组化技术检测脊髓背角N-甲基-D天冬门氨酸(NMDA)受体2A亚基(NR2A)的表达水平。结果R组和C组给药前PWMT均较术前显著降低[(3.64±0.40)gvs.(14.38±1.53)g,(3.50±0.77)gvs.(13.25±2.21)g],也明显低于S组的(11.31±1.13)g(P<0.05)。R组和C组给药前PWTL均较术前显著缩短[(9.28±1.18)svs.(18.34±1.23)s,(8.91±1.08)svs.(18.59±1.92)s],也短于S组的(18.45±1.44)s(P<0.05)。R组PWMT在给药后24h较给药前和C组显著增加[(7.32±0.69)gvs.(3.64±0.40)g,(3.86±1.14)g](P<0.05),而给药后2hPWTL较给药前和C组显著延长[(15.46±1.51)svs.(9.28±1.18)s,(9.91±1.07)s(P<0.05)。给药后72h,R组脊髓背角NR2A受体表达水平明显低于C组[(0.21±0.02)vs.(0.26±0.01)](P<0.05)。结论鞘内注射Roscovitine能有效改善CCD大鼠痛行为学反应;其作用可能与抑制脊髓背角NR2A受体表达有关。 展开更多

关键词 roscovitine 神经病理性疼痛 脊髓 NR2A

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STAT3途径介导roscovitine抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖 被引量：1

7

作者 李菁菁 王超 +3 位作者 刘玉 安丽平 张越 李爱英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1390-1394,共5页

目的:探讨roscovitine抑制大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)途径介导的作用机制。方法:组织块贴壁法培养大鼠VSMC,加... 目的:探讨roscovitine抑制大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)途径介导的作用机制。方法:组织块贴壁法培养大鼠VSMC,加入不同浓度的roscovitine预处理15 h后,应用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导其增殖,将细胞分为对照组、TNF-α组及5、10、15和30μmol/L roscovitine+TNF-α组。MTT法和活细胞计数法检测细胞活力和增殖;比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性;real-time PCR及Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及STAT3表达的变化。结果:Roscovitine能抑制TNF-α诱导的VSMC增殖;降低MDA水平,升高SOD活性;抑制PCNA、cyclin D1和ICAM-1表达;阻断STAT3磷酸化活化及核转位。给予STAT3抑制剂WP1066能阻断roscovitine对VSMC增殖的抑制作用。结论:Roscovitine可通过STAT3途径抑制大鼠VSMC增殖。 展开更多

关键词 roscovitine 血管平滑肌细胞 细胞增殖 STAT3信号通路 肿瘤坏死因子α

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基于蛋白质专一性力场和分子动力学模拟研究细胞周期依赖性蛋白激酶5与Roscovitine衍生物的作用机制

8

作者 董珂珂 王璇 +1 位作者 杨雪雨 朱小蕾 《南京工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期127-132,共6页

本文通过分子对接,将极化的蛋白质专一性电荷(PPC)替换AMBERFF03电荷,利用分子动力学模拟(MD)和结合自由能计算等方法研究3种Roscovitine衍生物抑制剂与细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的相互作用,分析药物与其周围残基之间的氢键作用以... 本文通过分子对接,将极化的蛋白质专一性电荷(PPC)替换AMBERFF03电荷,利用分子动力学模拟(MD)和结合自由能计算等方法研究3种Roscovitine衍生物抑制剂与细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的相互作用,分析药物与其周围残基之间的氢键作用以及蛋白质极化对静电作用和范德华作用等的影响。模拟结果表明:3种抑制剂与CDK5的结合模式很相似,范德华力对亲和能有较大贡献。但残基分解分析表明Glu81、Cys83和Lys89与抑制剂形成静电相互作用能显著区分3种不同Roscovitine衍生物类抑制剂的生物活性。 展开更多

关键词 roscovitine衍生物 细胞周期依赖性蛋白激酶5 分子动力学模拟 蛋白质专一性电荷

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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂Roscovitine对3种蓝藻生长和活性的影响

9

作者 周晓潮 王春梅 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期71-76,共6页

为了明确蓝藻中丝氨酸/苏氨酸激酶的功能是否与调控细胞的生长分裂相关,以丝状鱼腥藻7120、单细胞集胞藻6803和聚球藻7002为对象,利用OD750光吸收测定和MTT方法研究了不同浓度丝氨酸苏氨酸激酶抑制剂roscovitine对其生长和脱氢酶活性的... 为了明确蓝藻中丝氨酸/苏氨酸激酶的功能是否与调控细胞的生长分裂相关,以丝状鱼腥藻7120、单细胞集胞藻6803和聚球藻7002为对象,利用OD750光吸收测定和MTT方法研究了不同浓度丝氨酸苏氨酸激酶抑制剂roscovitine对其生长和脱氢酶活性的影响。结果表明:4 h roscovitine处理后对鱼腥藻7120和集胞藻6803生长量影响不大,对聚球藻7002的生长有促进作用。4 h roscovitine的处理对鱼腥藻7120有浓度依赖的显著抑制活性,对集胞藻6803的活性无影响,但是却促进聚球藻7002的活性。药物作用4 d后,7120的生长和活性均显著降低,并有浓度效应;6803的生长量较对照减少,但活性变化不明显;聚球藻7002的生长和活性均未受影响。显微观察结果显示,roscovitine对3种细胞形态没有影响,但药物作用4 d后的7120藻丝体较短。结果表明丝氨酸/苏氨酸抑制剂roscovitine影响丝状藻7120的生长和活性。 展开更多

关键词 roscovitine 鱼腥藻7120 集胞藻6803 聚球藻7002

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ROS对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响 被引量：3

10

作者 潘瑞 屈晓君 +2 位作者 赵晓鹏 马保华 赵晓娥 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第12期31-38,共8页

【目的】研究周期依赖性蛋白激酶抑制剂(Roscovitine,ROS)对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。【方法】将山羊卵母细胞置于含不同浓度(0(对照),20,40,80,120,160,200μmol/L)ROS的成熟液中培养24h统计第一极体排出率,初步筛选... 【目的】研究周期依赖性蛋白激酶抑制剂(Roscovitine,ROS)对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。【方法】将山羊卵母细胞置于含不同浓度(0(对照),20,40,80,120,160,200μmol/L)ROS的成熟液中培养24h统计第一极体排出率,初步筛选山羊卵母细胞成熟培养液中添加ROS的有效浓度;将山羊卵母细胞在含不同浓度(0(对照),40,80,120,160,200μmol/L)ROS的抑制培养液中培养8或16h,再转入常规培养液中培养至24h,统计第一极体排出率,确定ROS适宜的浓度和作用时间。将卵母细胞放入添加40μmol/L ROS的培养液微滴中进行抑制培养,抑制培养8h后分别再常规培养0,2,4,6,8,10,12,14,16h,统计各处理第一极体排出率。将山羊卵母细胞在最佳ROS处理方案下抑制培养后进行孤雌激活,观察孤雌胚的发育情况。【结果】成熟培养液中加入40μmol/LROS抑制培养山羊卵母细胞8h后再转入常规培养液中培养至24h,是比较理想的ROS处理方案。山羊卵母细胞成熟培养的16h以前,全程抑制和抑制8h再常规培养2个试验组第一极体排出率与常规对照组无显著差异;分别培养18,20,22h时,2个试验组第一极体排出率均极显著低于对照组;24h时,抑制8h再常规培养组第一极体排出率(58.76%)与对照组(63.13%)接近,无显著差异。试验组成熟卵母细胞孤雌激活胚的囊胚率(46.75%)显著高于对照组(36.04%,P<0.05)。【结论】山羊COCs成熟培养液中加入40μmol/L ROS培养8h再转入常规培养液培养至24h,是山羊卵母细胞核质同步成熟较适宜的方案,此方案可以有效抑制18～22h核成熟卵母细胞的减数分裂恢复,推迟4～6h成熟,达到培养24h核质同步成熟的目的,提高了体外培养卵母细胞的质量。 展开更多

关键词 roscovitine 卵母细胞 体外成熟 山羊

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TGF-β1调控Cdk5表达在人肾系膜细胞外基质沉积中的作用 被引量：2

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作者 周毅 杨亚坤 +4 位作者 康平 柳丹 夏顺杰 张悦 刘巍 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1688-1693,共6页

目的研究TGF-β1调控Cdk5表达在人肾系膜细胞外基质沉积中的作用。方法10μg·L^(-1)的TGF-β1刺激体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC),检测其对系膜细胞Cdk5、p35/p25表达的影响;转染Cdk5过表达质粒,Western blot、免疫荧光检测胶原... 目的研究TGF-β1调控Cdk5表达在人肾系膜细胞外基质沉积中的作用。方法10μg·L^(-1)的TGF-β1刺激体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC),检测其对系膜细胞Cdk5、p35/p25表达的影响;转染Cdk5过表达质粒,Western blot、免疫荧光检测胶原蛋白FN、CollagenⅣ表达的变化;应用Cdk5激酶活性抑制剂Roscovitine或转染Cdk5干扰质粒,Western blot、Real time-PCR、免疫荧光检测抑制Cdk5对TGF-β1刺激HMC后FN、CollagenⅣ蛋白及mRNA表达的影响。结果TGF-β1作用于HMC后,Cdk5、p35/p25蛋白及mRNA表达均呈时间依赖性增高;与正常对照组相比,转染Cdk5过表达质粒,FN、CollagenⅣ蛋白表达增加,FN(绿色荧光)、CollagenⅣ(红色荧光)增强;与TGF-β1刺激组相比,加用10μmol·L^(-1)的Roscovitine或转染Cdk5干扰质粒,FN、CollagenⅣ蛋白及mRNA表达均减少,FN(绿色荧光)、CollagenⅣ(红色荧光)减弱,而空质粒转染组没有明显变化。结论一定浓度的TGF-β1可诱导系膜细胞内Cdk5表达增加,抑制Cdk5可降低系膜细胞外基质沉积。 展开更多

关键词 TGF-Β1 CDK5 系膜细胞 肾纤维化 基质沉积 roscovitine

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